Name: a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars
Uploaded: 2012-11-15T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

TMS נתמך על ידי מלגת הרלן הנאמנות (GWU) במהלך מחקר זה. מימון לאוסף שדה ורביית L. fasciola וא delphinii סופק על ידי מענק NSF DEB 0642438 לJTL.

1. הכנת חומר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את המחטים (1-2 קצה מיקרומטר ולהתחדד מ&quot;מ 3-4) באמצעות צינורות זכוכית נימי ורוסיליקט וחולץ micropipette. הגדרות מכשיר: רמפה: 561; מהירות: 20; חום: 560; עיכוב: 1; משיכה: 100; לחץ: 500. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון ה?...

<ol>
	<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+cells+and+blood+cell+development+in+the+animal+kingdom.">Blood cells and blood cell development in the animal kingdom.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 677 (2006).</li><li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes:+masters+of+multitasking.">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (7), 542 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15 (1), 1 (2008).</li><li>Fauvarque, M. O., Williams, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+cellular+immunity:+a+story+of+migration+and+adhesion.">Drosophila cellular immunity: a story of migration and adhesion.</a> J. Cell Sci. 124 (9), 1373 (2011).</li><li>Nehme, N. T., Quintin, J., Cho, J. H., Lee, J., Lafarge, M. C., Kocks, C., Ferrandon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+roles+of+the+cellular+and+humoral+responses+in+the+Drosophila+host+defense+against+three+gram-positive+bacterial+infections.">Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections.</a> PLoS One. 6 (3), e14743 (2011).</li><li>Ulvila, J., Vanha-Aho, L. M., R&#228;met, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+phagocytosis+-+still+many+unknowns+under+the+surface.">Drosophila phagocytosis - still many unknowns under the surface.</a> APMIS. 119 (10), 651 (2011).</li><li>Moreira, C. G., Regan, J. C., Zaidman-Remy, A., Jacinto, A., Praq, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+hemocyte+migration:+an+in+vivo+assay+for+directional+cell+migration.">Drosophila hemocyte migration: an in vivo assay for directional cell migration.</a> Methods Mol. Biol. 769, 249 (2011).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+immunity.">Mosquito immunity.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 218 (2010).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36 (12), 891 (2006).</li><li>Jiang, H., Vilcinskas, A., Kanost, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+lepidopteran+insects.">Immunity in lepidopteran insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 181 (2010).</li><li>Eleftherianos, I., Xu, M., Yadi, H., ffrench-Constant, R. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmatocyte-spreading+peptide+(PSP)+plays+a+central+role+in+insect+cellular+immune+defenses+against+bacterial+infection.">Plasmatocyte-spreading peptide (PSP) plays a central role in insect cellular immune defenses against bacterial infection.</a> J. Exp. Biol. 212 (12), 1840 (2009).</li><li>Ribeiro, C., Breh&#233;lin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+haemocytes:+what+type+of+cell+is+that.">Insect haemocytes: what type of cell is that.</a> J. Insect Physiol. 52 (5), 417 (2006).</li><li>Beetz, S., Brinkmann, M., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+between+larval+and+pupal+hemocytes+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta,+determined+by+monoclonal+antibodies+and+density+centrifugation.">Differences between larval and pupal hemocytes of the tobacco hornworm, Manduca sexta, determined by monoclonal antibodies and density centrifugation.</a> J. Insect Physiol. 50 (9), 805 (2004).</li><li>Beetz, S., Holthusen, T. K., Koolman, J., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+hemocyte+counts+with+different+developmental+parameters+during+the+last+larval+instar+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta.">Correlation of hemocyte counts with different developmental parameters during the last larval instar of the tobacco hornworm, Manduca sexta.</a> Arch. Insect Biochem. Physiol. 67 (2), 63 (2008).</li><li>Eleftherianos, I., Joyce, S., ffrench-Constant, R. H., Clarke, D. J., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+tri-trophic+interaction+between+insects,+nematodes+and+Photorhabdus.">Probing the tri-trophic interaction between insects, nematodes and Photorhabdus.</a> Parasitology. 137 (11), 1695 (2010).</li><li>Qayum, A. A., Telang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Protocol+for+Collecting+and+Staining+Hemocytes+from+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti.">A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti.</a> J. Vis. Exp. (51), e2772 (2011).</li></ol>

שיטות לחילוץ hemocytes מחרקים רפואיים חשובים וחרקי מודל lepidopteran העבר דיווח 9, 14. שיטות חילוץ Hemocyte מותאמות על פי מיני חרקים, השלב ההתפתחותי של החרק ותכונות המורפולוגיות שלה. לדוגמה, בידוד hemolymph מזחלי Manduca יכול להתבצע בקלות על ידי חיתוך הקרן המעוקלת סמוך לסוף הבטן <s...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Micropipette חולץ </td><td> סאטר מכשירים </td><td> P-1000 </td><td></td></tr><tr><td> צינורות זכוכית ורוסיליקט </td><td> סאטר מכשירים </td><td> B100-50-10 </td><td> OD: 1.0, מזהה: 0.50 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> הבינוני של גרייס </td><td> סיגמא </td><td> G8142 </td><td></td></tr><tr><td> סרום שור עוברי </td><td> תרם הפישר סיינטיפיק </td><td> SH3007102 </td><td> חום מומת </td></tr><tr><td> דומון # 5 מלקחיים </td><td> כלי המדע פיין </td><td> 11252-40 </td><td></td></tr><tr><td> נויבאואר hemocytometer </td><td> אוסר מדעי </td><td> 3200 </td><td></td></tr><tr><td> פלסטיק טוביםng </td><td> Tri-Tech </td><td> TT-3-32OD </td><td> OD: 3/32&#39;&#39;, מזהה: 1/32 &#39; </td></tr><tr><td> זכוכית רפואית מזרק </td><td> פורטונה אופטימה </td><td> D-97877 </td><td> 50 מיליליטר נפח </td></tr><tr><td> מחט קצה קהה </td><td> חלקים קטנים </td><td> NE-162PL-25 </td><td> 16 מד x 1 &quot;אורך </td></tr></tbody></table>

a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars

hemocytes חרקים (שווה ערך לתאי דם לבנים יונקים) משחק תפקיד חשוב בכמה תהליכים פיסיולוגיים לאורך כל מחזור החיים של חרק 1. בשלבי זחל של חרקים השייכים לצווים של פרפרים (עשים ופרפרים) וDiptera (זבובים אמיתיים), hemocytes נוצרים מבלוטת הלימפה (hematopoietic איבר מיוחד) או התאים עובריים ויכולה להתבצע דרך לשלב הבגרות. hemocytes העוברי מעורב בנדידת תאים במהלך התפתחות הרגולציה וchemotaxis במהלך דלקת. הם גם ייקחו חלק באפופטוזיס תא והם חיוניים להתפתחות עוברת 2. Hemocytes לתווך זרוע התאית של תגובת החיסון המולדת חרקים שכוללת מספר פונקציות, כגון תא, צבירה מתפשטת תא, היווצרות של גושים, phagocytosis ואנקפסולציה של פולשים זרים 3. הם גם אחראים לניהול הגנה הומורלית חרקים מסוימות במהלך זיהום, כגון יחסי הציבורoduction מיקרוביאלית של פפטידים ומולקולות אחרות מפעיל 4, 5. המורפולוגיה והתפקוד Hemocyte שנחקרו בעיקר במודלים של חרקים גנטיים או פיסיולוגיים, כוללים זבוב פרות, דרוזופילה melanogaster 6, 7, יתושי Aedes aegypti ואנופלס gambiae 8, 9 והטבק hornworm, Manduca 10 סקסטה, 11. עם זאת, מעט מידע קיים היום על הגיוון, סיווג, מורפולוגיה והתפקוד של hemocytes במינים שאינם מודל חרקים, במיוחד אלה שנאספו מ12 הפרועים. כאן אנו מתארים פרוטוקול פשוט ויעיל לחילוץ hemocytes מזחלים פרא. אנו משתמשים instar Lithacodes fasciola הלפני האחרון (עש קליע צהוב כתפיים) (איור 1) וEuclea delphinii (קליע אלון קוצני) זחלים (פרפרים: Limacodidae) ומראים כי היקפים מספיקים של hemolymph (דם חרקים)יכול להיות מבודד ומספרי hemocyte נספרו מזחלי פרט. שיטה זו יכולה להיות מנוצלת ביעילות ללמוד סוגי hemocyte במינים אלה, כמו גם בזחלי lepidopteran נלווים אחרים שנקטפו מהשדה, או שזה יכול להיות בקלות בשילוב עם מבחנים אימונולוגיים שנועדו לחקור את תפקוד hemocyte בעקבות הידבקות בחיידקים או אורגניזמים טפילים 13.

הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר גביית היקף מינימאלי של 10-20 μl של hemolymph חרקים מזחלים בודדים. Hemocytes שנאסף בשיטה זו היא ללא clumping תא, פגמי melanization, פסולת רקמה או מזהמים אחרים. לכן hemocytes ניתן להבחין בקלות וספר מתחת למיקרוסקופ, וכמה חרקים ניתן להבחין בתוך כמה Hosur. הבחנו כי רוב hemocytes ב?...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

hemocytes חרקים למלא תפקידים חשובים רבים, הוא חיסון ושאינם מחוסנים, לאורך כל שלבי התפתחות חרקים. הידע הנוכחי שלנו של הסוגים והתפקוד hemocyte מגיע ממחקרים על מודלים גנטיים של חרקים. כאן, אנו מציגים שיטה לחילוץ, כימות והמחשת hemocytes מזחלים פרא.

פרוטוקול פשוט לחילוץ Hemocytes מזחלי Wild

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

Research

JoVE Journal

Biology

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

חילוץ ה-DNA של חיידקים במעיים של טרמיטים (Zootermopsis Angusticollis) באופן חזותי חיידקים גוט

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

פרוטוקול נוירונים culturing הסימפתטית מן הגרעינים עכברוש צוואר הרחם מעולה (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

פרוטוקול לייצור KLRG1 Tetramer

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

PCR מבוסס genotyping שיטה להבחין בין זנים wild-type ו נוי של Imperata cylindrica</em

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in ...

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

SIVQ-LCM פרוטוקול עבור מכשיר ArcturusXT

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

מבדק פשוט עבור הערכת גורמי הגדילה של אנדותל כלי דם

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

בידוד סינון של חומצות גרעין: שיטת הפקת DNA פשוטה ומהירה

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

שיטה לחילוץ פיגמנטים מן קלמארי<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

Cephalopods can undergo rapid and adaptive changes in dermal coloration for sensing, communication, defense, and reproduction purposes. These capabilities ...