Name: a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars
Uploaded: 2012-11-15T11:00:00
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TMS는 본 연구 기간 동안 할란 신뢰 휄로 십 (GWU)에서 지원되었습니다. 필드 컬렉션에 대한 자금 및 L.를 양성 fasciola와 E. delphinii는 JTL에 NSF 부여 DEB 0,642,438에 의해 제공되었다.

1. 재료 준비 <ol><li> 붕규산 유리 모세관 튜브 및 micropipette의 풀러를 사용하여 바늘 (1-2 μm 팁과 3~4mm 테이퍼)를 준비합니다. 악기 설정 : 램프 : 561, 속도 : 20, 열 : 560, 지연 : 1, 풀다운 : 100, 압력 : 500. </li><li> 태아 소 혈청 (FBS)의 10 % 항응고제 버퍼의 20 % (98 MM NaOH, 186 MM NaCI, 1.7 MM EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 41 MM 구연산, pH를 4.5로 보충 그레이스의 중간 (GM)의 60 %를 수집 솔루션을 준비 ). 위의...

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	<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+cells+and+blood+cell+development+in+the+animal+kingdom.">Blood cells and blood cell development in the animal kingdom.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 677 (2006).</li><li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes:+masters+of+multitasking.">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (7), 542 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15 (1), 1 (2008).</li><li>Fauvarque, M. O., Williams, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+cellular+immunity:+a+story+of+migration+and+adhesion.">Drosophila cellular immunity: a story of migration and adhesion.</a> J. Cell Sci. 124 (9), 1373 (2011).</li><li>Nehme, N. T., Quintin, J., Cho, J. H., Lee, J., Lafarge, M. C., Kocks, C., Ferrandon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+roles+of+the+cellular+and+humoral+responses+in+the+Drosophila+host+defense+against+three+gram-positive+bacterial+infections.">Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections.</a> PLoS One. 6 (3), e14743 (2011).</li><li>Ulvila, J., Vanha-Aho, L. M., R&#228;met, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+phagocytosis+-+still+many+unknowns+under+the+surface.">Drosophila phagocytosis - still many unknowns under the surface.</a> APMIS. 119 (10), 651 (2011).</li><li>Moreira, C. G., Regan, J. C., Zaidman-Remy, A., Jacinto, A., Praq, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+hemocyte+migration:+an+in+vivo+assay+for+directional+cell+migration.">Drosophila hemocyte migration: an in vivo assay for directional cell migration.</a> Methods Mol. Biol. 769, 249 (2011).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+immunity.">Mosquito immunity.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 218 (2010).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36 (12), 891 (2006).</li><li>Jiang, H., Vilcinskas, A., Kanost, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+lepidopteran+insects.">Immunity in lepidopteran insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 181 (2010).</li><li>Eleftherianos, I., Xu, M., Yadi, H., ffrench-Constant, R. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmatocyte-spreading+peptide+(PSP)+plays+a+central+role+in+insect+cellular+immune+defenses+against+bacterial+infection.">Plasmatocyte-spreading peptide (PSP) plays a central role in insect cellular immune defenses against bacterial infection.</a> J. Exp. Biol. 212 (12), 1840 (2009).</li><li>Ribeiro, C., Breh&#233;lin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+haemocytes:+what+type+of+cell+is+that.">Insect haemocytes: what type of cell is that.</a> J. Insect Physiol. 52 (5), 417 (2006).</li><li>Beetz, S., Brinkmann, M., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+between+larval+and+pupal+hemocytes+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta,+determined+by+monoclonal+antibodies+and+density+centrifugation.">Differences between larval and pupal hemocytes of the tobacco hornworm, Manduca sexta, determined by monoclonal antibodies and density centrifugation.</a> J. Insect Physiol. 50 (9), 805 (2004).</li><li>Beetz, S., Holthusen, T. K., Koolman, J., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+hemocyte+counts+with+different+developmental+parameters+during+the+last+larval+instar+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta.">Correlation of hemocyte counts with different developmental parameters during the last larval instar of the tobacco hornworm, Manduca sexta.</a> Arch. Insect Biochem. Physiol. 67 (2), 63 (2008).</li><li>Eleftherianos, I., Joyce, S., ffrench-Constant, R. H., Clarke, D. J., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+tri-trophic+interaction+between+insects,+nematodes+and+Photorhabdus.">Probing the tri-trophic interaction between insects, nematodes and Photorhabdus.</a> Parasitology. 137 (11), 1695 (2010).</li><li>Qayum, A. A., Telang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Protocol+for+Collecting+and+Staining+Hemocytes+from+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti.">A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti.</a> J. Vis. Exp. (51), e2772 (2011).</li></ol>

의학적으로 중요한 곤충 lepidopteran 모델 곤충에서 hemocytes를 추출하기위한 방법은 이전 9, 14보고되었습니다. Hemocyte 추출 방법은 곤충 종에 따라 조정되며, 곤충 및 형태학의 기능의 발달 단계. 예를 들어, Manduca의 애벌레에서 hemolymph 절연은 쉽게 복부 15의 끝 부분 곡선 경적을 snipping 의해 수행 할 수 있습니다. 슬러그 유충 (Limacodidae)이 복부 구조를 부족하기 때문에, 우리는 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> Micropipette 풀러 </td><td> 셔터 악기 </td><td> P-1000 </td><td></td></tr><tr><td> 붕규산 유리 관 </td><td> 셔터 악기 </td><td> B100-50-10 </td><td> OD : 1.0, ID : 0.50 mm </td></tr><tr><td> 그레이스의 중간 </td><td> 시그마 </td><td> G8142 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> 온도 피셔 과학 </td><td> SH3007102 </td><td> inactivated 열 </td></tr><tr><td> 뒤몽 # 5 포셉 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 11252-40 </td><td></td></tr><tr><td> Neubauer hemocytometer </td><td> Hausser 과학 </td><td> 3200 </td><td></td></tr><tr><td> 플라스틱 tubiNG </td><td> 트라이 테크 </td><td> TT-3-32OD </td><td> OD : 3 / 32 인치, ID : 1 / 32 &#39; </td></tr><tr><td> 유리 의료 주사기 </td><td> 포르투나 Optima </td><td> D-97877 </td><td> 50 ML 볼륨 </td></tr><tr><td> 무딘 끝 바늘 </td><td> 소형 부품 </td><td> NE-162PL-25 </td><td> 16 게이지 X 1 &quot;길이 </td></tr></tbody></table>

a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars

곤충 hemocytes은 (포유류의 백혈구에 해당) 곤충의 수명주기에 걸쳐 한 여러 생리적 과정에 중요한 역할을한다. Lepidoptera (나방과 나비)와 Diptera (진정한 파리)의 주문에 속하는 곤충의 애벌레의 단계에서 hemocytes은 림프의 선 (전문 조혈 장기) 또는 배아 세포로부터 형성되어 성인 무대에를 통해 수행 할 수 있습니다. 배아 hemocytes는 염증이 기간 동안 개발과 chemotaxis 규정 동안 세포 이주에 참여하고 있습니다. 또한 세포 apoptosis에 참여하고 embryogenesis 2 필수적입니다. Hemocytes는 세포 확산, 세포 집합, nodules의 형성, phagocytosis 및 외국 침략자 3의 캡슐화와 같은 여러 기능을 포함하는 곤충 본래 면역 반응의 세포 팔을 중재. 그들은 같은 PR로도 감염시 특정 곤충 체액 방어에서 일을 꾸미고 책임이 있습니다항균 펩티드 및 기타 이펙터 분자 4, 5 oduction. Hemocyte 형태 및 기능은 주로 과일 파리, Drosophila melanogaster 6, 7, 모기 Aedes aegypti 및 아노펠레스 gambiae 8, 9, 담배 hornworm, Manduca sexta 10, 11을 포함, 유전자 또는 생리 곤충 모델에서 공부하고 있습니다. 그러나, 작은 정보는 현재 다양성, 분류, 형태, 특히 비 모델 곤충 종, 야생 12 일부터 수집 된 사람들의 hemocytes의 기능에 대해 존재합니다. 여기 야생 유충에서 hemocytes를 추출하기위한 간단하고 효율적인 프로토콜을 설명합니다. 우리는 어미에서 두 번째의 음절 instar Lithacodes fasciola (노란색 어깨 슬러그 나방) (그림 1)과 Euclea delphinii (가시 오크 총알) 유충을 (Lepidoptera : Limacodidae)를 사용하여 보여주고 hemolymph의 충분한 볼륨 (곤충 혈액)격리 및 hemocyte 번호는 개인 애벌레에서 계산 할 수 있습니다. 이 방법은 효율적으로 이러한 종뿐만 아니라 현장에서 수확 기타 관련 lepidopteran의 유충에 hemocyte 유형을 공부하는 데 사용할 수 있습니다, 또는 그것은 쉽게 미생물 또는 기생 생물 13 감염에 따라 hemocyte 기능을 조사하기위한 면역 assays과 함께 사용할 수 있습니다.

여기에 설명 된 프로토콜은 각각의 유충에서 곤충 hemolymph의 10-20 μl의 최소 볼륨의 수집 할 수 있습니다. 이 방법을 사용하여 수집 Hemocytes은 셀 거리며 걷게, melanization 결함, 조직 파편이나 기타 오염 물질 무료입니다. 따라서 hemocytes은 쉽게 관찰하고 현미경으로 계산하고, 여러 곤충은 몇 hosur에서 관찰 할 수있다 할 수 있습니다. 우리는 우리의 샘플에서 hemocytes의 대부분이 plasmatocytes 3 ​...

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A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

곤충 hemocytes는 곤충 개발의 모든 단계에 걸쳐 면역 및 비 면역 모두 여러 중요한 기능을, 실시합니다. hemocyte 유형 및 기능의 현재 우리의 지식은 곤충 유전자 모델에 대한 연구에서 비롯됩니다. 여기, 우리는 추출 정량화과 야생 유충에서 hemocytes을 시각화하는 방법을 제시한다.

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Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

Research

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