Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי מדעי הטבע והנדסת מועצת המחקר של קנדה (מענק # 249669, ו# 482986) ולב ושבץ קרן של קנדה (מענק # 485508). המחברים מודים יוסוף אל האייק וואן ד&quot;ר צ&#39;י על סיועם בפיתוח פרוטוקולי הניסוי.

כל ההליכים כרוכים בטיפול בבעלי חיים אושרו על ידי אוניברסיטת טורונטו ועדת טיפול בבעלי חיים בהתאם להנחיות מוסדיות (פרוטוקול לא. 20009387). השיטות הבאות יש לבצע באמצעות כלים וטכניקות סטריליות, במכסת מנוע זרימה למינרית היכן שאפשר. בטקסט ...

<ol>
	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

פרוטוקול זה הותאם מהשיטות המבוססות היטב של מחקרים קודמים 7-9. תאי Galvanotactic ניתן לבנות תוך שימוש במגוון טכניקות שונות, כולל הבנייה של זכוכית נפרדת גם לכליאה של זריעת תא, או באמצעות אבלציה הליזר CO 2 לmicrofabrication של השוקת המרכזית 10,11. טכניקות מסוימות עשויות ל?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td height="44"> שמו של פריט </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> בידוד תא מבשר עצבי </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> סיגמא </td><td> S5886 </td><td> 11.688 גרם מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> סיגמא </td><td> P5405 </td><td> 7.456 גרם מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> סיגמא </td><td> M2393 </td><td> 20.33 גרם מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> 155 המ&quot;מ 3 NaHCO </td><td> סיגמא </td><td> S5761 </td><td> 1.302 גרם מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> גלוקוז 0.5m </td><td> סיגמא </td><td> G6152 </td><td> 9.01 גר &#39;מומס ב100המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> 108 המ&quot;מ CaCl 2 </td><td> סיגמא </td><td> C7902 </td><td> 1.59 גר &#39;מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין לבלב שור </td><td> סיגמא </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> כבשי אשכי hyaluronidase </td><td> סיגמא </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> חומצת Kynurenic </td><td> סיגמא </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> מעכב טריפסין Ovomucoid </td><td> וורטינגטון </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> גלוקוז 30% </td><td> סיגמא </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7.5% 3 NaHCO </td><td> סיגמא </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> סיגמא </td><td> H3375 </td><td> 23.83 גרם מומס 100 המ&quot;ל DH 2 O </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> לשקם ב1 מ&quot;ל של תערובת הורמון וaliquot לתוך 20 יחידות μl. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> לשקם ב0.5 מ&quot;ל של תערובת הורמון וaliquot לתוך 20 יחידות μl. </td></tr><tr><td> הפארין </td><td> סיגמא </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrin </td><td> מו&quot;פ מערכות </td><td> 3188-AT </td><td> 0.1 גרם מומס ל 4 המ&quot;ל DH 2 0 </td></tr><tr><td> פוטרסין </td><td> סיגמא </td><td> P7505 </td><td> ממס 9.61 מ&quot;ג לApo-transferrin כךlution </td></tr><tr><td> אינסולין </td><td> סיגמא </td><td> I5500 </td><td> להמס 25 מ&quot;ג למ&quot;ל של 0.5 0.1N HCl ולהוסיף עד 3.5 מ&quot;ל של DH 2 0 </td></tr><tr><td> סלניום </td><td> סיגמא </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> פרוגסטרון </td><td> סיגמא </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> כלי נתיחה סטנדרטי </td><td> כלי מדע פיין </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ נתיחה </td><td> Zeiss </td><td> STEMI 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> הכנת Galvanotaxis הקאמרית </td></tr><tr><td> מגלשות כיסוי זכוכית מרובעות </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N חומצה הידרוכלורית </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> גריז ואקום גבוה </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 מנות מ&quot;מ פטרי </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> פולי-L-ליזין </td><td> סיגמא </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> הפשר וaliquot לתוך 150 יחידות μl </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> השתמש אך ורק אם תשכנע את בידול NPC, אחרת להשתמש SFM + תקשורת תרבות EFH כפי שצוינה לעיל </td></tr><tr><td> ספירת מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> חי הדמית תא זמן לשגות </td></tr><tr><td> חוט כסף </td><td> אלפא Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> Ultrapure agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> החום InactivFBS ated </td><td> סיגמא </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> צינורות PVC </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;מזהה x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> מלבין </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 סמ&quot;ק מזרק </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> מחט מד 18 </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> תרגיל Dremel </td><td> Dremel </td><td> דגם 750 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ ההפוך מצויד בתא humidified, דגר </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200 מ&#39; </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> מתכונים <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6.2 מ&quot;ל </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0.5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> 0.32 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> קוטר 155 מ&quot;מ 3 NaHCO </td><td> 16.9 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> גלוקוז 1M </td><td> 1 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> 108 המ&quot;מ CaCl 2 </td><td> 0.09256 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> 1 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מי Autoclaved </td><td> 74 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> נוזל השדרתי מלאכותי <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח או מסה </td></tr><tr><td> נוזל השדרתי מלאכותי </td><td> 30 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> טריפסין לבלב שור </td><td> 40 מ&quot;ג </td></tr><tr><td> כבשי אשכי hyaluronidase </td><td> 22.8 מ&quot;ג </td></tr><tr><td> חומצת Kynurenic </td><td> 5 מ&quot;ג </td></tr></tbody></table> &lt;פתרון חזק&gt; טריפסין <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח או מסה </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מעכב טריפסין Ovomucoid </td><td> 10 מ&quot;ג </td></tr></tbody></table> פתרון אינהיביטור טריפסין <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח </td></tr><tr><td> מי Autoclaved </td><td> 37 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X </td><td> 10 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> גלוקוז 30% </td><td> 2 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> 7.5% 3 NaHCO </td><td> 1.5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0.5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Transferrin, פתרון פוטרסין </td><td> 4 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> פתרון אינסולין 25 מ&quot;ג </td><td> 4 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סלניום </td><td> 100 &amp; mu, אני </td></tr><tr><td> פרוגסטרון </td><td> 100 μl </td></tr></tbody></table> מיקס הורמון (100 המ&quot;ל מוחלט, חנות ב -20 ° C) <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח </td></tr><tr><td> מי Autoclaved </td><td> 37.5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X (3:1) </td><td> 5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> גלוקוז 30% </td><td> 1 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> 7.5% 3 NaHCO </td><td> 0.75 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0.25 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> תמהיל הורמון </td><td> 5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> 0.5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> 0.5 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> הסרום חינם מדיה EFH-SFM: להוסיף 10 μl של EGF, 10 μl של FGF, ו3.66 μl של הפארין FBS-SFM: להוסיף 0.5 המ&quot;ל FBS <taגבול ble = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3.6 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> aliquot Matrigel Matrigel פתרון צריך להיות ממוקם בקופסא הקרח ואפשר להפשיר לאט במשך 4-5 שעות כדי ליצור נוזל צמיג לפני הערבוב עם SFM. זה יבטיח את היווצרות שכבה חלקה של מצע Matrigel. אם לא הופשר לאט, המצע וכתוצאה יכיל גושי Matrigel, אולי מעכב את נדידת תאים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> נפח או מסה </td></tr><tr><td> Ultrapure agarose </td><td> 300 מ&quot;ג ב10 המ&quot;ל DDH 2 0 </td></tr><tr><td> SFM FBS המומת חום </td><td> 8 מ&quot;ל 2 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table> Matrigelפתרון מערבב 8 מ&quot;ל של SFM עם FBS המומת חום המ&quot;ל 2 בצינור 15 סמ&quot;ק בז. המיקס agarose עם 10 המ&quot;ל DDH 2 0 בבקבוק Erlenmeyer, וחום במיקרוגל למשך 30 שניות במרווחים 10-sec, הבטחה להסרת פתרון מהמיקרוגל אחרי כל מרווח 10-שניות וביסודיות לערבב. בעקבות התקופה האחרונה, 10-שניות במיקרוגל, לערבב עם פתרון agarose / פתרון SFM FBS וחנות ב° C 57 אמבט מים. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

הגילוי של גזע עצבי ותאי אב (תאים מבשרים עצביים המכונים באופן קולקטיבי) (NPCs) במוח של יונקי הבוגרים הוביל לגופו של מחקר שהמטרה תוך ניצול תכונות multipotent ושגשוג של תאים אלו לפיתוח אסטרטגיות neuroregenerative. צעד קריטי להצלחה של אסטרטגיות כאלו היא התגייסות NPCs לכיוון אתר נגע לאחר השתלת אקסוגני או כדי לשפר את התגובה של מבשרי אנדוגני הנמצאים באזור periventricular של מערכת העצבים המרכזיים. בהתאם לכך, הוא חיוני כדי להבין את המנגנונים שמקדמים, להדריך, ולשפר את הגירת NPC. העבודה שלנו מתמקדת בניצול של שדות חשמליים של זרם ישירים (dcEFs) לקידום והגירת NPC ישירה - תופעה הידועה בgalvanotaxis. שדות חשמליים פיסיולוגיים אנדוגניים לתפקד כרמזים קריטיים לנדידת תאים במהלך התפתחות תקינה ותיקון פצע. שיבוש תרופתיפוטנציאל צינור טרנס עצבי בעוברי האמביסטומה גורם מומים התפתחותיים חמורים 1. בהקשר של ריפוי פצע, קצב התיקון של קרנית פגועה מתואם ישירות עם סדר הגודל של פוטנציאל פצע אפיתל שמתעורר לאחר פציעה, כפי שמוצג על ידי שיפור או שיבוש תרופתי של 2-3 dcEF זה. אנחנו הוכחנו כי NPCs subependymal המבוגר לעבור הגירת cathodal מהירה וביים במבחנה, כאשר נחשף לdcEF לשימוש חיצוני. בפרוטוקול זה אנו מתארים טכניקות של המעבדה שלנו ליצירת assay galvanotaxis פשוט ויעיל לרזולוציה גבוהה, תצפית ארוכת הטווח של טרנסלוקציה ביימה תא בגוף (נדידה) ברמת תא בודד. assay זה יהיה מתאים לחוקר את המנגנונים המווסתים את תמרת dcEF לתנועתיות סלולרית באמצעות השימוש בעכברים מהונדסים או נוקאאוט, RNA התערבות הקצר, או אגוניסטים הקולטן ספציפיים / יריבים.

ניתוח kinematic מגלה כי בנוכחות dcEF 250 mV / מ&quot;מ, NPCs עבר התמיינות תערוכת galvanotaxis ביים והמהיר ביותר לכיוון הקתודה (האיור 5A, סרט 1). בהעדר dcEF, תנועה אקראית של התאים הוא ציין (5B איור, סרט 2). בשדה הכח הזה,&gt; 98% מNPCs עבר התמיינות להגר ל6-8 השעות כל שהם צלמו, ומאחר שתאים מ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לבנות תאים מותאמים אישית המאפשרים יישום של שדה חשמלי בזרם ישר כדי לאפשר הדמית זמן לשגות של המוח מבוגר נגזר טרנסלוקציה תא מבשר העצבית במהלך galvanotaxis.

Assay Galvanotaxis לניתוח של קינטיקס נדידת תאים העצביים המבשר בשדה חשמלי נוכחי לשימוש חיצוני ישיר

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

עצבית, המושבה יצירת Assay נייד: Assay להפלות בונה תאים בתום גזע עצביים מן ובתאים עצבית

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

אלקטרודה מיצוב ו מונטאז גירוי ישיר Transcranial נוכחי

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Assay Neuroblast: Assay לדור והעשרה של ובתאים העצבית הבחנה בין צאצאיהם גזע עצביים Cell שימוש cytometry זרימה

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

Assay נדידת תאים כמותיות לMurine אבות עצביים enteric

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

לטווח ארוך התנהגות מעקב של Freely בריכה בחולשת דגים חשמליים

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

מרחוק תחת פיקוח ישיר טראנס גירוי נוכחי: עדכון על הבטיחות והסבילות

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...