Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

이 작품은 자연 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (보조금 # 249669, 그리고 # 482986)와 심장과 캐나다의 행정 재단 (보조금 # 485508)으로 운용되고 있습니다. 저자는 실험 프로토콜을 개발에서의 도움을 요 세프 엘 하이에크 박사 치 완 감사드립니다.

동물 처리에 관련된 모든 절차는 제도적 지침 (프로토콜 안돼. 20009387)에 따라 토론토 동물 관리위원회의 대학에 의해 승인되었습니다. 다음과 같은 방법은 해당되는 층류 후드에 무균 도구와 기술을 사용하여 수행해야합니다. 아래의 프로토콜 텍스트에서 구문 &quot;EFH-SFM은&quot;표피 성장 인자, 기초 섬유 아세포 성장 인자와 헤파린과 보충 혈청 무료 미디어를 의미합니다. ?...

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	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

이 프로토콜은 이전 연구 7-9의 잘 알려진 방법에서 적응되었습니다. Galvanotactic 챔버는 세포 시딩의 구속, 또는 중앙 트로프 10,11의 microfabrication에 대한 CO 2 레이저 절제를 사용하는 잘 별도의 유리의 건설 등 다양한 기법, 다양한을 사용하여 구성 할 수 있습니다. 일부 기술은 다른 것보다 더 힘든거나 비용이 많이 드는 될 수 있습니다. 우리는 일반적으로 대부분의 세포 생...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> 항목의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 신경 전구체 세포 절연 </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 시그마 </td><td> S5886 </td><td> 11.688 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> 시그마 </td><td> P5405 </td><td> 7.456 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> 100 MgCl 2 </td><td> 시그마 </td><td> M2393 </td><td> 20.33 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> 155 MM NaHCO 3 </td><td> 시그마 </td><td> S5761 </td><td> 1.302 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> 0.5M 포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G6152 </td><td> 9.01 g 100에 용해ML DH 2 O </td></tr><tr><td> 108 MM CaCl 2 </td><td> 시그마 </td><td> C7902 </td><td> 1.59 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> Gibco </td><td> 15,070 </td><td></td></tr><tr><td> 소 췌장의 트립신 </td><td> 시그마 </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> 양 hyaluronidase 고환 </td><td> 시그마 </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Kynurenic 산 </td><td> 시그마 </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomucoid 트립신 억제제 </td><td> 워싱턴 </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> 30 % 포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7.5 % NaHCO 3 </td><td> 시그마 </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> 100 HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H3375 </td><td> 23.83 g 100 ML DH 2 O에 용해 </td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Gibco </td><td> 25,030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> 20 μl 단위로 호르몬 믹스와 나누어지는 1 ML에 Reconstitute. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> 20 μl 단위로 호르몬 믹스와 나누어지는의 0.5 ML의 Reconstitute. </td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 시그마 </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> APO-트랜스페린 </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 3188-AT </td><td> 0.1 g 4 ML DH 2 0에 녹 </td></tr><tr><td> Putrescine </td><td> 시그마 </td><td> P7505 </td><td> APO-트랜스페린에 9.61 밀리그램을 수 있도록 분해lution </td></tr><tr><td> 인슐린 </td><td> 시그마 </td><td> I5500 </td><td> 0.1N HCL의 0.5 ML에 25 밀리그램를 해산하고 DH 2 0 3.5 ML에 추가 </td></tr><tr><td> 셀렌 </td><td> 시그마 </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> Progesterone </td><td> 시그마 </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> 표준 해부 도구 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaxis 상공 회의소 준비 </td></tr><tr><td> 광장 유리 커버 슬라이드 </td><td> VWR </td><td> 16,004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N 염산 </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> 높은 진공 그리스 </td><td> 다우 코닝 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60mm 페트리 요리 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> 폴리-L-라이신 </td><td> 시그마 </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> 150 μl 단위로 해동과 나누어지는 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> NPC의 차별화를 유도 경우에만 사용, 그렇지 않으면 SFM 사용 + EFH 문화 미디어는 위에 표시 </td></tr><tr><td> 현미경을 계산 </td><td> 하늘 </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 셀 시간 경과 영상 라이브 </td></tr><tr><td> 실버 와이어 </td><td> 알파 Aesar </td><td> 11,434 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure 아가로 오스 </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> 열 Inactivated FBS </td><td> 시그마 </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> PVC 관 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 80000006 </td><td> 32분의 3 &quot;ID X 32분의 5&quot;OD </td></tr><tr><td> 표백 </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 CC 주사기 </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 18 게이지 바늘 </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> 드레 멜 드릴 </td><td> 드레 멜 </td><td> 모델 750 </td><td></td></tr><tr><td> 역 현미경 humidified, incubated 챔버가 장착 </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 요리법 <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 음량 </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6.2 ML </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0.5 ML </td></tr><tr><td> 100 MgCl 2 </td><td> 0.32 ML </td></tr><tr><td> 155mM NaHCO 3 </td><td> 16.9 ML </td></tr><tr><td> 1M 포도당 </td><td> 한 ML </td></tr><tr><td> 108 MM CaCl 2 </td><td> 0.09256 ML </td></tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> 한 ML </td></tr><tr><td> Autoclaved 물 </td><td> 74 ML </td></tr></tbody></table> 인공 뇌척수 <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 볼륨 또는 질량 </td></tr><tr><td> 인공 뇌척수 </td><td> 30 ML </td></tr><tr><td> 소 췌장의 트립신 </td><td> 40 MG </td></tr><tr><td> 양 hyaluronidase 고환 </td><td> 22.8 MG </td></tr><tr><td> Kynurenic 산 </td><td> 5 MG </td></tr></tbody></table> &lt;STRONG&gt; 트립신 솔루션 <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 볼륨 또는 질량 </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 ML </td></tr><tr><td> Ovomucoid 트립신 억제제 </td><td> 10 MG </td></tr></tbody></table> 트립신 억제제 솔루션 <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 음량 </td></tr><tr><td> Autoclaved 물 </td><td> 37 ML </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 ML </td></tr><tr><td> 30 % 포도당 </td><td> 2 ML </td></tr><tr><td> 7.5 % NaHCO 3 </td><td> 1.5 ML </td></tr><tr><td> 100 HEPES </td><td> 0.5 ML </td></tr><tr><td> 트랜스페린, Putrescine 솔루션 </td><td> 4 ML </td></tr><tr><td> 25 MG의 인슐린 솔루션 </td><td> 4 ML </td></tr><tr><td> 셀렌 </td><td> 100 &amp; 무; 리터 </td></tr><tr><td> Progesterone </td><td> 100 μl </td></tr></tbody></table> 호르몬 믹스 (-20 ° C 100 ML 총, 상점) <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 음량 </td></tr><tr><td> Autoclaved 물 </td><td> 37.5 ML </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 (3시 1분) </td><td> 5 ML </td></tr><tr><td> 30 % 포도당 </td><td> 한 ML </td></tr><tr><td> 7.5 % NaHCO 3 </td><td> 0.75 ML </td></tr><tr><td> 100 HEPES </td><td> 0.25 ML </td></tr><tr><td> 호르몬 믹스 </td><td> 5 ML </td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> 0.5 ML </td></tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> 0.5 ML </td></tr></tbody></table> 혈청 무료 미디어 EFH-SFM은 : EGF의 10 μl, FGF 10 μl, 그리고 헤파린 FBS-SFM의 3.66 μl를 추가합니다 : 0.5 ML FBS를 추가 <ta경 국경 = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> 항목 </td><td> 음량 </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3.6 ML </td></tr></tbody></table> Matrigel 솔루션 Matrigel의 나누어지는이 얼음 상자에 위치와 SFM을 혼합하기 전에 점성 액체를 형성 4-5시간 걸쳐 천천히 해동 할 수 있어야합니다. 이 Matrigel 기판의 부드러운 층의 형성을 보장합니다. 천천히 해동하지 않을 경우, 결과 기판 가능성이 세포 이주를 방해, Matrigel의 clumps 포함됩니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 볼륨 또는 질량 </td></tr><tr><td> UltraPure 아가로 오스 </td><td> 10 ML ddH 2 0 300 MG </td></tr><tr><td> SFM 열 Inactivated FBS </td><td> 8 ML 2 ML </td></tr></tbody></table> Matrigel솔루션 15 참조 매 관에 2 ML 열 inactivated FBS과 SFM 8 ML을 섞는다. 믹스 10 ML ddH Erlenmeyer 플라스크 2 0 아가로 오스, 그리고 10 초 간격으로 30 초 동안 전자 레인지에서의 열, 각 10 초 간격 후 전자 레인지에서 솔루션을 제거하고 철저하게 혼합 할 수 있도록. 마지막 10 초 전자 렌지 기간 후, 57 ° C의 물을 욕조에있는 SFM / FBS 솔루션과 점포 아가로 오스 솔루션을 섞는다. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

신경 줄기 및 성인 포유류의 뇌 전구 세포 (이하 칭했다 신경 전구체 세포) (NPCs)의 발견은 neuroregenerative 전략의 개발이 세포 multipotent과 proliferative 속성을 활용하기위한 연구의 몸 시켰습니다. 이러한 전략의 성공을위한 중요한 단계는 외인성 이식 후 병변 사이트 향해 나 CNS의 periventricular 지역에서 발견되는 내생 전구체의 반응을 향상시키기 위해 NPCs의 동원이다. 따라서, 그것은, 홍보 안내 및 NPC 마이그레이션을 강화 메커니즘을 이해하는 것이 필수적입니다. galvanotaxis로 알려진 현상​​ - 우리의 작품은 홍보 할 수 직류 전기 분야의 활용 (dcEFs)와 직접 NPC 마이그레이션에 초점을 맞추고 있습니다. 내생 생리 전기 분야는 정상적인 개발 및 상처 수리하는 동안 세포 이주에 대한 중요한 단서로 기능을 수행합니다. 의 약리 중단axolotl 배아의 횡단 신경 튜브의 잠재력은 심각한 발달 기형 1됩니다. 상처 치유의 맥락에서 상처 각막의 수리 율은 직접 dcEF 2-3의 약리 향상과 혼란에 도시 된 바와 같이, 부상 후 발생하는 상피 상처 잠재력의 크기와 상관되어 있습니다. 우리는 외부 적용 dcEF에 노출되면 성인 subependymal NPCs는 체외에 신속하고 감독 cathodal 마이그레이션을받을 것을 증명하고있다. 이 프로토콜에서 우리는 높은 해상도, 단일 셀 수준에서 직접 전지 본체의 translocation (마이그레이션)의 장기 관찰을위한 간단하고 효과적인 galvanotaxis 분석을 만들기위한 우리 연구실의 기술을 설명합니다. 이 분석은 유전자 변형이나 한방 마우스, 짧은 간섭 RNA, 또는 특정 수용체​​ agonists / antagonists의 사용을 통해 세포 운동성에 dcEF의 도입을 규제 메커니즘을 조사에 적합한 것입니다.

동 분석은 250 MV / mm dcEF의 존재에 undifferentiated NPCs는 음극 대한 높은 이동 및 빠른 galvanotaxis (그림 5A, 영화 1) 전시 것을 보여줍니다. dcEF의 부재에서 세포의 무작위 운동 (그림 5B, 영화 2) 관찰된다. 이 필드 강도에서 undifferentiated NPCs의&gt; 98 %가 그들이 이미징하는 동안 전체 6-8 시간에 대한 마이그레이션, 죽은 세포가 마이그레이션되지 않기 때문에이 사람들이 dcEF의 부재 ?...

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A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

이 프로토콜에서 우리는 galvanotaxis 동안 신경 전구체 세포 translocation을 얻은 성인 뇌의 시간 경과 영상을 사용하려면 직류 전기장의 응용 프로그램을 허용 사용자 정의 챔버를 구성하는 방법을 보여줍니다.

외부 응용 직류 전기 분야에 신경 전구체 세포 마이그레이션 속도론 분석을위한 Galvanotaxis 분석

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

세포 어세를 형성 신경 콜로니 : 신경 전구 세포로부터 타고난 신경 줄기 세포를 차별 어세이

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

연구

신경과학

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Transcranial 직접 전류 자극의 전극 위치와 몬티지

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

수정 Zigmond 회의소 분석을 사용하여 트렁크 신경 크레스트 세포 마이그레이션 분석

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

전체 마운트 근육 분석에 의한 재현성 마우스 좌골 신경 크러시와 중생의 후속 평가

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

크로스 종 이식에 의한 신경 크레스트 마이 그 레이션과 차별화 분석

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast 분석 : 유동세포계측법을 사용하여 차별화 신경 줄기 세포에서 자손의 연결 전구 세포의 생성과 강화에 대한 분석

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

쥐과 장내 신경 전구 세포에 대한 양이 세포 이동의 분석

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

자유롭게 수영 약하게 전기 생선의 장기 행동 추적

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

원격으로 감독된 Transcranial 직접 전류 자극: 안전성 및 내성에 대 한 업데이트

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...