Name: a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars
Uploaded: 2012-11-15T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

TMS был поддержан Харлан целевых стипендий (УДВ) в ходе этого исследования. Финансирование коллекции полей и разведении L. фасциола и E. delphinii был предоставлен грант NSF DEB 0642438 на JTL.

1. Подготовка материала <ol><li> Подготовка иглы (1-2 мкм и чаевые 3-4 конус мм) с использованием боросиликатного стеклянные капилляры и съемник микропипетки. Инструмент настройки: рампа: 561; скорость: 20; тепла: 560; Задержка: 1; тяга: 100; Давление: 500. </li><li> Подготовить коллекцию решения: 60% Средний Г...

<ol>
	<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+cells+and+blood+cell+development+in+the+animal+kingdom.">Blood cells and blood cell development in the animal kingdom.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 677 (2006).</li><li>Wood, W., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+embryonic+haemocytes:+masters+of+multitasking.">Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (7), 542 (2007).</li><li>Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+cellular+immune+response.">The insect cellular immune response.</a> Insect Sci. 15 (1), 1 (2008).</li><li>Fauvarque, M. O., Williams, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+cellular+immunity:+a+story+of+migration+and+adhesion.">Drosophila cellular immunity: a story of migration and adhesion.</a> J. Cell Sci. 124 (9), 1373 (2011).</li><li>Nehme, N. T., Quintin, J., Cho, J. H., Lee, J., Lafarge, M. C., Kocks, C., Ferrandon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+roles+of+the+cellular+and+humoral+responses+in+the+Drosophila+host+defense+against+three+gram-positive+bacterial+infections.">Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections.</a> PLoS One. 6 (3), e14743 (2011).</li><li>Ulvila, J., Vanha-Aho, L. M., R&#228;met, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+phagocytosis+-+still+many+unknowns+under+the+surface.">Drosophila phagocytosis - still many unknowns under the surface.</a> APMIS. 119 (10), 651 (2011).</li><li>Moreira, C. G., Regan, J. C., Zaidman-Remy, A., Jacinto, A., Praq, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+hemocyte+migration:+an+in+vivo+assay+for+directional+cell+migration.">Drosophila hemocyte migration: an in vivo assay for directional cell migration.</a> Methods Mol. Biol. 769, 249 (2011).</li><li>Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+immunity.">Mosquito immunity.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 218 (2010).</li><li>Castillo, J. C., Robertson, A. E., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+from+the+mosquitoes+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Characterization of hemocytes from the mosquitoes Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 36 (12), 891 (2006).</li><li>Jiang, H., Vilcinskas, A., Kanost, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+lepidopteran+insects.">Immunity in lepidopteran insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 708, 181 (2010).</li><li>Eleftherianos, I., Xu, M., Yadi, H., ffrench-Constant, R. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmatocyte-spreading+peptide+(PSP)+plays+a+central+role+in+insect+cellular+immune+defenses+against+bacterial+infection.">Plasmatocyte-spreading peptide (PSP) plays a central role in insect cellular immune defenses against bacterial infection.</a> J. Exp. Biol. 212 (12), 1840 (2009).</li><li>Ribeiro, C., Breh&#233;lin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+haemocytes:+what+type+of+cell+is+that.">Insect haemocytes: what type of cell is that.</a> J. Insect Physiol. 52 (5), 417 (2006).</li><li>Beetz, S., Brinkmann, M., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+between+larval+and+pupal+hemocytes+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta,+determined+by+monoclonal+antibodies+and+density+centrifugation.">Differences between larval and pupal hemocytes of the tobacco hornworm, Manduca sexta, determined by monoclonal antibodies and density centrifugation.</a> J. Insect Physiol. 50 (9), 805 (2004).</li><li>Beetz, S., Holthusen, T. K., Koolman, J., Trenczek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+hemocyte+counts+with+different+developmental+parameters+during+the+last+larval+instar+of+the+tobacco+hornworm,+Manduca+sexta.">Correlation of hemocyte counts with different developmental parameters during the last larval instar of the tobacco hornworm, Manduca sexta.</a> Arch. Insect Biochem. Physiol. 67 (2), 63 (2008).</li><li>Eleftherianos, I., Joyce, S., ffrench-Constant, R. H., Clarke, D. J., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+tri-trophic+interaction+between+insects,+nematodes+and+Photorhabdus.">Probing the tri-trophic interaction between insects, nematodes and Photorhabdus.</a> Parasitology. 137 (11), 1695 (2010).</li><li>Qayum, A. A., Telang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Protocol+for+Collecting+and+Staining+Hemocytes+from+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti.">A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti.</a> J. Vis. Exp. (51), e2772 (2011).</li></ol>

Методы для извлечения гемоцитов из важных медицинских насекомых и чешуекрылых насекомых модель уже сообщалось ранее 9, 14. Гемоцитов методов добычи адаптированы в соответствии с видов насекомых, стадии развития насекомого и его морфологические особенности. Например, гемолимфы и?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Микропипетки съемник </td><td> Sutter Instruments </td><td> P-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Боросиликатного стеклянные трубки </td><td> Sutter Instruments </td><td> B100-50-10 </td><td> OD: 1.0, ID: 0,50 мм </td></tr><tr><td> Грейс среднего </td><td> Сигма </td><td> G8142 </td><td></td></tr><tr><td> Плод бычьего сывороточного </td><td> Thermo Fisher Scientific </td><td> SH3007102 </td><td> Тепло инактивированная </td></tr><tr><td> Дюмон # 5 пинцет </td><td> Изобразительных инструментов науки </td><td> 11252-40 </td><td></td></tr><tr><td> Neubauer гемоцитометр </td><td> Hausser Научные </td><td> 3200 </td><td></td></tr><tr><td> Пластиковые Tubiнг </td><td> Tri-Tech </td><td> TT-3-32OD </td><td> OD: 3/32&#39;&#39;, ID: 1/32 &quot; </td></tr><tr><td> Стекло медицинский шприц </td><td> Фортуна Optima </td><td> D-97877 </td><td> Объем 50 мл </td></tr><tr><td> Тупой иглой конца </td><td> Мелкие детали </td><td> NE-162PL-25 </td><td> Калибра 16 х 1 &quot;длиной </td></tr></tbody></table>

a simple protocol for extracting hemocytes from wild caterpillars

Насекомое гемоцитов (эквивалент млекопитающих белых клеток крови) играет важную роль в ряде физиологических процессов протяжении всего жизненного цикла насекомого 1. В личиночной стадии насекомых, принадлежащих к приказу чешуекрылых (бабочек) и двукрылых (истинные мухи), гемоцитов формируются из лимфатических желез (специализированных кроветворных органов) или эмбриональных клеток и может быть доведена до взрослой стадии. Эмбриональные гемоцитов участвуют в миграции клеток в процессе развития и хемотаксис регулирования при воспалении. Они также принимают участие в апоптоз клеток и необходимы для эмбриогенеза 2. Гемоциты посредником сотовой руку насекомых врожденного иммунного ответа, который включает в себя несколько функций, таких как сотовые распространения, агрегация клеток, образование узелков, фагоцитозу и инкапсуляции иноземных захватчиков 3. Они также несут ответственность за организацию конкретных насекомых гуморальной защиты во время инфекции, такие как PRoduction антимикробных пептидов и других эффекторных молекул 4, 5. Гемоцитов морфологии и функции в основном были изучены генетические или физиологические насекомых моделей, в том числе плодовой мухи, дрозофилы 6, 7, комары Aedes Aegypti и Anopheles gambiae 8, 9 и табачных hornworm, Manduca Sexta 10, 11. Тем не менее, мало информации, в настоящее время существует около разнообразие, классификация, морфология и функция гемоцитов в не-моделью видов насекомых, особенно те, собранных в дикой природе 12. Здесь мы опишем простой и эффективный протокол для извлечения гемоцитов от диких гусениц. Мы используем предпоследнего возраста Lithacodes фасциола (желто-плечи пули моль) (рис. 1) и Euclea delphinii (колючий дуб пули) гусеницы (Lepidoptera: Limacodidae) и показать, что достаточных объемов гемолимфы (крови насекомых)могут быть выделены и гемоцитов номера отсчитывается от отдельных личинок. Этот метод может быть использован для эффективного изучения типов гемоцитов в этих видов, а также в других смежных гусениц чешуекрылых собрали с поля, или он может быть легко сочетается с иммунологических анализов предназначен для исследования гемоцитов функции после инфекции микроорганизмов или паразитов 13.

В протоколе описаны здесь позволяет собирать минимальный объем 10-20 мкл гемолимфы насекомых из отдельных гусениц. Гемоциты собранных с помощью этого метода являются бесплатными клеточных слипания, меланизации дефектов тканей мусора и других загрязнений. Поэтому гемоцитов можно легко...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars at JoVE.com

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

Насекомое гемоцитов выполнять многие важные функции, как иммунные и не иммунные, на всех этапах развития насекомых. Наши нынешние знания гемоцитов типов и функции в исследованиях на насекомых генетических моделей. Здесь мы представляем метод для извлечения, количественной оценки и визуализации гемоцитов от диких гусениц.

Простой протокол для извлечения Гемоциты от диких гусениц

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

Research

JoVE Journal

Biology

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

Извлечение ДНК из Gut микробы Термит (Zootermopsis Angusticollis) и Визуализация Gut Микробы

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Протокол Mosquito воспитание (А. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Пиросеквенирования: Простой метод для точного генотипирования

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Протокол для культивирования симпатических нейронов крысы из верхних шейных ганглиев (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

Протокол Производство KLRG1 тетрамер

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

ПЦР-метод генотипирования различать дикого типа и декоративных многообразия Императы цилиндрической</em

Wild-type I. cylindrica (cogongrass) is one of the top ten worst invasive plants in the world, negatively impacting agricultural and natural resources in ...

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

SIVQ-НОК Протокол о ArcturusXT инструмент

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

Простой биопроб для оценки факторов роста эндотелия сосудов

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

Фильтрация Выделение нуклеиновых кислот: Простой и быстрый ДНК Метод экстракции

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

Метод извлечения Пигменты из кальмаров<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

Cephalopods can undergo rapid and adaptive changes in dermal coloration for sensing, communication, defense, and reproduction purposes. These capabilities ...