Name: flow cytometry-based purification of s. cerevisiae zygotes
Uploaded: 2012-09-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes at JoVE.com

نشكر الدكتور مايكل R. Sramkoski للمساعدة في التدفق الخلوي، والدكتور والدكتور جايسوال بورنيما وو دي لفي وقت سابق المدخلات وAylyarov ايليا للحصول على مساعدة مع الرسوم التوضيحية. بدعم من المعاهد الوطنية للصحة منح R01GM089872 والخلوي ومرفق التصوير الأساسية المجهر المركز الشامل للسرطان حالة (P30 CA43703).

1. فرداني نمو الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو S. خلايا خميرة من الخلفية S288C (BY4741) تحت الظروف القياسية 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل النباتات الاحاديه للتعبير عن أي من علامات الفلورسنت 2 اضح 10. علامات الاختيار هي ?...

<ol>
	<li>Herskowitz, I., Oshima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Control of cell type in Saccharomyces cerevisiae: Mating type and mating-type interconversion. , 181-210 (1981).</li><li>Muller, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parental+age+and+the+life-span+of+zygotes+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Parental age and the life-span of zygotes of Saccharomyces cerevisiae.</a> Antonie Van Leeuwenhoek. 51, 1-10 (1985).</li><li>Tartakoff, A. M., Jaiswal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+fusion+and+genome+encounter+during+yeast+zygote+formation.">Nuclear fusion and genome encounter during yeast zygote formation.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 2932-2942 (2009).</li><li>Azpiroz, R., Butow, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+mitochondrial+sorting+in+yeast+zygotes.">Patterns of mitochondrial sorting in yeast zygotes.</a> Mol. Biol. Cell. 4, 21-36 (1993).</li><li>Rose, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+fusion+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Nuclear fusion in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 12, 663-695 (1996).</li><li>Dujon, B., Jones, E., Strathern, J., Broach, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces: Life Cycle and Inheritance. , 505-635 (1981).</li><li>Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+of+yeast+mating+reaction.">Assay of yeast mating reaction.</a> Methods Enzymol. 194, 77-93 (1991).</li><li>Ydenberg, C. A., Rose, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+mating:+a+model+system+for+studying+cell+and+nuclear+fusion.">Yeast mating: a model system for studying cell and nuclear fusion.</a> Methods Mol. Biol. 475, 3-20 (2008).</li><li>Sena, E. P., Radin, D. N., Fogel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronous+mating+in+yeast.">Synchronous mating in yeast.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70, 1373-1377 (1973).</li><li>Amberg, D., Burke, D., Strathern, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Yeast Genetics: A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual, 2005 Edition. , (2005).</li><li>Nolan, S., Cowan, A. E., Koppel, D. E., Jin, H., Grote, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FUS1+regulates+the+opening+and+expansion+of+fusion+pores+between+mating+yeast.">FUS1 regulates the opening and expansion of fusion pores between mating yeast.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2439-2450 (2006).</li><li>Weisman, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelles+on+the+move:+insights+from+yeast+vacuole+inheritance.">Organelles on the move: insights from yeast vacuole inheritance.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 243-252 (2006).</li></ol>

توافر بيضات ملقحة تنقية ينبغي أن تيسر الدراسات البيوكيميائية بما في ذلك البروتيوميات، وtranscriptomics lipidomics، وكذلك التحقيق في الآليات التي تخضع لدورة الخلية بيضات ملقحة إعادة الدخول، إعادة عرض الحائط الخلية، والخصائص الناشئة والميراث، وما إلى ذلك وبدلا من ذلك، يمكن إنش?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كاشف / معدات </td><td> مصدر </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> pEG220، URA3/YIp، GFP حشوية ترميز 11) </td><td> E. غروت </td><td></td></tr><tr><td> pAJ1661، URA3/CEN، ترميز RPL25 تنصهر لmCherry </td><td> A. جونستون </td><td></td></tr><tr><td> فيشر FB120 sonicator </td><td> فيشر العلمية </td><td></td></tr><tr><td> أنبوب البولي بروبلين مع غطاء مصفاة </td><td> BD الصقر </td><td> الرقم المرجعي 352235 </td></tr><tr><td> المبردة microfuge </td><td> تومي </td><td> MRX-150 </td></tr><tr><td> الحل تدفق الخلوي غمد </td><td> Biosure </td><td> 1027 </td></tr><tr><td> يوفق تدفق عداد الكريات انعكاس الموديل </td><td> سوني </td><td></td></tr><tr><td> DeltaVision deconvolution المجهر </td><td> P التطبيقيةريسيسيون ... y </td><td></td></tr><tr><td> epifluorescence المجهر تستقيم </td><td> لايكا </td><td></td></tr><tr><td> عالى النقاء الاغاروز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15510-07 </td></tr><tr><td> CSM الجلوكوز صياغة ملاحظات: للحصول على لوحات أجار، وتشمل ببساطة أجار 2٪ (Difco) </td><td> 10 </td><td></td></tr></tbody></table>

flow cytometry-based purification of s. cerevisiae zygotes

بيضات ملقحة هي وسيطة بين فرداني الأساسية والدول مضاعفا في دورة حياة العديد من الكائنات الحية، بما في ذلك الخميرة (الشكل 1) 1. S. خميرة بيضات ملقحة تنتج عن دمج خلايا من نوع فرداني التزاوج متميزة (ماتا، MATalpha) وتؤدي إلى diploids مستقرة المقابلة التي تولد تباعا ما يصل إلى 20 سلالة مضاعفا نتيجة لانقساماتهم الإنقسامية غير المتماثلة لافت للنظر 2. ودبرت تشكيل البيضة الملقحة عن طريق سلسلة معقدة من الأحداث: في هذه العملية، والعوامل القابلة للذوبان التزاوج ربط المستقبلات المشابهة، مما اثار مستقبلات بوساطة أجهزة الطرد المركزي التي تسهل إشارة توقف دورة الخلية وتبلغ ذروتها في الخلية خلية الانصهار. ويمكن اعتبار بيضات ملقحة نموذجا للسلف أو وظيفة خلايا الجذعية. على الرغم من أن تم تعلمه الكثير عن تشكيل بيضات ملقحة وعلى الرغم من استخدام بيضات ملقحة للتحقيق في الخلية الجزيئية مسائل signif العامicance، تقريبا جعلت جميع الدراسات استخدام الخلائط التزاوج الذي يتم مختلط بيضات ملقحة التي تتألف غالبية سكانها من الخلايا فرداني 3-8. كثير من جوانب الكيمياء الحيوية من تشكيل البيضة الملقحة والحياة المستمرة لاقحة تبقى دون تحقيق ذلك. تقارير تنقية بيضات ملقحة الخميرة وصف بروتوكولات يعتمد على خصائص الترسيب على 9؛ إلا أن هذا الإجراء يستند إلى الترسيب لم تسفر عن ما يقرب من 90٪ النقاء في أيدينا. وعلاوة على ذلك، فإنه لديه عيب وتتعرض الخلايا لالسوربيتول مفرط التوتر. ولذلك وضعت إجراء تنقية تنوعا. لهذا الغرض، وكان أزواج من الخلايا فرداني معربا عن البروتينات الفلورية الخضراء أو الحمراء شارك في المحتضنة للسماح تشكيل لاقحة، تحصد في أوقات مختلفة، وعلى بيضات ملقحة وتنقيته مما أدى باستخدام بروتوكول تدفق الخلوي على أساس الفرز. هذه التقنية يوفر تقييم مريحة البصرية من النقاء والنضج. نقاء المتوسطمن الكسر ما يقرب من 90٪. وفقا لتوقيت الحصاد، يمكن استرداد بيضات ملقحة من درجات متفاوتة من النضج. العينات النقية توفير نقطة انطلاق لمريحة &quot;، OMIC&quot; دراسات، لاسترداد ذرية الأولية، وللتحقيق المنتظم لهذه الخلية السلف.

Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes at JoVE.com

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

لتنقية بيضات ملقحة من<em&gt; S. خميرة</em&gt;، كانت قد صممت الخلايا فرداني نوع التزاوج المعاكس للتعبير عن البروتينات الفلورية الخضراء أو الحمراء، وشارك في المحتضنة للسماح تشكيل لاقحة، ومجزأة باستخدام تدفق الخلوي على أساس البروتوكول. الكسر عالي التخصيب يمكن اللاحقة &quot;-OMIC&quot; دراسات والانتعاش الأولي من ذرية، والتحقيق المنهجي لاقحة التشكل.

تدفق الخلوي على أساس تنقية<em&gt; S. خميرة</em&gt; بيضات ملقحة

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Research

JoVE Journal

Biology

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

مقايسة للالتصاق وغزو آجار في البيرة س.

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

أسلوب الإنتاجية العالية عالميا لدراسة مورفولوجية عضية في البيرة س.

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

تحديد بروتين المجمعات مع كمية البروتينات في البيرة س.

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

تدفق تنقية الخلوي للخلايا الفأر الانتصافي

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

دراسة السن التي تعتمد على عدم الاستقرار الجيني باستخدام س. خميرة يفسبن الزمني النموذجي

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

التعبير وتنقية عبر الغشاء التليف الكيسي بروتين منظم المواصلة في خميرة الخباز

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

الأمثل أساليب النمذجة وتلوين لرصد انتشار استخدام الأصباغ انقسام الخلية خلية تتبع

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

High Throughput Microinjections of Sea Urchin Zygotes

عالية الإنتاجية إبر دقيقة جدا لقنفذ البحر بيضات ملقحة

Microinjection into cells and embryos is a common technique that is used to study a wide range of biological processes. In this method a small amount of ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

تنقية التليف الكيسي عبر الغشاء المواصلة منظم البروتين المعبر عنه في<em&gt; خميرة الخباز</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...