Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

Ce travail est financé en sciences naturelles et en génie du Canada (subvention no 249669, 482986 et #) et la Fondation des maladies du Canada (subvention no 485508). Les auteurs tiennent à remercier Youssef El-Hayek et le Dr Qi Wan pour leur aide dans l&#39;élaboration des protocoles expérimentaux.

Toutes les procédures impliquant la manipulation des animaux ont été approuvés par l&#39;Université de Toronto Comité de protection des animaux, conformément aux directives institutionnelles (protocole n °. 20009387). Les méthodes suivantes doivent être effectuées à l&#39;aide des outils et des techniques stériles, dans une hotte à flux laminaire, le cas échéant. Dans le texte du protocole ci-dessous, l&#39;expression «EFH-SFM» se réfère à un milieu sans sérum suppléme...

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	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

Ce protocole a été adapté à partir des méthodes bien établies d&#39;études antérieures 7-9. Galvanotactic chambres peuvent être construits en utilisant une variété de techniques différentes, y compris la construction d&#39;un verre séparé bien pour le confinement de l&#39;ensemencement des cellules, ou par ablation laser CO 2 pour la microfabrication de la cuvette centrale 10,11. Certaines techniques peuvent être plus laborieux ou coûteux que d&#39;autres. Nous avons déc...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> Nom de l&#39;objet </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neural Isolement de cellules précurseurs </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> 11,688 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> 7,456 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> 20,33 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> 155 mM NaHCO 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td> 1,302 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> Glucose 0,5 M </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> 9,01 g dissous dans 100ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 108 mM de CaCl 2 </td><td> Sigma </td><td> C7902 </td><td> 1,59 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> Pénicilline-streptomycine </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine pancréatique bovine </td><td> Sigma </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> Sheep testicules hyaluronidase </td><td> Sigma </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide Kynurenic </td><td> Sigma </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomucoïde inhibiteur de trypsine </td><td> Worthington </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> Glucose à 30% </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td><td> 23,83 g dans 100 ml dH O 2 </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> FEM </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> Reconstituer dans 1 ml de mélange d&#39;hormones et aliquote en 20 unités ul. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> Reconstituer dans 0,5 ml de mélange d&#39;hormones et aliquote en 20 unités ul. </td></tr><tr><td> L&#39;héparine </td><td> Sigma </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrine </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 3188-AT </td><td> 0,1 g dissous dans 4 ml dH 2 0 </td></tr><tr><td> Putrescine </td><td> Sigma </td><td> P7505 </td><td> Dissoudre 9,61 mg dans Apo-transferrine afinlution </td></tr><tr><td> Insuline </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td><td> Dissolvez 25 mg dans 0,5 ml de HCl 0,1 N et ajouter à 3,5 ml de dH 2 0 </td></tr><tr><td> Sélénium </td><td> Sigma </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> La progestérone </td><td> Sigma </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> Outils de dissection standard </td><td> Outils Fine Science </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscope à dissection </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaxie Chambre Préparation </td></tr><tr><td> Carrés diapositives couvercle en verre </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> Acide chlorhydrique 6N </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> Graisse à vide élevé </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 mm boîtes de Pétri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> La poly-L-lysine </td><td> Sigma </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> Décongeler et aliquote de 150 unités en pl </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> N&#39;utiliser que si induction de la différenciation PNJ, sinon utilisez GDF + milieux de culture EFH comme indiqué ci-dessus </td></tr><tr><td> Compter microscope </td><td> Olympe </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Vivez cellulaire imagerie time-lapse </td></tr><tr><td> Fil d&#39;argent </td><td> Alfa Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> La chaleur inactivitéFBS ATED </td><td> Sigma </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes en PVC </td><td> Fisher Scientific </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> Javellisant </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Seringue de 10 cc </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> Aiguille 18 de calibre </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> Perceuse Dremel </td><td> Dremel </td><td> Modèle 750 </td><td></td></tr><tr><td> Microscope inversé équipé humidifié, chambre incubé </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Recettes <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6,2 ml </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> 0,32 ml </td></tr><tr><td> 155mm NaHCO 3 </td><td> 16,9 ml </td></tr><tr><td> Le glucose 1M </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 108 mM de CaCl 2 </td><td> 0,09256 ml </td></tr><tr><td> Pénicilline-streptomycine </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> L&#39;eau autoclavée </td><td> 74 ml </td></tr></tbody></table> Liquide céphalo-rachidien artificiel <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume ou de masse </td></tr><tr><td> Liquide céphalo-rachidien artificiel </td><td> 30 ml </td></tr><tr><td> Trypsine pancréatique bovine </td><td> 40 mg </td></tr><tr><td> Sheep testicules hyaluronidase </td><td> 22,8 mg </td></tr><tr><td> L&#39;acide Kynurenic </td><td> 5 mg </td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt; Solution de trypsine <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume ou de masse </td></tr><tr><td> GDF </td><td> 15 ml </td></tr><tr><td> Ovomucoïde inhibiteur de trypsine </td><td> 10 mg </td></tr></tbody></table> Solution inhibiteur de la trypsine <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume </td></tr><tr><td> L&#39;eau autoclavée </td><td> 37 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 ml </td></tr><tr><td> Glucose à 30% </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO 3 </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Transferrine, putrescine solution </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Une solution à 25 mg d&#39;insuline </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Sélénium </td><td> 100 &amp; mu; L </td></tr><tr><td> La progestérone </td><td> 100 pi </td></tr></tbody></table> Mix Hormone (100 ml au total, conserver à -20 ° C) <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume </td></tr><tr><td> L&#39;eau autoclavée </td><td> 37,5 ml </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X (3:1) </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> Glucose à 30% </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO 3 </td><td> 0,75 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,25 ml </td></tr><tr><td> Mélange hormone </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Pénicilline-streptomycine </td><td> 0,5 ml </td></tr></tbody></table> Sérum Free Media EFH-GDF: ajouter 10 ul d&#39;EGF, 10 pi de FGF, et 3,66 ul d&#39;héparine FBS-GDF: ajouter 0,5 ml de FBS <tafrontière ble = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> Article </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 pi </td></tr><tr><td> GDF </td><td> 3,6 ml </td></tr></tbody></table> Matrigel Solution Matrigel aliquote doit être placé dans une boîte de glace et de laisser se décongeler lentement au fil 4-5 heures pour former un liquide visqueux avant mélange avec l&#39;AFD. Cela permettra d&#39;assurer la formation d&#39;une fine couche de substrat Matrigel. Si ce n&#39;est pas décongelé lentement, le substrat résultant contiendra des touffes de Matrigel, éventuellement entraver la migration des cellules. <table border="1"><tbody><tr><td> Article </td><td> Volume ou de masse </td></tr><tr><td> UltraPure Agarose </td><td> 300 mg dans 10 ml ddH 2 0 </td></tr><tr><td> GDF FBS inactivé chaleur </td><td> 8 ml 2 ml </td></tr></tbody></table> MatrigelSolution Mix 8 ml de GDF avec 2 ml de FBS inactivé de la chaleur dans un tube de 15 cc faucon. Mix d&#39;agarose avec 10 ml ddH 2 0 dans un erlenmeyer, et de la chaleur au micro-ondes pendant 30 secondes à 10 sec intervalles, en veillant à éliminer la solution du micro-ondes après chaque intervalle de 10 sec et bien mélanger. Suite à la dernière période de 10 secondes à micro-ondes, mélanger la solution d&#39;agarose avec la SFM / solution FBS et le ranger dans un bain de 57 ° C de l&#39;eau. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

La découverte des cellules souches et des cellules progénitrices neurales (collectivement appelées cellules précurseurs neurales) (PNJ) dans le cerveau des mammifères adultes a conduit à un ensemble de recherches visant à utiliser les propriétés multipotentes et de prolifération de ces cellules pour le développement de stratégies neuroregenerative. Une étape cruciale pour le succès de ces stratégies est la mobilisation des PNJ vers un site de lésion consécutive à une transplantation ou exogène pour améliorer la réponse des précurseurs endogènes que l&#39;on trouve dans la région périventriculaire du système nerveux central. Par conséquent, il est essentiel de comprendre les mécanismes qui favorisent, d&#39;orienter et d&#39;améliorer la migration PNJ. Notre travail se concentre sur l&#39;utilisation du courant continu champs électriques (dcEFs) de promouvoir et de migration directe PNJ - un phénomène connu sous le nom galvanotaxie. Endogènes physiologiques des champs électriques fonctionnent comme des repères essentiels pour la migration cellulaire au cours du développement normal et la cicatrisation des plaies. La perturbation pharmacologique dutension du tube neural chez trans-embryons axolotl provoque de graves malformations du développement 1. Dans le contexte de la cicatrisation, le taux de réparation de la cornée blessés est directement corrélée à l&#39;ampleur du potentiel de blessure épithéliale qui se pose après une blessure, comme le montre l&#39;amélioration pharmacologique ou l&#39;interruption de ce dCEF 2-3. Nous avons démontré que les adultes subissent PNJ sous-épendymaires rapide et dirigé la migration cathodique in vitro lorsqu&#39;elles sont exposées à un dCEF appliqué de l&#39;extérieur. Dans ce protocole, nous allons décrire les techniques de notre laboratoire pour la création d&#39;un test galvanotaxie simple et efficace à haute résolution, observation à long terme de la translocation de cellule du corps dirigé (migration) sur un seul niveau de cellules. Ce test serait approprié pour étudier les mécanismes qui régulent la transduction dCEF dans la motilité cellulaire grâce à l&#39;utilisation de souris transgéniques ou knock-out, courts ARN interférents ou des agonistes / antagonistes des récepteurs spécifiques.

L&#39;analyse cinématique révèle que, en présence d&#39;une mesure de 250 mV / mm dCEF, les PNJ indifférenciées présentent galvanotaxie très rapide et dirigés vers la cathode (figure 5A, Film 1). En l&#39;absence d&#39;un dCEF, le mouvement aléatoire des cellules est observée (figure 5B, Film 2). A ce champ,&gt; 98% des PNJ indifférenciées migrer pour la de 6-8 heures pour lesquelles ils sont imagés, et depuis les cellules mortes ne migrent pas ce qui suggère qu&#39;ils r...

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A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Dans ce protocole, nous allons montrer comment construire des chambres personnalisées qui permettent l&#39;application d&#39;un champ électrique à courant continu pour permettre imagerie time-lapse de cerveau adulte dérivé de neurones translocation cellule précurseur pendant galvanotaxie.

Un test galvanotaxie pour l&#39;analyse de la cinétique précurseurs neuronaux migration des cellules dans un champ appliqué de l&#39;extérieur électrique à courant continu

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Neural-Formant Colonie dosage cellulaire: Un test pour distinguer Bona Fide Cellules souches neuronales à partir de cellules progénitrices neurales

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Recherche

Neurosciences

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