Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

ويتم تمويل هذا العمل من قبل العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (منحة # 249669، 482986 و#) والقلب والسكتة الدماغية مؤسسة كندا (منحة # 485508). الكتاب أشكر يوسف الحايك والدكتور وان تشى لمساعدتهم في تطوير البروتوكولات التجريبية.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على التعامل مع الحيوانات من جامعة تورونتو لحيوانات جنة رعاية فقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية (البروتوكول رقم 20009387). يجب أن يتم تنفيذ الطرق التالية باستخدام أدوات معقمة والتقنيات، في الصفحي هود تدفق حيثما ينطبق ذلك. <p class="jo...

<ol>
	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

وقد تم تكييف هذا البروتوكول من أساليب راسخة من الدراسات السابقة 7-9. ويمكن بناء غرف Galvanotactic باستخدام مجموعة متنوعة من التقنيات المختلفة، بما في ذلك بناء كوب منفصلة بشكل جيد لاحتجاز بذر الخلية، أو باستخدام الليزر التذرية CO 2 لمن الحوض الصغير الدقيق microfabrication...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td height="44"> اسم البند </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> عزل الخلايا العصبية السلائف </td></tr><tr><td> 2M كلوريد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> S5886 </td><td> ز 11،688 المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> 1M بوكل </td><td> سيجما </td><td> P5405 </td><td> 7،456 ز المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> سيجما </td><td> M2393 </td><td> 20،33 ز المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> 155 مم 3 NaHCO </td><td> سيجما </td><td> S5761 </td><td> 1،302 ز المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> 0.5M الجلوكوز </td><td> سيجما </td><td> G6152 </td><td> 9،01 ز حل في 100مل DH 2 O </td></tr><tr><td> 108 مم CaCl 2 </td><td> سيجما </td><td> C7902 </td><td> 1،59 ز المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> الأبقار البنكرياس التربسين </td><td> سيجما </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> الأغنام الخصيتين هيالورونيداز </td><td> سيجما </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Kynurenic حمض </td><td> سيجما </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> مخاطاني البيض التربسين المانع </td><td> ورثينجتون </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> 30٪ جلوكوز </td><td> سيجما </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7.5٪ NaHCO 3 </td><td> سيجما </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> سيجما </td><td> H3375 </td><td> 23،83 ز المذاب في 100 مل O 2 درهم </td></tr><tr><td> الجلوتامين L- </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> إينفيتروجن </td><td> PMG8041 </td><td> إعادة في 1 مل من مزيج الهرمونات وقسامة إلى 20 وحدة ميكرولتر. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> إينفيتروجن </td><td> PHG0226 </td><td> إعادة في 0.5 مل من مزيج الهرمونات وقسامة إلى 20 وحدة ميكرولتر. </td></tr><tr><td> الهيبارين </td><td> سيجما </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> APO-ترانسفيرين </td><td> R &amp; D أنظمة </td><td> 3188-AT </td><td> 0.1 غ في حل DH مل 4 2 0 </td></tr><tr><td> بوتريسين </td><td> سيجما </td><td> P7505 </td><td> حل 9،61 ملغ في آبو-ترانسفيرين ذلكlution </td></tr><tr><td> الأنسولين </td><td> سيجما </td><td> I5500 </td><td> حل 25 ملغ في 0.5 مل من حمض الهيدروكلوريك 0.1N وإضافة إلى 3.5 مل من DH 2 0 </td></tr><tr><td> عنصر السيلينيوم </td><td> سيجما </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> البروجسترون </td><td> سيجما </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> أدوات تشريح القياسية </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td></td><td></td></tr><tr><td> تشريح المجهر </td><td> زايس </td><td> STEMI 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> انجذاب غلفاني غرفة التحضير </td></tr><tr><td> مربع الشرائح الزجاجية غطاء </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N حمض الهيدروكلوريك </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> ارتفاع الشحوم فراغ </td><td> داو كورنينج </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 مم أطباق بتري </td><td> فيشر العلمية </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> بولي يسين-L- </td><td> سيجما </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD العلوم البيولوجية </td><td> 354234 </td><td> ذوبان الجليد وقسامة إلى 150 وحدة ميكرولتر </td></tr><tr><td> FBS </td><td> إينفيتروجن </td><td> 10082139 </td><td> استخدام فقط في حالة حمل تمايز NPC، وإلا استخدام وسائل الإعلام الثقافة SFM + EFH كما هو مبين أعلاه </td></tr><tr><td> عد المجهر </td><td> OLYMPUS </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> تعيش خلية الوقت الفاصل بين التصوير </td></tr><tr><td> الفضة الأسلاك </td><td> الفا Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> عالى النقاء الاغاروز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> الحرارة Inactivated FBS </td><td> سيجما </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> PVC أنابيب </td><td> فيشر العلمية </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID X 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> تبييض </td><td> كلوروكس </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 سم مكعب حقنة </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 18 إبرة قياس </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> DREMEL الحفر </td><td> DREMEL </td><td> نموذج 750 </td><td></td></tr><tr><td> المجهر المقلوب غرفة مجهزة، مرطب المحتضنة </td><td> زايس </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> وصفات <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم </td></tr><tr><td> 2M كلوريد الصوديوم </td><td> 6،2 مل </td></tr><tr><td>1M بوكل </td><td> 0.5 مل </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> 0،32 مل </td></tr><tr><td> 155mM NaHCO 3 </td><td> 16،9 مل </td></tr><tr><td> 1M الجلوكوز </td><td> 1 مل </td></tr><tr><td> 108 مم CaCl 2 </td><td> 0،09256 مل </td></tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> 1 مل </td></tr><tr><td> تعقيمها المياه </td><td> 74 مل </td></tr></tbody></table> السائل النخاعي الاصطناعي <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم أو كتلة </td></tr><tr><td> السائل النخاعي الاصطناعي </td><td> 30 مل </td></tr><tr><td> الأبقار البنكرياس التربسين </td><td> 40 ملغ </td></tr><tr><td> الأغنام الخصيتين هيالورونيداز </td><td> 22،8 ملغ </td></tr><tr><td> Kynurenic حمض </td><td> 5 ملغ </td></tr></tbody></table> &lt;STRONG&gt; الحل التربسين <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم أو كتلة </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 مل </td></tr><tr><td> مخاطاني البيض التربسين المانع </td><td> 10 ملغ </td></tr></tbody></table> التربسين المانع الحل <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم </td></tr><tr><td> تعقيمها المياه </td><td> 37 مل </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 مل </td></tr><tr><td> 30٪ جلوكوز </td><td> 2 مل </td></tr><tr><td> 7.5٪ NaHCO 3 </td><td> 1.5 مل </td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0.5 مل </td></tr><tr><td> ترانسفيرين، بوتريسين الحل </td><td> 4 مل </td></tr><tr><td> 25 ملغ حل الأنسولين </td><td> 4 مل </td></tr><tr><td> عنصر السيلينيوم </td><td> 100 &amp; مو؛ L </td></tr><tr><td> البروجسترون </td><td> 100 ميكرولتر </td></tr></tbody></table> ميكس هرمون (100 مل المجموع، المحل في -20 درجة مئوية) <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم </td></tr><tr><td> تعقيمها المياه </td><td> 37،5 مل </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 (3:1) </td><td> 5 مل </td></tr><tr><td> 30٪ جلوكوز </td><td> 1 مل </td></tr><tr><td> 7.5٪ NaHCO 3 </td><td> 0،75 مل </td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0.25 مل </td></tr><tr><td> هرمون مزيج </td><td> 5 مل </td></tr><tr><td> الجلوتامين L- </td><td> 0.5 مل </td></tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> 0.5 مل </td></tr></tbody></table> المصل وسائل الإعلام الحرة EFH-SFM: إضافة 10 ميكرولتر من EGF، 10 ميكرولتر من جمعية جيل المستقبل، و3.66 ميكرولتر من الهيبارين FBS-SFM: إضافة 0.5 مل FBS <taبلي الحدود = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> بند </td><td> حجم </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 ميكرولتر </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3،6 مل </td></tr></tbody></table> يجب وضع Matrigel قسامة Matrigel الحل في مربع من الجليد وذوبان الجليد يسمح للببطء على مدى 4-5 ساعات لتشكيل سائل لزج قبل الاختلاط SFM. وهذا سيضمن تشكيل طبقة ناعمة من الركيزة Matrigel. إن لم يكن إذابة ببطء، والركيزة الناتجة تحتوي على كتل من Matrigel، مما يعيق ربما الهجرة الخلية. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> حجم أو كتلة </td></tr><tr><td> عالى النقاء الاغاروز </td><td> 300 ملغ في DDH مل 10 2 0 </td></tr><tr><td> SFM FBS المعطل الحرارة </td><td> 8 مل 2 مل </td></tr></tbody></table> Matrigelمزيج الحل 8 مل من SFM مع 2 مل FBS المعطل الحرارة في أنبوب الصقر 15 سم مكعب. مزيج الاغاروز مع DDH مل 10 2 0 في دورق مخروطي، والحرارة في الميكروويف لمدة 30 ثانية في 10 ثانية فترات، وضمان لإزالة الحل من فرن الميكروويف بعد كل فاصل زمني 10-ثوانى ومزيج دقيق. بعد فترة أخيرة ميكروويف 10-ثوانى، مزيج الحل مع الاغاروز الحل SFM FBS / ومخزن في حمام ماء C ° 57. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

وقد أدى اكتشاف الجذعية العصبية والخلايا الاصلية (وهو ما يسمى خلايا السلائف جماعي العصبية) (الشخصيات) في دماغ الثدييات الكبار لمجموعة من البحوث التي تهدف إلى الاستفادة من خصائص متعددة القدرات والتكاثري من هذه الخلايا لتطوير استراتيجيات neuroregenerative. A خطوة حاسمة لنجاح هذه الاستراتيجيات هو تعبئة الشخصيات نحو موقع الآفة أو بعد زرع الخارجية لتعزيز الاستجابة للالسلائف الذاتية التي تم العثور عليها في المنطقة المحيطة بالبطين من الجهاز العصبي المركزي. وفقا لذلك، من الضروري لفهم الآليات التي تشجع، توجيه، وتعزيز الهجرة NPC. عملنا يركز على الاستفادة من حقول التيار الكهربائي المباشر (dcEFs) لتعزيز والهجرة مباشرة NPC - وهي ظاهرة تعرف باسم انجذاب غلفاني. الذاتية المجالات الكهربائية الفيزيولوجية يعمل واشارات حاسمة للهجرة الخلايا خلال التطور الطبيعي وإصلاح الجرح. تعطيل الدوائيةعبر أنبوب العصبي في الأجنة المحتملة قنفذ البحر يسبب تشوهات في النمو الحاد 1. في سياق التئام الجروح، ويرتبط بشكل مباشر على معدل إصلاح القرنية الجرحى مع حجم إمكانيات الجرح الظهارية الذي ينشأ بعد الإصابة، كما يتضح من تعزيز الدوائية أو تعطيل هذا dcEF 2-3. لقد أثبتنا أن اللجان التحضيرية الوطنية تحت البطانة العصبية الكبار الخضوع الهجرة السريع وإخراج المهبطي في المختبر عند تعرضها إلى dcEF يطبق خارجيا. في هذا البروتوكول وصفنا تقنيات المختبر لإنشاء مقايسة انجذاب غلفاني بسيطة وفعالة لتسوية عالية، على المدى الطويل مراقبة موجهة الخلية إزفاء الجسم (الهجرة) على مستوى وحيدة الخلية. وهذا الاختبار تكون مناسبة للتحقيق في الآليات التي تنظم تنبيغ dcEF في الحركة الخلوية من خلال استخدام الفئران المعدلة وراثيا أو خروج المغلوب، RNA قصيرة التدخل، أو منبهات مستقبلات محددة / الخصوم.

تحليل يكشف عن أن الحركية في وجود dcEF بالسيارات / 250 مم، عرض الشخصيات غير متمايزة انجذاب غلفاني الموجهة للغاية وسريعة نحو القطب السالب (الشكل 5A، الفيلم 1). في حالة عدم وجود dcEF، لوحظ حركة عشوائية من الخلايا (الشكل 5B، فيلم 2). في هذه القوة الميدانية،&gt; 98٪ من...

Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

في هذا البروتوكول ونحن لشرح كيفية بناء الغرف المخصصة التي تسمح بتطبيق حقل كهربائي مباشر الحالية لتمكين الوقت الفاصل بين التصوير من الدماغ العصبية مشتقة الكبار إزفاء الخلية تمهيدا خلال انجذاب غلفاني.

A الفحص انجذاب غلفاني لتحليل حركية العصبية السلائف الهجرة خلية في الحقل الحالي مباشرة التطبيقية خارجيا الكهربائية

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

وضعية القطب والمونتاج في تحفيز الحالية عبر الجمجمة مباشرة

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

تحليل العصبية كريست الهجرة جذع الخلية باستخدام التعديل الفحص غرفة زيجموند

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

استنساخه سحق الفأر العصب الوركي وتقييم لاحق للتجديد من قبل الجامعة جبل تحليل العضلات

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

تحليل للهجرة كريست العصبية والتمايز بواسطة الصليب الأنواع زرع

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

مقايسة الهجرة الخلية الكمي لالفئران العصبية المعوية أسلاف

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

على المدى الطويل لتتبع السلوكية للسباحة بحرية وكلي السمك الكهربائية

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

عن بعد تحت الإشراف المباشر Transcranial التحفيز الحالية: تحديث الأمان وقابلية التحمل

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...