Name: a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars
Uploaded: 2012-11-15T11:00:00
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TMS wurde von der Harlan Trust Fellowship (GWU) in dieser Studie unterstützt. Die Finanzierung für Feldauflistung und Zucht L. Fasciola und E. delphinii wurde von NSF DEB 0642438 zu JTL vorgesehen.

Ein. Materialvorbereitung <ol><li> Bereiten Nadeln (1-2 um Spitze und 3-4 mm Konus) mit Borosilikatglas Kapillaren und eine Feinpipettenziehvorrichtung. Geräteeinstellungen: Rampe: 561; Geschwindigkeit: 20; Wärme: 560; Verzögerung: 1; Zugkraft: 100; Druck: 500. </li><li> Bereiten Sie die Sammlung Lösung: 60% der Grace-Medium (GM) mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 20% der Gerinnungshemmer Buffer (98 mM NaOH, 186 mM NaCl, 1,7 mM EDTA und 41 mM Zitronensäure, pH 4,5 ergänzt ). Die obige Lösung wird unter ster...

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	<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+cells+and+blood+cell+development+in+the+animal+kingdom.">Blood cells and blood cell development in the animal kingdom.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 677 (2006).</li><li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes:+masters+of+multitasking.">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (7), 542 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15 (1), 1 (2008).</li><li>Fauvarque, M. 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K., Koolman, J., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+hemocyte+counts+with+different+developmental+parameters+during+the+last+larval+instar+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta.">Correlation of hemocyte counts with different developmental parameters during the last larval instar of the tobacco hornworm, Manduca sexta.</a> Arch. Insect Biochem. Physiol. 67 (2), 63 (2008).</li><li>Eleftherianos, I., Joyce, S., ffrench-Constant, R. H., Clarke, D. J., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+tri-trophic+interaction+between+insects,+nematodes+and+Photorhabdus.">Probing the tri-trophic interaction between insects, nematodes and Photorhabdus.</a> Parasitology. 137 (11), 1695 (2010).</li><li>Qayum, A. A., Telang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Protocol+for+Collecting+and+Staining+Hemocytes+from+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti.">A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti.</a> J. Vis. Exp. (51), e2772 (2011).</li></ol>

Methoden zur Extraktion von Blutzellen aus medizinisch wichtige Insekten und Faltern Modell Insekten wurden bisher 9, 14 berichtet. Hemocyte Extraktionsmethoden sind nach den Insektenarten angepasst, das Entwicklungsstadium der Insekten und ihre morphologischen Merkmale. Beispielsweise kann isoliert von Hämolymphe Manduca Larven leicht durch den gekrümmten Horn snipping nahe dem Ende des Bauches 15 durchgeführt werden. Weil Butzen Raupen (Limacodidae) dieses abdominalen Struktur fehlt, ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Feinpipettenziehvorrichtung </td><td> Sutter Instruments </td><td> P-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Borosilikatglasröhrchen </td><td> Sutter Instruments </td><td> B100-50-10 </td><td> OD: 1,0, ID: 0,50 mm </td></tr><tr><td> Grace Medium </td><td> Sigma </td><td> G8142 </td><td></td></tr><tr><td> Fötales Rinderserum </td><td> Thermo Fisher Scientific </td><td> SH3007102 </td><td> Hitzeinaktiviertem </td></tr><tr><td> Dumont Nr. 5 Zange </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11252-40 </td><td></td></tr><tr><td> Neubauer Zählkammer </td><td> Hausser Scientific </td><td> 3200 </td><td></td></tr><tr><td> Plastic tubing </td><td> Tri-Tech </td><td> TT-3-32OD </td><td> OD: 3/32&#39;&#39;, ID: 1/32 &#39; </td></tr><tr><td> Glass medizinische Spritze </td><td> Fortuna Optima </td><td> D-97877 </td><td> 50 ml Volumen </td></tr><tr><td> Blunt Ende Nadel </td><td> Kleinteile </td><td> NE-162PL-25 </td><td> 16 Gauge x 1 &quot;Länge </td></tr></tbody></table>

a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars

Insect Blutzellen (äquivalent zu Säugetieren weißen Blutkörperchen) spielen eine wichtige Rolle in verschiedenen physiologischen Prozessen im gesamten eines Insekts Lebenszyklus 1. In Larvenstadien von Insekten gehören zu den Ordnungen Lepidoptera (Schmetterlinge) und Diptera (true entfernt) werden Blutzellen aus dem Lymphknoten (a spezialisierte hämatopoetische Orgel) oder embryonale Zellen gebildet und kann bis zum erwachsenen Stadium durchgeführt werden. Embryonale Blutzellen in Zellmigration während der Entwicklung und Chemotaxis Regelung bei Entzündungen beteiligt sind. Sie beteiligen sich auch an Zell-Apoptose und sind für Embryogenese 2 unerlässlich. Hämocyten vermitteln den zellulären Arm des Insekts angeborenen Immunantwort, die mehrere Funktionen, wie zum Beispiel Zell-Ausbreitung, Zellaggregation, Bildung von Knötchen, Phagozytose und Einkapselung Eindringlinge 3 umfasst. Sie sind auch verantwortlich für die Koordination bestimmtes Insekt humorale Abwehrmechanismen während der Infektion, wie die produktion von antimikrobiellen Peptiden und anderen Effektormoleküle 4, 5. Hemocyte Morphologie und Funktion wurden vor allem in der genetischen oder physiologischen Insektenmodelle untersucht worden, einschließlich der Fruchtfliege, Drosophila melanogaster 6, 7, die Moskitos Aedes aegypti und Anopheles gambiae 8, 9 und der Tabakschwärmer Manduca sexta 10, 11. Allerdings wenig Informationen existiert derzeit über die Vielfalt, Klassifizierung, Morphologie und Funktion von Blutzellen in nicht-Modell Insektenarten, vor allem diejenigen aus dem wilden 12 gesammelt. Hier beschreiben wir eine einfache und effiziente Protokoll zum Extrahieren Blutzellen von wilden Raupen. Wir verwenden vorletzten Larvenstadium Lithacodes Fasciola (gelb-geschultert slug Motten) (Abbildung 1) und Euclea delphinii (spiny Eiche slug) Raupen (Lepidoptera: Limacodidae) und zeigen, dass ausreichende Mengen Hämolymphe (Insekten Blut)können isoliert und Hämozyten Zahlen von einzelnen Larven gezählt. Dieses Verfahren kann verwendet werden, um effizient zu studieren Hämozyten Typen in diesen Arten sowie in anderen verwandten Lepidoptera Raupen vom Feld geerntet werden, oder er kann ohne weiteres mit immunologischen Tests zur Hämozyten Funktion nach Infektion mit mikrobiellen oder parasitischen Organismen untersuchen 13 kombiniert werden.

Das Protokoll beschrieben erlaubt die Erfassung von einem minimalen Volumen von 10-20 ul von Insekten Hämolymphe von einzelnen Raupen. Hämocyten gesammelt unter Verwendung dieses Verfahrens sind frei von Verklumpungen Zelle, Melanisierung Defekte Gewebereste oder anderen Verunreinigungen. Deshalb Hämozyten kann leicht beobachtet und gezählt werden unter dem Mikroskop, und einige Insekten können in wenigen Hosur beobachtet werden. Wir beobachteten, dass die Mehrzahl der in unserer Hämocyten Proben plasmatocytes <su...

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A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

Insect Blutzellen führen viele wichtige Funktionen, sowohl Immun-und Nicht-immune, in allen Phasen des Insekts Entwicklung. Unsere gegenwärtigen Kenntnisstand hemocyte Typen und Funktion kommt von Studien über Insekten genetischen Modellen. Hier stellen wir ein Verfahren zur Extraktion, Quantifizierung und Visualisierung von Blutzellen von wilden Raupen.

A Simple Protocol für das Extrahieren Hämozyten von Wild Caterpillars

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

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