Name: using the blt humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model
Uploaded: 2012-12-18T12:00:00
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我々は彼らの技術支援のためにアルビン·ウェルチとラリー激痛に感謝したいと思います。 CIRM新学部賞RN2-00902から1。この作品は、米国国立衛生研究所（NIH）賞P50 CA086306、カリフォルニア再生医療研究所（CIRM）助成RC1-00149から1とRS1-00203-1によって一部で賄われていたトランスレーショナル医学のために、カリフォルニア工科大学、カリフォルニア大学ロサンゼルス校（UCLA）の共同センター、エイズ研究（CFAR）NIH / NIAID AI028697、UCLAのエイズ研究所、CIRMツールと技術賞RT1-01126、およびUC Multicampus研究プログラムとカリフォルニアからの取り組みのためのUCLAのセンター抗ウイルス薬の発見のためのセンター（番号MRPI-143226）。

BLTマウスのAの生成胎児組織及びCD34ヒト造血幹細胞の調製（1）処理、（2）ヒト組織の移植、および（3）二次移植：BLTマウスの発生が3（3）の部分に分かれています。すべてのプロトコルのために、私たちは試薬情報と表1を提供してきました。 1。 CD34ヒト造血幹細胞の組織の処理と分離さまざまな臓器調達...

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	<li>McCune, J. M., Namikawa, R., Kaneshima, H., Shultz, L. D., Lieberman, M., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SCID-hu+mouse:+murine+model+for+the+analysis+of+human+hematolymphoid+differentiation+and+function.">The SCID-hu mouse: murine model for the analysis of human hematolymphoid differentiation and function.</a> Science. 241 (4873), 1632-1639 (1988).</li><li>Bristol, G. C., Gao, L. Y., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+maintenance+of+SCID-hu+mice+for+HIV+research.">Preparation and maintenance of SCID-hu mice for HIV research.</a> Methods. 12 (4), 343-347 (1997).</li><li>Mosier, D. E., Gulizia, R. J., Baird, S. M., Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+a+functional+human+immune+system+to+mice+with+severe+combined+immunodeficiency.">Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency.</a> Nature. 335 (6187), 256-259 (1988).</li><li>Melkus, M. W., Estes, J. D., Padgett-Thomas, A., Gatlin, J., Denton, P. W., Othieno, F. A., Wege, A. K., Haase, A. T., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1.">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nat. Med. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li><li>Denton, P. W., Estes, J. D., Sun, Z., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Powell, D. A., Payne, D., Haase, A. T., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiretroviral+pre-exposure+prophylaxis+prevents+vaginal+transmission+of+HIV-1+in+humanized+BLT+mice.">Antiretroviral pre-exposure prophylaxis prevents vaginal transmission of HIV-1 in humanized BLT mice.</a> PLoS Med. 5 (1), e16 (2008).</li><li>Sun, Z., Denton, P. W., Estes, J. D., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Melkus, M. W., Padgett-Thomas, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+transmission,+systemic+infection,+and+CD4++T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1.">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4+ T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> J. Exp. Med. 204 (4), 705-714 (2007).</li><li>Shimizu, S., Hong, P., Arumugam, B., Pokomo, L., Boyer, J., Koizumi, N., Kittipongdaja, P., Chen, A., Bristol, G., Galic, Z., Zack, J. A., Yang, O., Chen, I. S., Lee, B., An, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model.">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li><li>V, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+HIV+Latency+in+Humanized+BLT+Mice.">Generation of HIV Latency in Humanized BLT Mice.</a> J. Virol. 86 (1), 630-634 (2012).</li><li>Vatakis, D. N., Koya, R. C., Nixon, C. C., Wei, L., Kim, S. G., Avancena, P., Bristol, G., Baltimore, D., Kohn, D. B., Ribas, A., Radu, C. G., Galic, Z., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+from+antigen-specific+CD8+T+cells+generated+in+vivo+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells.">Antitumor activity from antigen-specific CD8 T cells generated in vivo from genetically engineered human hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (51), 1408-1416 (2011).</li></ol>

生体 PETイメージングでと相まって修正BLTヒト化マウスモデルは、慢性的なヒトの疾患を研究するための強力なツールです。このシステムは、BLTのマウスモデルとHIV研究のための限られた範囲を超えて進歩それを取る。また、それは彼らが臨床の現場に到達する前に、我々は様々な遺伝子治療プロトコールならびに診断技術を調べることができる素晴らしいシステムです。マウ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td> PBS </td><td>インビトロジェン</td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> A1049101 </td><td></td></tr><tr><td>イスコフ</td><td></td><td> 12440061 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td></td><td> 16000085 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼタイプIV </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C5138 </td><td></td></tr><tr><td>ヒアルロニダーゼ</td><td></td><td> H3506 </td><td></td></tr><tr><td> DNアーゼI </td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 10104159001 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> Piptazo（ゾシン） </td><td>ファイザー</td><td></td><td> <a href="http://labeling.pfizer.com/showlabeling.aspx?id=416" target="_blank">ピペラシリン/タゾバクタムの組み合わせ</a> </td></tr><tr><td>フィコール（のFicoll-Paqueプラス） </td><td> GEヘルスケア·ライフサイエンス</td><td> 17-1440-02 </td><td></td></tr><tr><td> MACSバッファー</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td>コメントを参照してください</td><td> MACSバッファー：0.5％ウシ胎児血清および2 mMクエン酸デキストロース式-添加PBS </td></tr><tr><td> CD34マイクロビーズキット</td><td></td><td> 130-046-702 </td><td></td></tr><tr><td> LSの列</td><td></td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td>レトロネクチン</td><td>タカラ</td><td> T100A </td><td></td></tr><tr><td&gt;マトリゲル</td><td> BD Biosciences社</td><td> 354263 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルオラン</td><td>バクスター</td><td></td><td> <a href="http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html" target="_blank">http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html</a> </td></tr><tr><td>カルプロフェン（Rimadyl） </td><td>ファイザーアニマルヘルス</td><td></td><td> <a href="https://www.rimadyl.com/default.aspx" target="_blank">https://www.rimadyl.com/default.aspx</a> </td></tr></tbody></table>

using the blt humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model

マウスなどの小動物モデルは広範囲にヒトの疾患を研究するために、新しい治療介入を開発するために使用されている。これらの研究から得られた豊富な情報にもかかわらず、マウスの免疫ならびに、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）感染症などのウイルス性疾患の種特異性のユニークな特性は、ヒト化マウスモデルの開発につながった。以前のモデルは、C、B 17のscid / scidマウスと呼ばれるヒト胎児胸腺および胎児肝臓の移植の使用を必要となた/ LIV（SCID-huの）1、2またはヒト末梢血白血球の養子移植不全（SCID-huPBL 2）3。両方のモデルは、主にHIV感染の研究のために利用された。 これらのモデルの両方の主な制限の一つは、HIV感染症を研究するための、より生理学的に適切なモデルを作るために周囲の人間の免疫細胞の安定な再構成の欠如だった。この目的を達成するために、BLTハムanizedマウスモデルが開発されました。 BLTは骨髄/肝臓/胸腺の略です。このモデルでは、6から8週齢NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ（NSG）は、免疫不全マウスにのみ第二のヒト造血幹細胞移植4が続くことに、SCID-huマウスモデルのように、なた/ LIVインプラントを受ける。このシステムの利点は、周囲の人間の免疫システムの完全な再構成である。このモデルは、HIV感染とレイテンシ5-8を研究するために使用されています。 私達は私達が自家hHSC 7,9形質導入の注入が続くなた/ LIVインプラントを構築するために遺伝子改変されたヒト造血幹細胞（hHSC）を使用したこのモデルの修正版を作成した。このアプローチでは、遺伝的に修飾された系統の生成をもたらす。さらに重要なことは、我々は、メラノーマ特異的T細胞受容体を発現している機能的な細胞傷害性T細胞（CTL）を生成する可能性を調べるために、このシステムを適応。このモデルを用いて、我々は、腫瘍退縮（9）を決定するために、ライブの陽電子放射断層撮影（PET）イメージングを活用したトランスジェニックCTLの機能を評価することができました。 このプロトコルの目的は、これらのトランスジェニックマウスを作製し、ライブのPETイメージングを用いたin vivoでの有効性の評価のプロセスを記述することである。我々はヒト組織およびレンチウイルスベクターを使用するので、注意点としては、、私たちの施設は特別な予防措置（BSL2 +）のバイオセーフティーレベル2（BSL2）のCDC、NIHのガイドラインに準拠しています。また、NSGマウスは厳しくこうして免疫不全、彼らの住宅とメンテナンスが最も高い衛生基準（に準拠している必要があり<a href="http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html" target="_blank">http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html</a> ）。

移植のプロセスのフローチャートを図1Aに示されています。なた/ LIVインプラントの写真を図1Bに示されている。胸腺組織は、通常、開発、ヒトCD4とCD8 T細胞の生理的な分布を持っています。再構成後、動物は、CD4、CD8 T細胞などの免疫細胞系譜の正規分布とヒトの免疫システムを運ぶ。 腫瘍の大きさや生きている組織との間の不一致は、 図...

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Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

ヒト化マウスを用いた腫瘍特異的T細胞の生成および特徴付けは、ここで説明されます。ヒト胸腺組織、遺伝子組み換えヒト造血幹細胞を免疫不全マウスに移植されています。抗腫瘍免疫応答の生体観察を可能に設計されたヒト免疫系の再構成でこの結果。

幹細胞ベースの遺伝子治療腫瘍モデルとしてBLTヒト化マウスを用いた

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

同種造血幹細胞移植後のウイルス感染を予防/治療するMultivirus -特異的T細胞の生成

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

細菌付着の研究ではせん断応力を導入する

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

臍帯血から細胞傷害性Tリンパ球の拡大をそのターゲットサイトメガロウイルス、エプスタイン - バーウイルス、およびアデノウイルス

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

移植片対宿主病の誘導および<emインビボで&gt;</emMHCマッチしたマウスモデルを使用する&gt; T細胞のモニタリング

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Cell-based Flow Cytometry Assay to Measure Cytotoxic Activity

Cytolytic activity of CD8+ T cells is rarely evaluated. We describe here a new cell-based assay to measure the capacity of antigen-specific CD8+ T cells ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

微小血管系を対象に細菌感染を研究するためのヒト化マウスモデル

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

サイトカインキャプチャシステムを用いた臨床応用のためのサイトメガロウイルス特異的T細胞の自動化された細胞濃縮

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

感染症のためのモデルとしてのオルガノイド：人間の文化とマウス胃オルガノイドとピロリ菌のマイクロインジェクション

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

NK細胞の機能を監視するためのサイトメトリーに基づくアッセイを流します

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

での感染の間に流入領域リンパ節へのマウスの皮膚樹状細胞の移動を研究するためにCFSEベースアッセイ<em&gt;マイコバクテリウム・ボビス</em&gt;カルメット - ゲラン

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...