Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
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この作品は、自然科学とカナダ工学研究会議（助成＃249669および＃482986）とカナダの心臓と脳卒中財団（助成金＃485508）によって賄われています。著者は実験的なプロトコルを開発中で彼らの支援のためのユーセフ·エル·ハイエク博士とチーワンに感謝します。

動物の取り扱いに関係するすべての手順は、制度ガイドライン（プロトコルはありません。20009387）に従い、トロント動物ケア委員会の大学によって承認された。次のメソッドは、該当する場合、層流フードで、無菌のツールやテクニックを使用して実行されるべきである。 以下のプロトコルのテキストでは、フレーズ &quot;EFH-SFMは&quot;上皮細胞増殖因子、塩基性線維芽?...

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	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

このプロトコルは、先行研究7-9のよく確立された方法の中から適応されています。 Galvanotactic室は、細胞播種の閉じ込めのためのよく独立したガラス張りの建設を含むさまざまなテクニック、のさまざまな方法を使って、または中央トラフ10,11の微細加工にCO 2レーザーアブレーション法を用いて構築することができる。いくつかのテクニックは他よりも面倒でコスト?...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> アイテムの名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 神経前駆細胞の単離 </td></tr><tr><td> 2MのNaCl </td><td>シグマ</td><td> S5886 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解11.688グラム</td></tr><tr><td> 1MのKCl </td><td>シグマ</td><td> P5405 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解した7.456グラム</td></tr><tr><td> 1M MgCl 2を </td><td>シグマ</td><td> M2393 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解20.33グラム</td></tr><tr><td> 155 MMのNaHCO 3 </td><td>シグマ</td><td> S5761 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解した1.302グラム</td></tr><tr><td> 0.5Mグル​​コース</td><td>シグマ</td><td> G6152 </td><td> 100に溶解し9.01グラムミリリットルのdH 2 O </td></tr><tr><td> 108 mMのCaCl 2 </td><td>シグマ</td><td> C7902 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解した1.59グラム</td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td>ギブコ</td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ膵臓トリプシン</td><td>シグマ</td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td>羊は精巣ヒアルロニダーゼ</td><td>シグマ</td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td>キヌレン酸</td><td>シグマ</td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td>オボムコイドトリプシンインヒビター</td><td>ワージントン</td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td>インビトロジェン</td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> [F12] </td><td>インビトロジェン</td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> 30％のグルコース</td><td>シグマ</td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7.5パーセントのNaHCO 3 </td><td>シグマ</td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td>シグマ</td><td> H3375 </td><td> 100ミリリットルのdH 2 Oに溶解23.83グラム</td></tr><tr><td> L-グルタミン酸</td><td>ギブコ</td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td>インビトロジェン</td><td> PMG8041 </td><td> 20μlの単位にホルモンミックスとアリコート1mlの溶解。 </td></tr><tr><td> FGF </td><td>インビトロジェン</td><td> PHG0226 </td><td> 20μlの単位にホルモンミックスとアリコートを0.5mlで再構成する。 </td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>シグマ</td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td>アポトランスフェリン</td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 3188-AT </td><td> 0.1gを4ミリリットルのdH 2 0に溶解</td></tr><tr><td>プトレッシン</td><td>シグマ</td><td> P7505 </td><td>そうアポトランスフェリンに9.61 mgを溶解分離能</td></tr><tr><td>インスリン</td><td>シグマ</td><td> I5500 </td><td> 0.1NのHClを0.5mlに25mgを溶解するとdH 2 0の3.5ミリリットルに追加</td></tr><tr><td>セレン</td><td>シグマ</td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td>プロゲステロン</td><td>シグマ</td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td>標準解剖ツール</td><td>ファイン科学ツール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> STEMI 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 走電性商工会議所の準備 </td></tr><tr><td>正方形のガラスカバースライド</td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N塩酸</td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td>高真空用グリース</td><td>ダウコーニング</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60ミリメートルペトリ皿</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td>ポリエルリジン</td><td>シグマ</td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル</td><td> BD Biosciences社</td><td> 354234 </td><td> 150μlの単位に解凍し、アリコート</td></tr><tr><td> FBS </td><td>インビトロジェン</td><td> 10082139 </td><td>上記で示したように、NPCの分化を誘導する場合にのみ使用し、それ以外の場合は、SFM + EFH培養培地を使用</td></tr><tr><td>計数顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 細胞タイムラプスイメージングを生きる </td></tr><tr><td>銀線</td><td> Alfa Aesar社</td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td>超高純度アガロース</td><td>インビトロジェン</td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td>熱Inactivated FBS </td><td>シグマ</td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> PVCチューブ</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;内径x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td>漂白剤</td><td>クロロックス</td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10ccの注射器</td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 18ゲージの針</td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td>ドレメルドリル</td><td>ドレメル</td><td>モデル750 </td><td></td></tr><tr><td>加湿、インキュベート室を備えた倒立顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> AXIOVERT-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>レシピ<table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> ボリューム </td></tr><tr><td> 2MのNaCl </td><td> 6.2ミリリットル</td></tr><tr><td>1MのKCl </td><td> 0.5ミリリットル</td></tr><tr><td> 1M MgCl 2を </td><td> 0.32ミリリットル</td></tr><tr><td> 155MMのNaHCO 3 </td><td> 16.9ミリリットル</td></tr><tr><td> 1Mグルコース</td><td> 1ミリリットル</td></tr><tr><td> 108 mMのCaCl 2 </td><td> 0.09256ミリリットル</td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td> 1ミリリットル</td></tr><tr><td>オートクレーブ処理水</td><td> 74ミリリットル</td></tr></tbody></table> 人工脳脊髄液 <table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> 体積または質量 </td></tr><tr><td>人工脳脊髄液</td><td> 30ミリリットル</td></tr><tr><td>ウシ膵臓トリプシン</td><td> 40 mgの</td></tr><tr><td>羊は精巣ヒアルロニダーゼ</td><td> 22.8ミリグラム</td></tr><tr><td>キヌレン酸</td><td> 5mgを</td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt;のトリプシン溶液<table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> 体積または質量 </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15ミリリットル</td></tr><tr><td>オボムコイドトリプシンインヒビター</td><td> 10mgを</td></tr></tbody></table> トリプシン阻害剤溶液 <table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> ボリューム </td></tr><tr><td>オートクレーブ処理水</td><td> 37ミリリットル</td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10ミリリットル</td></tr><tr><td> 30％のグルコース</td><td> 2ミリリットル</td></tr><tr><td> 7.5パーセントのNaHCO 3 </td><td> 1.5ミリリットル</td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0.5ミリリットル</td></tr><tr><td>トランスフェリン、プトレシンソリューション</td><td> 4ミリリットル</td></tr><tr><td> 25mgのインスリン溶液</td><td> 4ミリリットル</td></tr><tr><td>セレン</td><td> 100＆ムー;リットル</td></tr><tr><td>プロゲステロン</td><td> 100μlの</td></tr></tbody></table> ホルモンミックス （-20℃で100mlの合計、店舗） <table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> ボリューム </td></tr><tr><td>オートクレーブ処理水</td><td> 37.5ミリリットル</td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12（3:1） </td><td> 5ミリリットル</td></tr><tr><td> 30％のグルコース</td><td> 1ミリリットル</td></tr><tr><td> 7.5パーセントのNaHCO 3 </td><td> 0.75ミリリットル</td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0.25ミリリットル</td></tr><tr><td>ホルモンミックス</td><td> 5ミリリットル</td></tr><tr><td> L-グルタミン酸</td><td> 0.5ミリリットル</td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td> 0.5ミリリットル</td></tr></tbody></table> 無血清培地EFH-SFM：0.5ミリリットルのFBSを追加したEGFの10μlに、FGFの10μl、およびヘパリンFBS-SFMの3.66μlを加える<taBLE国境= &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> アイテム </td><td> ボリューム </td></tr><tr><td>マトリゲル</td><td> 150μlの</td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3.6ミリリットル</td></tr></tbody></table> マトリゲルソリューションマトリゲルのアリコートを氷の箱に入れて、SFMと混合する前に、粘性のある液体を形成するために4-5時間かけてゆっくりと解凍させなければならない。これは、マトリゲル基板の平滑な層の形成を確実にするでしょう。ゆっくりと解凍されていない場合は、得られた基板は、おそらく細胞遊走を阻害する、マトリゲルの塊を含んでいます。 <table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> 体積または質量 </td></tr><tr><td>超高純度アガロース</td><td> 10ミリリットルのddH 2 0で300mgの</td></tr><tr><td> SFM 熱不活性化FBS </td><td> 8ミリリットル 2ミリリットル</td></tr></tbody></table> マトリゲル解決策は、15ccのファルコンチューブに2ミリリットル熱不活性化FBSでSFMの8ミリリットルを混ぜる。ミックスの三角フラスコ中で10ミリリットルのddH 2 0のアガロース、および30秒で、10秒間隔のために電子レンジでの加熱は、各10秒間隔の後に電子レンジから溶液を除去し、徹底的に混ぜて確保。最後の10秒電子レンジ期間の後、57℃の湯浴のSFM / FBS溶液とストアとアガロース溶液を混ぜる。 </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

哺乳類成体脳における神経幹細胞および前駆細胞の発見（以下総称して呼ばれる神経前駆細胞）（NPCは）神経再生戦略の開発のため、これらの細胞の多能性や増殖特性を利用することを目的とした研究の本体につながっている。そのような戦略の成功のための重要なステップは、外因性の移植後の病変部位に向かってNPCの動員であるかCNSの脳室周囲白質領域で発見された内因性の前駆体の応答を増強する。したがって、それは、推進導き、NPCの移行を強化するメカニズムを理解することが不可欠です。走電性として知られている現象 - 私たちの仕事は、NPCの移行を促進し、指示するために直流電界の利用（dcEFs）に焦点を当てています。内因性の生理的な電界が正常な発達と創傷修復中に細胞遊走のための重要な手がかりとして機能する。の薬理学的混乱アホロートル胚におけるトランス神経管電位は重度の発達奇形1を引き起こします。このDCEF 2-3の薬理強化や中断によって示されるように、創傷治癒のコンテキストでは、傷ついた角膜の修復速度が直接、損傷後生じる上皮創傷電位の大きさと相関している。我々は、外部から印加されたDCEFにさらされたときに成人上衣下NPCが試験管内で迅速かつ監督陰極移行を受けることを明らかにした。このプロトコルでは、高分解能、単一細胞レベルでディレク細胞体転座（マイグレーション）の長期観測のためのシンプルで効果的な走電性アッセイを作成するために私たちの研究室の手法について説明します。このアッセイは、トランスジェニックやノックアウトマウスでは、短鎖干渉RNA、または特定の受容体アゴニスト/アンタゴニストの使用を介して細胞の運動性にdCEFの伝達を制御するメカニズムを調査に適しているであろう。

キネマティック解析は、250 mVの/ミリメートルDCEFの存在下で、未分化なNPCが陰極に向かって非常に導かれ、急速な走電性（ 図5A、映画1）を示すことが明らかになった。 DCEFの非存在下では、細胞のランダムな動きが（ 図5B、ムービー2）が観察された。この電界強度では、未分化のNPCの&gt; 98％が撮像されているために全体の6〜8時間のために移行し、死細胞は移行され...

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A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

このプロトコルでは、走電性の間に神経前駆細胞の転座に由来する成体脳のタイムラプスイメージングを可能にするために直流電界を印加することを許可するカスタムチャンバーを構築する方法を示します。

外部から印加された直流電界における神経前駆細胞の移行動態の解析のための走電性アッセイ

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

神経コロニー形成細胞アッセイ：神経前駆細胞から善意の神経幹細胞を区別するアッセイ

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

経頭蓋直流電流刺激で電極の位置とモンタージュ

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

修正Zigmondチャンバーアッセイを使用してトランク神経冠細胞移動の解析

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

ホールマウントマッスル分析による再現性のあるマウスの坐骨神経クラッシュと再生のその後の評価

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

クロス種の移植による神経堤の移行および分化の解析

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

神経芽細胞アッセイ：フローサイトメトリーを用いて神経幹細胞の子孫を差別から神経前駆細胞の生成と濃縮のためのアッセイ

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

マウス腸の神経前駆細胞の定量細胞遊走アッセイ

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

自由水泳弱電気魚の長期的な行動の追跡

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

リモートでチャイルドの経頭蓋直通電流刺激: 安全性と忍容性に関する更新プログラム

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...