Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

Este trabalho é financiado pelas Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada (Grant # 249669 e # 482986) e Coração and Stroke Foundation of Canada (Grant # 485508). Os autores agradecem Youssef El-Hayek e Dr. Qi Wan por sua assistência no desenvolvimento dos protocolos experimentais.

Todos os procedimentos que envolvem manipulação de animais foram aprovados pela Universidade de Toronto Comitê Animal Care, de acordo com as diretrizes institucionais (protocolo no. 20009387). Os métodos que se seguem devem ser realizados utilizando ferramentas e técnicas estéreis, numa câmara de fluxo laminar, onde aplicável. No texto do protocolo a seguir, a frase &quot;EFH-SFM&quot; refere-se a meio isento de soro suplementado com factor de crescimento epidérmico, factor de cresc...

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	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

Este protocolo foi adaptado a partir de métodos bem estabelecidos de estudos anteriores 7-9. Galvanotactic câmaras podem ser construídas utilizando uma variedade de técnicas diferentes, incluindo a construção de um poço de vidro separada para confinamento de sementeira de células, ou utilizando a ablação por laser de CO 2 para a microfabricação da calha central, 10,11. Algumas técnicas podem ser mais laboriosa ou dispendiosa do que outros. Nós descrevemos um ensaio simples ...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> Nome do item </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Isolamento Celular Neural Precursor </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> 11,688 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> 7,456 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> 1M de MgCl2 </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> 20,33 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> 155 mM de NaHCO3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td> 1,302 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> Glicose 0,5 M </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> 9,01 g dissolvido em 100ml de dH2O </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl 2 </td><td> Sigma </td><td> C7902 </td><td> 1,59 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina de pâncreas bovino </td><td> Sigma </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> Sheep testículos hialuronidase </td><td> Sigma </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido quinurênico </td><td> Sigma </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomucóide inibidor de tripsina </td><td> Worthington </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> Glucose 30% </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td><td> 23,83 g dissolvido em 100 ml de dH2O </td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> Reconstituir em 1 ml de mistura de hormona e alíquota em 20 unidades ul. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> Reconstituir em 0,5 ml da mistura de hormona e alíquota em 20 unidades ul. </td></tr><tr><td> Heparina </td><td> Sigma </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrina </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 3188-AT </td><td> 0,1 g dissolvido em 4 ml de dH 2 0 </td></tr><tr><td> Putrescina </td><td> Sigma </td><td> P7505 </td><td> Dissolver 9,61 mg em Apo-transferrina assimlução </td></tr><tr><td> Insulina </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td><td> Dissolver 25 mg em 0,5 ml de HCl 0,1 N e adicionar 3,5 ml de dH 2 0 </td></tr><tr><td> Selênio </td><td> Sigma </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> Progesterona </td><td> Sigma </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> Ferramentas padrão de Dissecção </td><td> Belas Science Tools </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscópio de dissecção </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaxis Preparação Câmara </td></tr><tr><td> Lâminas de vidro tampa quadrada </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido clorídrico 6N </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> Graxa de alto vácuo </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 milímetros placas de Petri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> Poli-L-lisina </td><td> Sigma </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> Descongelar e alíquota em 150 unidades ul </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> Só use se induzir a diferenciação NPC, caso contrário use SFM + meios de cultura EFH como indicado acima </td></tr><tr><td> Contando microscópio </td><td> Olimpo </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Viver imagens de células Time-Lapse </td></tr><tr><td> Fio de prata </td><td> Alfa Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> Calor inatividadeated FBS </td><td> Sigma </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de PVC </td><td> Fisher Scientific </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> Alvejante </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Seringa de 10 cc </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> Agulha de calibre 18 </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> Broca Dremel </td><td> Dremel </td><td> Modelo 750 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio invertido equipado com câmara, umidificado incubada </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Receitas <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6,2 ml </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> 1M de MgCl2 </td><td> 0,32 ml </td></tr><tr><td> 155mm de NaHCO3 </td><td> 16,9 ml </td></tr><tr><td> A glicose 1M </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl 2 </td><td> 0,09256 ml </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Água esterilizada </td><td> 74 ml </td></tr></tbody></table> Líquido cefalorraquidiano artificial <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume ou massa </td></tr><tr><td> Líquido cefalorraquidiano artificial </td><td> 30 ml </td></tr><tr><td> Tripsina de pâncreas bovino </td><td> 40 mg </td></tr><tr><td> Sheep testículos hialuronidase </td><td> 22,8 mg </td></tr><tr><td> Ácido quinurênico </td><td> 5 mg </td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt; Solução de tripsina <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume ou massa </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 ml </td></tr><tr><td> Ovomucóide inibidor de tripsina </td><td> 10 mg </td></tr></tbody></table> Solução de tripsina Inhibitor <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Água esterilizada </td><td> 37 ml </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X </td><td> 10 ml </td></tr><tr><td> Glucose 30% </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO3 </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Transferrina, solução Putrescine </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Solução a 25 mg de insulina </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Selênio </td><td> 100 e mu, L </td></tr><tr><td> Progesterona </td><td> 100 ul </td></tr></tbody></table> Mix hormona (100 ml no total loja, a -20 ° C) <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Água esterilizada </td><td> 37,5 ml </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10X (3:1) </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> Glucose 30% </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 7,5% de NaHCO3 </td><td> 0,75 ml </td></tr><tr><td> HEPES 1M </td><td> 0,25 ml </td></tr><tr><td> Mix de hormônio </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> 0,5 ml </td></tr></tbody></table> O soro livre de mídia EFH-SFM: adicionar 10 ul de EGF, 10 | il de FGF, e 3,66 ul de Heparina FBS-SFM: adicionar 0,5 ml de FBS <tafronteira vel = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> Item </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 ul </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3,6 ml </td></tr></tbody></table> Matrigel Solução alíquota Matrigel deve ser colocado numa caixa de gelo e deixou-se descongelar lentamente ao longo de 4-5 horas de modo a formar um líquido viscoso antes de misturar com SFM. Isto irá assegurar a formação de uma camada lisa de substrato Matrigel. Se não for descongelado lentamente, o substrato resultante irá conter aglomerados de Matrigel, possivelmente impedindo a migração de células. <table border="1"><tbody><tr><td> Item </td><td> Volume ou massa </td></tr><tr><td> UltraPure Agarose </td><td> 300 mg em 10 ml de DDQ 2 0 </td></tr><tr><td> SFM FBS inactivado pelo calor </td><td> 8 ml 2 ml </td></tr></tbody></table> MatrigelSolução Misture 8 ml de SFM com 2 ml de calor FBS inativado em um tubo falcon 15 cc. Mistura de agarose com 10 ml de DDQ 2 0 em um balão de Erlenmeyer, e de calor num forno de microondas durante 30 segundos em intervalos de 10 seg, assegurando para remover a solução a partir do forno de microondas depois de cada intervalo de 10 segundos e misturar completamente. Após a final microondas período de 10 seg, misture a solução de agarose com a SFM solução FBS / e armazenar em um banho de água 57 ° C. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

A descoberta de haste neural e células progenitoras (colectivamente denominadas células precursoras neurais) (NPCs) no cérebro de mamíferos adultos tem levado a um corpo da investigação sobre a utilização das propriedades multipotentes e proliferativa destas células para o desenvolvimento de estratégias neuroregenerative. Uma etapa essencial para o sucesso de tais estratégias é a mobilização de NPCs para um local da lesão após transplante exógena ou para aumentar a resposta dos precursores endógenos, que são encontradas na região periventricular do SNC. Assim, é essencial para compreender os mecanismos que promovem, orientar e melhorar a migração NPC. O nosso trabalho centra-se na utilização de corrente contínua de campos elétricos (dcEFs) para promover e migração NPC direta - um fenômeno conhecido como galvanotaxis. Endógenos fisiológicos campos elétricos funcionam como pistas fundamentais para a migração de células durante o desenvolvimento normal e da cicatrização. Perturbação farmacológica dotrans-neural potencial tubo em embriões axolotl provoca graves malformações do desenvolvimento 1. No contexto da cicatrização de feridas, a taxa de reparação de córnea ferida está directamente correlacionada com a magnitude do potencial epitelial que surge após a lesão, como mostrado pela melhoria farmacológica ou ruptura dessa dcEF 2-3. Nós demonstramos que o adulto NPCs subependimários sofrer rápida e dirigido migração catódica in vitro quando exposto a uma dcEF aplicado externamente. Neste protocolo, descrevemos nossas técnicas de laboratório para a criação de um ensaio galvanotaxis simples e eficaz para alta resolução, longo prazo de observação de translocação dirigido célula do corpo (migração) em um nível de uma única célula. Este ensaio seria adequado para investigar os mecanismos que regulam a transdução dcEF em motilidade celular através da utilização de ratinhos transgénicos ou knockout, curtas de ARN de interferência, ou agonistas / antagonistas de receptores específicos.

A análise cinemática revela que, na presença de um 250 dcEF mV / mm, NPCs indiferenciadas exibem galvanotaxis altamente dirigidos e rápida para o cátodo (Figura 5A, Movie 1). Na ausência de um dcEF, o movimento aleatório das células é observada (Figura 5B, Movie 2). Neste intensidade de campo,&gt; 98% de NPCs indiferenciadas migrar para o 6-8 hr inteiro para o qual são gravadas, e uma vez que as células mortas não migram isto sugere que eles permaneçam viáveis ​​durant...

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A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Neste protocolo demonstramos como construir câmaras personalizados que permitem a aplicação de um campo elétrico de corrente contínua para permitir lapso de tempo de imagem do cérebro adulto derivado translocação de células neurais precursor durante galvanotaxis.

Um Ensaio Galvanotaxis para Análise de Precursores Neurais Cinética migração celular em um campo aplicado externamente Corrente Contínua Elétrica

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neurais Colony-Forming Assay Cell: um ensaio para Discriminar Bona Fide células-tronco neurais de células progenitoras neurais

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Neurociência

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Posicionamento do eletrodo e Montage na estimulação transcraniana por corrente

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Análise de Tronco de Migração da crista neural celular usando uma modificação Zigmond Ensaio Câmara

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reprodutível mouse esmagamento do nervo ciático e subsequente avaliação de Regeneração por Análise Whole Mount muscular

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Análise de migração da crista neural e Diferenciação por Cross-espécies de Transplantes

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

O Ensaio neuroblasto: um ensaio para a Geração e Enriquecimento de células progenitoras neuronais de Diferenciando Progeny Neural Stem Cell utilizando citometria de fluxo

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolamento e cultivo de células da crista neural do tubo neural embrionário murino

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

Um ensaio de migração celular quantitativo para murinos progenitores neurais entéricas

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

Longo prazo Behavioral Rastreamento de Livremente Natação fracamente elétrico dos peixes

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

Remotamente controlados direta Transcranial estimulação atual: Uma atualização para a segurança e tolerabilidade

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...