Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

Detta arbete finansieras av naturvetenskaplig och teknisk forskning Council of Canada (bidrag # 249669 och # 482.986) och hjärtat och Stroke Foundation of Canada (bidrag # 485.508). Författarna tackar Youssef El-Hayek och Dr Qi Wan för deras hjälp att utveckla de experimentella protokoll.

Alla förfaranden som rör djurhantering godkändes av University of Toronto Animal Care kommittén i enlighet med institutionella riktlinjer (protokoll nr. 20.009.387). Följande metoder bör utföras med sterila verktyg och tekniker, i ett dragskåp med laminärt flöde i förekommande fall. I protokollet texten nedan, hänvisar uttrycket &quot;EFH-SFM&quot; till serumfria media kompletterade med epidermal tillväxtfaktor, basisk fibroblasttillväxtfaktor och heparin. EFH-SFM används när...

<ol>
	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

Detta protokoll har anpassats från väletablerade metoder för tidigare studier 7-9. Galvanotactic kammare kan konstrueras med användning av en mängd olika tekniker, inklusive byggandet av en separat glas väl för inneslutning av cellsådd, eller använda CO 2 laserablation för mikrotillverkning av den centrala tråget 10,11. Vissa tekniker kan vara mer arbetskrävande eller kostsam än andra. Vi har beskrivit en enkel och kostnadseffektiv analys för att bygga en NPC galvanotaxis k...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> Typ av produkt </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neural Prekursor cellisolering </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> 11,688 g löst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> 7,456 g upplöst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> 20,33 g upplöst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 155 mM NaHCOa 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td> 1,302 g upplöst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 0,5 M Glukos </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> 9,01 g upplöst i 100ml dH 2 O </td></tr><tr><td> 108 mM CaClj 2 </td><td> Sigma </td><td> C7902 </td><td> 1,59 g löst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> Penicillin-streptomycin </td><td> Gibco </td><td> 15.070 </td><td></td></tr><tr><td> Bovint pankreas trypsin </td><td> Sigma </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> Får testiklarna hyaluronidas </td><td> Sigma </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Kynurensyra </td><td> Sigma </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomukoid trypsininhibitor </td><td> Worthington </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> 30% Glukos </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> 7,5% NaHCOs 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td><td> 23,83 g upplöst i 100 ml dH 2 O </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Gibco </td><td> 25.030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> Bered i 1 ml hormon mix och alikvot i 20 pl enheter. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> Bered i 0,5 ml hormon mix och alikvot i 20 pl enheter. </td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Sigma </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrin </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 3188-AT </td><td> 0,1 g löst i 4 ml dHaO 2 0 </td></tr><tr><td> Putrescin </td><td> Sigma </td><td> P7505 </td><td> Lös 9,61 mg i Apo-transferrin sålution </td></tr><tr><td> Insulin </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td><td> Lös 25 mg i 0,5 ml 0,1 N HCl och tillsätt 3,5 ml dHaO 2 0 </td></tr><tr><td> Selen </td><td> Sigma </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> Sigma </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> Standard Dissektionsverktyg Verktyg </td><td> Fine Science Tools </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissektion mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> STEMI 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaxis Chamber Förberedelse </td></tr><tr><td> Kvadratiska täckglas bilder </td><td> VWR </td><td> 16.004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N saltsyra </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> Högvakuumsystem fett </td><td> DOW CORNING </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 mm Petriskålar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> Poly-L-lysin </td><td> Sigma </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354.234 </td><td> Upptining och alikvot till 150 | il enheter </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> Använd endast om förmå NPC differentiering, på annat sätt använda SFM + EFH odlingsmedier som anges ovan </td></tr><tr><td> Räkna mikroskop </td><td> Olympus </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Levande celler Time-lapse avbildning </td></tr><tr><td> Silvertråd </td><td> Alfa Aesar </td><td> 11.434 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure Agaros </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> Värme Inactivrerad FBS </td><td> Sigma </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> PVC-slang </td><td> Fisher Scientific </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> Blekmedel </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 cm ^ spruta </td><td> BD </td><td> 309.604 </td><td></td></tr><tr><td> 18 gauge nål </td><td> BD </td><td> 305.195 </td><td></td></tr><tr><td> Dremel borr </td><td> Dremel </td><td> Modell 750 </td><td></td></tr><tr><td> Inverterat mikroskop utrustat med fuktad, ruvade kammare </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Recept <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6,2 ml </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> 1M MgCl 2 </td><td> 0,32 ml </td></tr><tr><td> 155mm NaHCOs 3 </td><td> 16,9 ml </td></tr><tr><td> 1M Glukos </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 108 mM CaClj 2 </td><td> 0,09256 ml </td></tr><tr><td> Penicillin-streptomycin </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Autoklaverat vatten </td><td> 74 ml </td></tr></tbody></table> Artificiell cerebrospinalvätska <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym eller vikt </td></tr><tr><td> Artificiell cerebrospinalvätska </td><td> 30 ml </td></tr><tr><td> Bovint pankreas trypsin </td><td> 40 mg </td></tr><tr><td> Får testiklarna hyaluronidas </td><td> 22,8 mg </td></tr><tr><td> Kynurensyra </td><td> 5 mg </td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt; trypsinlösning <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym eller vikt </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 ml </td></tr><tr><td> Ovomukoid trypsininhibitor </td><td> 10 mg </td></tr></tbody></table> Trypsininhibitor Lösning <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym </td></tr><tr><td> Autoklaverat vatten </td><td> 37 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 ml </td></tr><tr><td> 30% Glukos </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 7,5% NaHCOs 3 </td><td> 1,5 ml </td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Transferrin, putrescin lösning </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> 25 mg insulinlösning </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> Selen </td><td> 100 &amp; mu, L </td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> 100 pl </td></tr></tbody></table> Hormon Mix (100 ml totalt, förvara vid -20 ° C) <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym </td></tr><tr><td> Autoklaverat vatten </td><td> 37,5 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 (3:1) </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> 30% Glukos </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> 7,5% NaHCOs 3 </td><td> 0,75 ml </td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> 0,25 ml </td></tr><tr><td> Hormon mix </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> 0,5 ml </td></tr><tr><td> Penicillin-streptomycin </td><td> 0,5 ml </td></tr></tbody></table> Serumfritt medium EFH-SFM: tillsätt 10 ul av EGF, 10 pl av FGF, och 3,66 pl av Heparin FBS-SFM: tillsätt 0,5 ml FBS <taBLE border = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 pl </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3,6 ml </td></tr></tbody></table> Matrigel Lösning Matrigel alikvot bör placeras i en låda av is och fick tina långsamt under 4-5 timmar till att bilda en viskös vätska före blandning med SFM. Detta kommer att säkerställa bildandet av ett slätt skikt av Matrigel substrat. Om inte tinas långsamt, kommer den resulterande substratet innehåller klumpar av Matrigel, eventuellt hindrar cellmigration. <table border="1"><tbody><tr><td> Punkt </td><td> Volym eller vikt </td></tr><tr><td> UltraPure Agaros </td><td> 300 mg i 10 ml DDH 2 0 </td></tr><tr><td> SFM Värmeinaktiverat FBS </td><td> 8 ml 2 ml </td></tr></tbody></table> MatrigelBlanda 8 ml SFM med 2 ml värmeinaktiverad FBS i en 15 cc Falcon-rör. Blanda agaros med 10 ml DDH 2 0 i en Erlenmeyerkolv och värme i en mikrovågsugn i 30 sekunder i 10-sekunders intervall, se ta bort lösningen från mikrovågsugnen efter varje 10-sek intervall och grundligt blanda. Efter den sista 10-sek mikrovågsugn perioden blanda agaroslösningen med SFM / FBS lösning och förvara i en 57 ° C vattenbad. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

Upptäckten av neurala stam-och stamfaderceller (kollektivt benämnda neurala prekursorceller) (NPC) i den vuxna däggdjur hjärnan har lett till en mängd forskning som syftar till att utnyttja de multipotenta och proliferativa egenskaperna hos dessa celler för utveckling av neuroregenerative strategier. Ett kritiskt steg för att lyckas med sådana strategier är att mobilisera NPC mot en lesion plats efter exogent transplantation eller för att öka responsen av de endogena prekursorer som finns i periventrikulär området av CNS. Därför är det viktigt att förstå de mekanismer som främjar, vägleda och förbättra NPC migration. Vårt arbete fokuserar på utnyttjandet av likström elektriska fält (dcEFs) för att främja och direkt NPC migration - ett fenomen som kallas galvanotaxis. Endogena fysiologiska elektriska fält fungerar som kritiska ledtrådar för cellmigrering under normal utveckling och sårläkning. Farmakologisk störning avtrans-neuralrörsdefekter potential i Axolotl embryon orsakar allvarliga utvecklingsstörningar missbildningar 1. I samband med sårläkning, är graden av reparation av skadade hornhinnan direkt korrelerad med storleken på epiteliala sår potential som uppstår efter skada, vilket framgår av farmakologisk förbättring eller avbrott i denna dcEF 2-3. Vi har visat att vuxna subependymala NPC genomgår en snabb och riktad katod migration in vitro när de utsätts för en externt applicerad dcEF. I detta protokoll beskriver vi vår labs tekniker för att skapa en enkel och effektiv galvanotaxis analys för högupplöst långsiktigt observation av riktad cellkroppen translokation (migration) på en enda cellnivå. Denna analys skulle vara lämplig för att undersöka de mekanismer som reglerar dcEF transduktion till cellulär motilitet genom användning av transgena eller knockout-möss, korta interfererande RNA, eller specifika receptoragonister / antagonister.

Kinematisk analys avslöjar att i närvaro av en 250 mV / mm dcEF, odifferentierade NPC uppvisar starkt riktade och snabba galvanotaxis mot katoden (figur 5A, film 1). I avsaknad av en dcEF, är slumpmässig rörelse av cellerna observerades (figur 5B, film 2). Vid denna fältstyrka,&gt; 98% av odifferentierade NPC migrerar för hela 6-8 h för vilka de avbildas, och eftersom döda celler inte migrerar detta tyder på att de förblir livskraftiga under denna period i frånvaro eller nä...

Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

I detta protokoll visar vi hur man konstruerar egna kammare som tillåter tillämpningen av en likström elektriskt fält för att möjliggöra time-lapse avbildning av vuxna hjärnan härrör neurala translokation prekursorcell under galvanotaxis.

En Galvanotaxis analys för analys av neurala Migration prekursorcell Kinetik i en extern Applied likström Electric Field

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-kolonibildande Cell-analys: en analys att diskriminera Bona Fide neuronala stamceller från neurala stamceller

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Elektrod Positionering och Montage i Transkraniell likström stimulering

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Analys av Trunk neurallist cellmigration med en modifierad Zigmond Chamber analys

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproducerbar Mouse ischiasnerv krossa och påföljande bedömningen av Regeneration av Whole Mount Muscle Analys

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Analys av Neural Crest migration och differentiering av Cross-arter Transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Den Neuroblast Analys: En analys för generering och anrikning av neuronala progenitorceller från Skilja Neural Stem Cell Progeny med hjälp av flödescytometri

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

En kvantitativ cellmigrationsassay för Murina Enter Neural stamfäder

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

Långsiktig Behavioral Spårning av fritt Simning Svagt Electric Fish

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

Distans övervakade Transcranial Direct nuvarande stimulering: En uppdatering på säkerhet och tolerabilitet

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...