Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

Questo lavoro è finanziato dalla scienze naturali e ingegneria Research Council del Canada (sovvenzione # 249669, # 482986 e) e Heart and Stroke Foundation of Canada (sovvenzione # 485508). Gli autori ringraziano Youssef El-Hayek e il dottor Qi Wan per la loro assistenza nello sviluppo dei protocolli sperimentali.

Tutte le procedure che comportano il trattamento degli animali sono state approvate dal Comitato Università di Toronto Animal Care in conformità con le linee guida istituzionali (protocollo n. 20009387). I metodi seguenti devono essere effettuate utilizzando strumenti sterili e tecniche, in una cappa a flusso laminare dove applicabile. Nel testo del protocollo sottostante, la frase &quot;EFH-SFM&quot; si riferisce a mezzi di informazione liberi siero integrato con il fattore di crescita ep...

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	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

Questo protocollo è stato adattato da ben consolidati metodi di studi precedenti 7-9. Camere Galvanotactic può essere costruito utilizzando una varietà di tecniche diverse, compresa la costruzione di un bicchiere ben separata per il confinamento di semina cellulare, o mediante ablazione laser CO 2 per microfabbricazione del trogolo centrale 10,11. Alcune tecniche possono essere più laborioso o costose di altre. Abbiamo descritto un test semplice e conveniente per la costruzione di un...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> Nome della voce </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neural Precursore isolamento cellulare </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> 11,688 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> KCl 1M </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> 7,456 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> 20,33 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> 155 mm NaHCO 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td> 1,302 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> Glucosio 0.5M </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> 9,01 g sciolti in 100ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl 2 </td><td> Sigma </td><td> C7902 </td><td> 1,59 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> Penicillina-streptomicina </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> Pancreas tripsina bovina </td><td> Sigma </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> Pecora testicoli ialuronidasi </td><td> Sigma </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Acido Kynurenic </td><td> Sigma </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomucoid inibitore della tripsina </td><td> Worthington </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> 30% Glucosio </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7,5% NaHCO 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td><td> 23,83 g sciolti in 100 ml di dH 2 O </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> FEG </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> Ricostituire in 1 ml di miscela di ormoni e aliquotare in 20 unità pl. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> Ricostituire in 0,5 ml di miscela di ormoni e aliquotare in 20 unità pl. </td></tr><tr><td> Eparina </td><td> Sigma </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrina </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 3188-A </td><td> 0,1 g sciolti in 4 ml di dH 2 0 </td></tr><tr><td> Putrescina </td><td> Sigma </td><td> P7505 </td><td> Sciogliere 9,61 mg in Apo-transferrina cosìluzione </td></tr><tr><td> Insulina </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td><td> Sciogliere 25 mg in 0,5 ml di HCl 0,1 N e aggiungere 3,5 ml di dH 2 0 </td></tr><tr><td> Selenio </td><td> Sigma </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> Progesterone </td><td> Sigma </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> Strumenti di dissezione standard </td><td> Strumenti Scienza Belle </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissezione microscopio </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaxis camera di preparazione </td></tr><tr><td> Quadrati di vetro di copertura diapositive </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> Acido cloridrico 6N </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> Vuoto Grasso per alte </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 millimetri Petri piatti </td><td> Fisher Scientific </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> Poli-L-lisina </td><td> Sigma </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> Scongelare e aliquotare in 150 unità pl </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> Utilizzare solo se indurre il differenziamento NPC, altrimenti utilizzare SFM + terreni di coltura EFH come sopra indicato </td></tr><tr><td> Conteggio microscopio </td><td> Olimpo </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Live cellulare Time-Lapse Imaging </td></tr><tr><td> Filo di argento </td><td> Alfa Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> Ultrapura agarosio </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> Calore Inactivated FBS </td><td> Sigma </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> Tubi in PVC </td><td> Fisher Scientific </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> Candeggina </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Siringa da 10 cc </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 18 gauge </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> Dremel trapano </td><td> Dremel </td><td> Modello 750 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio invertito dotato di umidificata, camera incubata </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Ricette <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6,2 ml </td></tr><tr><td>KCl 1M </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> 0,32 ml </td></tr><tr><td> 155mm NaHCO 3 </td><td> 16,9 ml </td></tr><tr><td> Glucosio 1M </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl 2 </td><td> 0,09256 ml </td></tr><tr><td> Penicillina-streptomicina </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Acqua autoclavata </td><td> 74 ml </td></tr></tbody></table> Artificiale liquido cerebrospinale <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume o massa </td></tr><tr><td> Artificiale liquido cerebrospinale </td><td> 30 ml </td></tr><tr><td> Pancreas tripsina bovina </td><td> 40 mg </td></tr><tr><td> Pecora testicoli ialuronidasi </td><td> 22,8 mg </td></tr><tr><td> Acido Kynurenic </td><td> 5 mg </td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt; Tripsina Solution <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume o massa </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 ml </td></tr><tr><td> Ovomucoid inibitore della tripsina </td><td> 10 mg </td></tr></tbody></table> Inibitore della tripsina Solution <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Acqua autoclavata </td><td> 37 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 ml </td></tr><tr><td> 30% Glucosio </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 7,5% NaHCO 3 </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Transferrina, putrescina soluzione </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> 25 mg soluzione di insulina </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Selenio </td><td> 100 &amp; mu; L </td></tr><tr><td> Progesterone </td><td> 100 pl </td></tr></tbody></table> Ormone Mix (100 ml totali, conservare a -20 ° C) <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Acqua autoclavata </td><td> 37,5 ml </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X (3:1) </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> 30% Glucosio </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 7,5% NaHCO 3 </td><td> 0,75 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,25 ml </td></tr><tr><td> Ormone mix </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Penicillina-streptomicina </td><td> 0,5 ml </td></tr></tbody></table> Siero Free Media EFH-SFM: aggiungere 10 ml di EGF, 10 pl di FGF, e 3,66 ml di eparina FBS-SFM: aggiungere 0,5 ml di FBS <tabile confine = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 pl </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3,6 ml </td></tr></tbody></table> Matrigel Soluzione aliquota Matrigel deve essere collocato in una scatola di ghiaccio e lasciata scongelare lentamente 4-5 ore per formare un liquido viscoso prima della miscelazione con SFM. Ciò garantirà la formazione di uno strato di substrato liscio Matrigel. Se non scongelato lentamente, il substrato risultante conterrà ciuffi di Matrigel, eventualmente ostacolare la migrazione cellulare. <table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Volume o massa </td></tr><tr><td> Ultrapura agarosio </td><td> 300 mg in 10 ml DDH 2 0 </td></tr><tr><td> SFM Calore FBS inattivato </td><td> 8 ml 2 ml </td></tr></tbody></table> MatrigelSoluzione Mix 8 ml di SFM con 2 ml di FBS inattivato al calore in un tubo 15 cc falcon. Mix agarosio con 10 ml DDH 2 0 in un matraccio di Erlenmeyer e riscaldare in un forno a microonde per 30 sec a 10 sec-intervalli, garantendo per rimuovere la soluzione dalla microonde dopo ogni intervallo di 10 secondi e mescolare. Dopo la finale di 10 secondi periodo di forno a microonde, mescolare la soluzione di agarosio con il SFM / soluzione di FBS e conservare in un bagno d&#39;acqua ° 57 C. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

La scoperta di staminali e cellule progenitrici (collettivamente chiamati cellule precursori neurali) (NPC) nel cervello dei mammiferi adulti ha portato ad un corpo di ricerca finalizzata ad utilizzare le proprietà multipotenti e proliferativi di queste cellule per lo sviluppo di strategie neurorigenerativo. Un punto critico per il successo di tali strategie è la mobilitazione di NPC verso un sito di lesione dopo trapianto esogena o per migliorare la risposta dei precursori endogeni che si trovano nella regione periventricolare del SNC. Di conseguenza, è essenziale per comprendere i meccanismi che promuovono, guidare, e migliorare la migrazione NPC. Il nostro lavoro si concentra su l&#39;utilizzo di campi elettrici a corrente diretta (dcEFs) per la promozione e la migrazione diretta NPC - un fenomeno noto come galvanotaxis. Campi elettrici endogeni fisiologici operato come spunti critici per la migrazione delle cellule durante il normale sviluppo e la riparazione delle ferite. Interruzione farmacologica dellatrans-neurale potenziale tubo in embrioni axolotl causa gravi malformazioni dello sviluppo 1. Nel contesto della guarigione delle ferite, il tasso di riparazione di cornea feriti è direttamente correlata con la grandezza del potenziale lesione epiteliale che sorge dopo la lesione, come mostrato dal miglioramento farmacologico o interruzione di questo dcEF 2-3. Abbiamo dimostrato che adulti NPC subependimali incontro a rapida e diretta migrazione catodiche in vitro quando esposti ad un dcEF applicata esternamente. In questo protocollo si descrivono le tecniche del nostro laboratorio per la creazione di un saggio galvanotaxis semplice ed efficace ad alta risoluzione, osservazione a lungo termine della traslocazione cellula diretto del corpo (migrazione) su una singola cellula. Questo saggio sarebbe adatto per indagare i meccanismi che regolano la trasduzione dcEF in motilità cellulare attraverso l&#39;uso di topi transgenici o knockout, brevi RNA interferenti, o agonisti dei recettori specifici / antagonisti.

Analisi cinematica rivela che in presenza di un mV / mm 250 dcEF, NPCs indifferenziate esporre galvanotaxis altamente orientati e rapido verso il catodo (figura 5A, Movie 1). In assenza di un dcEF, movimento casuale delle cellule si osserva (figura 5B, Movie 2). A questa forza di campo,&gt; 98% di NPCs indifferenziate migrare per l&#39;intero 6-8 hr per cui essi vengono esposte, e poiché le cellule morte non migrano questo suggerisce che essi rimangono vitali durante questo periodo, in...

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A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

In questo protocollo si dimostra come costruire camere personalizzate che consentono l&#39;applicazione di un campo di corrente elettrica diretta a consentire time-lapse imaging del cervello adulto derivato neurale traslocazione cellula precursore durante galvanotaxis.

Un test Galvanotaxis Analisi della Cinetica precursori neurali migrazione cellulare in un campo applicato esternamente diretto Corrente elettrica

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-formanti colonia saggio Cell: un test per discriminare Bona Fide cellule staminali neurali da cellule progenitrici neurali

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Ricerca

Neuroscienze

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Posizionamento elettrodo e Montage stimolazione transcranica diretta in corrente

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Analisi della migrazione cresta neurale cellulare Trunk con un Modified Zigmond Assay Camera

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Riproducibile nervo sciatico Crush mouse e successiva valutazione da parte della Rigenerazione intera analisi Muscle Monte

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Analisi della migrazione cresta neurale e la differenziazione delle specie da Cross-trapianto

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The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Il saggio neuroblasti: un test per la generazione e arricchimento delle cellule progenitrici neuronali di differenziare i Progeny cellule staminali neurali in citometria a flusso

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Isolamento e la coltura delle cellule della cresta neurale da Embryonic Murine tubo neurale

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A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

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