Name: a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field
Uploaded: 2012-10-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

Bu çalışma Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Kurumu (hibe # 249669 ve # 482986) ve Kalp ve Kanada İnme Vakfı (hibe # 485508) tarafından finanse edilmektedir. Yazarlar deney protokolleri geliştirmek onların yardım için Youssef El-Hayek ve Dr Qi Wan ederim.

Hayvan taşıma içeren tüm prosedürler kurumsal düzenlemeler (protokol no. 20009387) uyarınca Toronto Hayvan Bakım Komitesince Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Aşağıdaki yöntemler uygulanabilir durumlarda bir laminer akış kaputu, steril alet ve teknikler kullanılarak yapılmalıdır. Aşağıdaki protokol metninde, ifade &quot;EFH-SFM&quot; epidermal büyüme faktörü, temel fibroblast büyüme faktörü ve heparin ile takviye serum serbest medya anlamına gelir. Bu ...

<ol>
	<li>Borgens, R. B., Shi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+histogenesis+from+morphogenesis+in+the+vertebrate+embryo+by+collapse+of+the+transneural+tube+potential.">Uncoupling histogenesis from morphogenesis in the vertebrate embryo by collapse of the transneural tube potential.</a> Dev. Dyn. 203, 456-467 (1995).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+cues+regulate+the+orientation+and+frequency+of+cell+division+and+the+rate+of+wound+healing+in+vivo.">Electrical cues regulate the orientation and frequency of cell division and the rate of wound healing in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 13577-13582 (2002).</li><li>Song, B., Zhao, M., Forrester, J., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+regeneration+and+wound+healing+are+stimulated+and+directed+by+an+endogenous+electrical+field+in+vivo.">Nerve regeneration and wound healing are stimulated and directed by an endogenous electrical field in vivo.</a> Journal of Cell Science. 117, 4681-4690 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1-13 (1996).</li><li>Chiasson, B. J., Tropepe, V., Morshead, C. M., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mammalian+forebrain+ependymal+and+subependymal+cells+demonstrate+proliferative+potential,+but+only+subependymal+cells+have+neural+stem+cell+characteristics.">Adult mammalian forebrain ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells have neural stem cell characteristics.</a> J. Neurosci. 19, 4462-4471 (1999).</li><li>Erickson, C. A., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+fibroblast+motility+and+orientation+can+be+influenced+by+physiological+electric+fields.">Embryonic fibroblast motility and orientation can be influenced by physiological electric fields.</a> J. Cell Biol. 98, 296-307 (1984).</li><li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation+and+directed+migration+of+cultured+corneal+epithelial+cells+in+small+electric+fields+are+serum+dependent.">Orientation and directed migration of cultured corneal epithelial cells in small electric fields are serum dependent.</a> J. Cell Sci. 109, 1405-1414 (1996).</li><li>Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct-Current+Electrical+Field+Guides+Neuronal+Stem/Progenitor+Cell+Migration.">Direct-Current Electrical Field Guides Neuronal Stem/Progenitor Cell Migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2200 (2008).</li><li>Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo.">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nat. Protoc. 2, 1479-1489 (2007).</li><li>Huang, C. -. W., Cheng, J. -. Y., Yen, M. -. H., Young, T. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotaxis+of+lung+cancer+cells+in+a+multiple-electric-field+chip.">Electrotaxis of lung cancer cells in a multiple-electric-field chip.</a> Biosen Bioelectron. 24, 3510-3516 (2009).</li><li>SATO, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input-output+relationship+in+galvanotactic+response+of+Dictyostelium+cells.">Input-output relationship in galvanotactic response of Dictyostelium cells.</a> Biosystems. 88, 261-272 (2007).</li><li>Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors.">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-217 (2011).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids,+EGF+receptors,+and+intracellular+signals+colocalize+and+are+polarized+in+epithelial+cells+moving+directionally+in+a+physiological+electric+field.">Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field.</a> The FASEB Journal. , (2002).</li><li>Fang, K., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields.">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J. Cell Sci. 112, 1967-1976 (1999).</li><li>McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Cell+Behavior+Electrically:+Current+Views+and+Future+Potential.">Controlling Cell Behavior Electrically: Current Views and Future Potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-978 (2005).</li><li>Morshead, C. M., Benveniste, P., Iscove, N. N., vander Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+competence+is+a+rare+property+of+neural+stem+cells+that+may+depend+on+genetic+and+epigenetic+alterations.">Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that may depend on genetic and epigenetic alterations.</a> Nat. Med. 8, 268-273 (2002).</li><li>Babona-Pilipos, R., Droujinine, I. A., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Subependymal+Neural+Precursors,+but+Not+Differentiated+Cells,+Undergo+Rapid+Cathodal+Migration+in+the+Presence+of+Direct+Current+Electric+Fields.">Adult Subependymal Neural Precursors, but Not Differentiated Cells, Undergo Rapid Cathodal Migration in the Presence of Direct Current Electric Fields.</a> PLoS ONE. 6, e23808 (2011).</li><li>Deuschl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Randomized+Trial+of+Deep-Brain+Stimulation+for+Parkinson's+Disease.">A Randomized Trial of Deep-Brain Stimulation for Parkinson's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 355, 896-908 (2006).</li><li>Stone, S. S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+Entorhinal+Cortex+Promotes+Adult+Neurogenesis+and+Facilitates+Spatial+Memory.">Stimulation of Entorhinal Cortex Promotes Adult Neurogenesis and Facilitates Spatial Memory.</a> J. Neurosci. 31, 13469-13484 (2011).</li></ol>

Bu protokol, önceki çalışmalarda 7-9 köklü yöntemler adapte edilmiştir. Galvanotactic odaları hücre ekimi kısıtlanmasının veya merkez çukur 10,11 mikroimalat için CO2 lazer ablasyonu kullanmak için de ayrı bir cam yapım dahil olmak üzere farklı teknikler kullanarak çeşitli inşa edilebilir. Bazı teknikler diğerlerinden daha zahmetli ve masraflı olabilir. Biz genellikle çoğu hücre biyoloji laboratuvarlarında bulunan malzemeler kullanılarak bir NPC galvanotak...

<table border="1"><tbody><tr><td height="44"> Öğenin ismi </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Sinir Prekürsör Hücre İzolasyonu </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> 11.688 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> 1M KCl </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> 7.456 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> 1M MgCl2 </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> 20.33 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> 155 mM NaHCO 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td> 1.302 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> 0.5M Glikoz </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> 9.01 g 100 içinde çözülmüşml dH 2 O </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl2 </td><td> Sigma </td><td> C7902 </td><td> 1.59 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> Penisilin-streptomisin </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td><td></td></tr><tr><td> Sığır pankreasın tripsin </td><td> Sigma </td><td> T1005 </td><td></td></tr><tr><td> Koyun hyaluronidaz testisler </td><td> Sigma </td><td> H6254 </td><td></td></tr><tr><td> Kynurenic asit </td><td> Sigma </td><td> K3375 </td><td></td></tr><tr><td> Ovomucoid tripsin inhibitörü </td><td> Worthington </td><td> LS003086 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12100046 </td><td></td></tr><tr><td> F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 21700075 </td><td></td></tr><tr><td> % 30 Glikoz </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td></td></tr><tr><td> % 7.5 NaHCO3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td><td></td></tr><tr><td> 1M Hepes </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td><td> 23.83 g 100 ml dH 2 O içerisinde çözündürüldü </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Invitrogen </td><td> PMG8041 </td><td> 20 ul birimler halinde hormon karışımı ve kısım 1 ml sulandırın. </td></tr><tr><td> FGF </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0226 </td><td> 20 ul birimler halinde hormon karışımı ve kısım 0.5 ml sulandırın. </td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Sigma </td><td> H3149 </td><td></td></tr><tr><td> Apo-transferrin </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 3188-AT </td><td> 0.1 g 4 ml dH 2 0 içine çözünmüş </td></tr><tr><td> Putressin </td><td> Sigma </td><td> P7505 </td><td> Apo-transferrin içine 9,61 mg böylece çözülürgeçirdikleri evrim </td></tr><tr><td> Ensülin </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td><td> 0.1N HCl 0.5 ml içine 25 mg çözülür ve dH 2 0 3.5 ml ekleyin </td></tr><tr><td> Selenyum </td><td> Sigma </td><td> S9133 </td><td></td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> Sigma </td><td> P6149 </td><td></td></tr><tr><td> Standart Diseksiyon araçları </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Galvanotaksis Odası Hazırlama </td></tr><tr><td> Kare cam kapak slaytlar </td><td> VWR </td><td> 16004 </td><td></td></tr><tr><td> 6N hidroklorik asit </td><td> VWR </td><td> BDH3204-1 </td><td></td></tr><tr><td> Yüksek vakum gres </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 60 mm Petri kapları </td><td> Fisher Scientific </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> Poli-L-lisin </td><td> Sigma </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354234 </td><td> 150 ul birimler halinde çözülme ve kısım </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td><td> NPC farklılaşma inducing Yalnızca kullanınız aksi SFM kullanımı + EFH kültür ortamı yukarıda da belirtildiği gibi </td></tr><tr><td> Mikroskop Sayma </td><td> Olimpos </td><td> CKX41 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Hücre Time-Lapse Görüntüleme Canlı </td></tr><tr><td> Gümüş tel </td><td> Alfa Aesar </td><td> 11434 </td><td></td></tr><tr><td> Ultrapure Agaroz </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td></td></tr><tr><td> Isı Inactivated FBS </td><td> Sigma </td><td> 16140071 </td><td></td></tr><tr><td> PVC boru </td><td> Fisher Scientific </td><td> 80000006 </td><td> 3/32 &quot;ID x 5/32&quot; OD </td></tr><tr><td> Beyazlatıcı </td><td> Clorox </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 cc şırınga </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 18 gauge iğne </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td></td></tr><tr><td> Dremel matkap </td><td> Dremel </td><td> Model 750 </td><td></td></tr><tr><td> Ters mikroskop nemlendirilmiş, İnkübe odası ile donatılmıştır </td><td> Zeiss </td><td> Axiovert-200M </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tarifler <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim </td></tr><tr><td> 2M NaCl </td><td> 6.2 ml </td></tr><tr><td>1M KCl </td><td> 0.5 ml </td></tr><tr><td> 1M MgCl2 </td><td> 0.32 mi </td></tr><tr><td> 155mm NaHCO 3 </td><td> 16.9 ml </td></tr><tr><td> 1M Glikoz </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> 108 mM CaCl2 </td><td> 0,09256 mL </td></tr><tr><td> Penisilin-streptomisin </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> Otoklavlanmış su </td><td> 74 mL </td></tr></tbody></table> Yapay beyin omurilik sıvısı <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim veya Yığın </td></tr><tr><td> Yapay beyin omurilik sıvısı </td><td> 30 ml </td></tr><tr><td> Sığır pankreasın tripsin </td><td> 40 mg </td></tr><tr><td> Koyun hyaluronidaz testisler </td><td> 22.8 mg </td></tr><tr><td> Kynurenic asit </td><td> 5 mg </td></tr></tbody></table> &lt;strong&gt; Tripsin Çözüm <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim veya Yığın </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 15 ml </td></tr><tr><td> Ovomucoid tripsin inhibitörü </td><td> 10 mg </td></tr></tbody></table> Tripsin İnhibitör Çözüm <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim </td></tr><tr><td> Otoklavlanmış su </td><td> 37 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 </td><td> 10 mL </td></tr><tr><td> % 30 Glikoz </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> % 7.5 NaHCO3 </td><td> 1.5 ml&#39;lik </td></tr><tr><td> 1M Hepes </td><td> 0.5 ml </td></tr><tr><td> Transferrin, putressin çözümü </td><td> 4 mL </td></tr><tr><td> 25 mg ensülin çözelti </td><td> 4 mL </td></tr><tr><td> Selenyum </td><td> 100 &amp; Mu; L </td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> 100 ul </td></tr></tbody></table> Hormon Mix (-20 ° C&#39;de 100 ml toplam mağaza) <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim </td></tr><tr><td> Otoklavlanmış su </td><td> 37.5 ml </td></tr><tr><td> 10X DMEM/F12 (3:1) </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> % 30 Glikoz </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> % 7.5 NaHCO3 </td><td> 0.75 ml </td></tr><tr><td> 1M Hepes </td><td> 0.25 ml&#39;lik </td></tr><tr><td> Hormon mix </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> 0.5 ml </td></tr><tr><td> Penisilin-streptomisin </td><td> 0.5 ml </td></tr></tbody></table> Serum Ücretsiz Media EFH-SFM: EGF 10 ul, FGF 10 ul ve Heparin FBS-SFM 3.66 ul ekleyin: 0.5 ml FBS ekleyin <table border = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> 150 ul </td></tr><tr><td> SFM </td><td> 3.6 ml </td></tr></tbody></table> Matrigel Çözüm Matrigel kısım bir buz kutusuna yerleştirilir ve SFM ile karıştırılmadan önce viskoz bir sıvı oluşturmak için 4-5 saat içinde yavaş yavaş çözülme izin verilmelidir. Bu alt tabaka Matrigel düzgün bir tabaka oluşumunu temin edecektir. Yavaş yavaş çözülmüş değil, elde edilen substrat muhtemelen hücre göçü engelleyen, Matrigel kümeleri ihtiva edecektir. <table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Hacim veya Yığın </td></tr><tr><td> Ultrapure Agaroz </td><td> 10 ml GKD 2 0 içinde 300 mg </td></tr><tr><td> SFM Isı İnaktive FBS </td><td> 8 ml 2 ml </td></tr></tbody></table> MatrigelÇözelti bir 15 cc şahin tüp içinde 2 ml ısı ile aktifliği giderilmiş FBS SFM 8 ml karıştırılır. Mix 10 ml GKD bir Erlenmeyer şişesinde 2 0 ile agaroz ve 10 sn aralıklarla 30 saniye mikrodalga ısı, her 10 sn aradan sonra mikrodalga çözüm kaldırmak ve iyice karışması sağlanır. Son 10 sn mikrodalga döneminin ardından, 57 ° C su banyosunda SFM / FBS çözüm ve mağaza ile agaroz çözüm karıştırmak. </td></tr></tbody></table>

a galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field

Nöral kök ve erişkin memeli beynindeki progenitor hücreler (toplu olarak adlandırılır sinir öncü hücreleri) (NPC) keşfedilmesi neuroregenerative stratejilerin geliştirilmesi için bu hücrelerin multipotent ve proliferatif özellikler kullanılarak yönelik araştırmalar bir gövde yol açmıştır. Bu tür stratejilerin başarısı için kritik bir adım eksojen Transplantasyon sonrası lezyon yerinde doğru veya MSS periventriküler bölgede bulunan endojen öncüleri yanıtı arttırmak için NPCs harekete geçirilmesidir. Buna göre, teşvik rehberlik ve NPC göç geliştirmek mekanizmaları anlamak için önemlidir. Galvanotaksis olarak bilinen bir olgu - Bizim iş tanıtmak için doğru akım elektrik alanların kullanımı (dcEFs) ve doğrudan NPC göç üzerinde duruluyor. Endojen fizyolojik elektrik alanları normal gelişimi ve yara onarımı sırasında hücre göçü için kritik ipuçları olarak işlev görür. Farmakolojik bozulmasıAxolotl embriyolar trans-nöral tüp potansiyeli ciddi gelişimsel malformasyonlar 1 neden olur. Yara iyileştirme bağlamında, yaralı, kornea tamir oranı doğrudan bu dcEF 2-3 farmakolojik olarak artırma ya da bozulma ile gösterildiği gibi, yaralanma sonrası ortaya çıkan epitel yara potansiyel büyüklüğü ile ilişkilidir. Biz bir şekilde dıştan uygulanan dcEF maruz kaldığında yetişkin subepandimal YZK&#39;lar in vitro hızlı ve yönetmenliğini cathodal göç tabi olduğunu göstermiştir. Bu protokolü biz yüksek çözünürlüklü, bir tek hücre düzeyinde yönettiği hücre gövdesi translokasyon (göç) uzun vadeli gözlem için basit ve etkili bir galvanotaksis tahlil oluşturmak için laboratuvar tekniklerini açıklar. Bu tahlil, transgenik veya nakavt fareleri kısa müdahale RNA, ya da özel bir reseptör agonistleri / antagonistleri kullanımı yoluyla hücre hareketliliği içine dcEF transdüksiyon düzenleyen mekanizma araştırılması için uygun olacaktır.

Kinematik analizi bir 250 mV / mm dcEF varlığında, farklılaşmamış NPC katot karşı yönlendirilmiş ve çok hızlı galvanotaksis (Şekil 5A, Film 1) gösterdiğini ortaya koymaktadır. Bir dcEF yokluğunda, hücrelerin rasgele hareketi (Şekil 5B, Film 2) görülmektedir. Bu alan gücü az, farklılaşmamış NPCs&gt;% 98&#39;i yansıması olduğu için tüm 6-8 saat boyunca göç ve ölü hücreleri göç etmezler çünkü bu bir dcEF yokluğunda veya varlığında bu dönemde...

Watch this Scientific Journal Video about A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field at JoVE.com

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Bu protokolü biz galvanotaksis sırasında nöral prekürsör hücre translokasyon edilen erişkin beyninin time-lapse görüntüleme sağlamak için bir doğru akım elektrik alanın uygulanmasına izin özel odaları oluşturmak nasıl gösterilmektedir.

Dıştan Uygulanan Doğru Akım Elektrik Alanında Nöral Prekürsör Hücre Göç Kinetik Analizi için galvanotaksis Assay

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Transkraniyal Doğru Akım Uyarım Elektrot Konumlandırma ve Montaj

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

Bir Modifiye Zigmond Odası Testi kullanılarak Trunk Sinir Crest Hücre Göç Analizi

Neural crest cells (NCCs) are a transient population of cells present in vertebrate development that emigrate from the dorsal neural tube (NT) after ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Çapraz türler Nakli Sinir Crest Göç ve Farklılaşma Analiz

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

Kemirgen Enterik Sinir progenitörlerin için Kantitatif Hücre Göç Tahlili

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

Serbestçe Yüzme Zayıf Elektrik Balık Uzun vadeli Davranış Takip

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Remotely Supervised Transcranial Direct Current Stimulation: An Update on Safety and Tolerability

Uzaktan denetlenen Transkraniyal doğrudan geçerli stimülasyon: Bir güncelleştirme güvenliği ve tolerabilite

The remotely supervised tDCS (RS-tDCS) protocol enables participation from home through guided and monitored self-administration of tDCS treatment while ...