Name: flow cytometry-based purification of s. cerevisiae zygotes
Uploaded: 2012-09-21T13:00:00
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हम प्रवाह cytometry, डा. पूर्णिमा जायसवाल और डॉ. Di वू के साथ मदद के लिए पहले और चित्र के साथ मदद के लिए इनपुट इल्या Aylyarov के लिए डॉ. आर माइकल Sramkoski धन्यवाद. NIH अनुदान R01GM089872 और Cytometry प्रकरण व्यापक कैंसर केंद्र (CA43703 P30) की इमेजिंग माइक्रोस्कोपी कोर सुविधा द्वारा समर्थित है.

1. अगुणित सेल विकास <ol><li> एस आगे बढ़ें मानक 10 शर्तों के तहत cerevisiae S288C पृष्ठभूमि (BY4741) से कोशिकाओं. </li><li> दो विशिष्ट फ्लोरोसेंट 10 मार्करों के या तो व्यक्त haploids रूपांतरण. पसंद के मार्कर घुलनशील cytoplasm में ...

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	<li>Herskowitz, I., Oshima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Control of cell type in Saccharomyces cerevisiae: Mating type and mating-type interconversion. , 181-210 (1981).</li><li>Muller, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parental+age+and+the+life-span+of+zygotes+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Parental age and the life-span of zygotes of Saccharomyces cerevisiae.</a> Antonie Van Leeuwenhoek. 51, 1-10 (1985).</li><li>Tartakoff, A. M., Jaiswal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+fusion+and+genome+encounter+during+yeast+zygote+formation.">Nuclear fusion and genome encounter during yeast zygote formation.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 2932-2942 (2009).</li><li>Azpiroz, R., Butow, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+mitochondrial+sorting+in+yeast+zygotes.">Patterns of mitochondrial sorting in yeast zygotes.</a> Mol. Biol. Cell. 4, 21-36 (1993).</li><li>Rose, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+fusion+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Nuclear fusion in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 12, 663-695 (1996).</li><li>Dujon, B., Jones, E., Strathern, J., Broach, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces: Life Cycle and Inheritance. , 505-635 (1981).</li><li>Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+of+yeast+mating+reaction.">Assay of yeast mating reaction.</a> Methods Enzymol. 194, 77-93 (1991).</li><li>Ydenberg, C. A., Rose, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+mating:+a+model+system+for+studying+cell+and+nuclear+fusion.">Yeast mating: a model system for studying cell and nuclear fusion.</a> Methods Mol. Biol. 475, 3-20 (2008).</li><li>Sena, E. P., Radin, D. N., Fogel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronous+mating+in+yeast.">Synchronous mating in yeast.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70, 1373-1377 (1973).</li><li>Amberg, D., Burke, D., Strathern, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Yeast Genetics: A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual, 2005 Edition. , (2005).</li><li>Nolan, S., Cowan, A. E., Koppel, D. E., Jin, H., Grote, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FUS1+regulates+the+opening+and+expansion+of+fusion+pores+between+mating+yeast.">FUS1 regulates the opening and expansion of fusion pores between mating yeast.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2439-2450 (2006).</li><li>Weisman, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelles+on+the+move:+insights+from+yeast+vacuole+inheritance.">Organelles on the move: insights from yeast vacuole inheritance.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 243-252 (2006).</li></ol>

शुद्ध युग्मनज की उपलब्धता के transcriptomics, प्रोटिओमिक्स और lipidomics, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से तंत्र की जांच सहित जैव रासायनिक अध्ययन की सुविधा चाहिए जिसके द्वारा युग्मनज सेल चक्र पुनः प्रवेश, कोशिका दीव?...

<table border="1"><tbody><tr><td> / अभिकर्मक और उपकरण </td><td> स्रोत </td><td> सूचीपत्र संख्या </td></tr><tr><td> pEG220, URA3/YIp, एन्कोडिंग cytoplasmic GFP 11) </td><td> ई. Grote </td><td></td></tr><tr><td> pAJ1661, URA3/CEN, RPL25 एन्कोडिंग mCherry से इनकार </td><td> ए जॉनसन </td><td></td></tr><tr><td> फिशर FB120 sonicator </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td></td></tr><tr><td> झरनी टोपी के साथ Polypropylene ट्यूब </td><td> BD फाल्कन </td><td> 352235 रेफरी </td></tr><tr><td> रेफ्रिजेरेटेड microfuge </td><td> Tomy </td><td> MRX-150 </td></tr><tr><td> प्रवाह cytometry म्यान समाधान </td><td> Biosure </td><td> 1027 </td></tr><tr><td> iCyt परावर्तन मॉडल प्रवाह cytometer </td><td> सोनी </td><td></td></tr><tr><td> DeltaVision deconvolution खुर्दबीन </td><td> एप्लाइड पीrecision </td><td></td></tr><tr><td> ईमानदार epifluorescence खुर्दबीन </td><td> Leica </td><td></td></tr><tr><td> Ultrapure agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-07 </td></tr><tr><td> CSM ग्लूकोज तैयार नोट: अगर प्लेटों के लिए, केवल 2% अग्रवाल (DIFCO) </td><td> 10 </td><td></td></tr></tbody></table>

flow cytometry-based purification of s. cerevisiae zygotes

Zygotes कई जीवों के जीवन चक्र के अगुणित और द्विगुणित राज्यों में के बीच आवश्यक मध्यवर्ती, खमीर सहित (1 चित्रा) 1 एस. cerevisiae अलग संभोग प्रकार (माता, MATalpha) की अगुणित कोशिकाओं के संलयन से परिणाम zygotes और इसी स्थिर diploids कि क्रमिक रूप में कई के रूप में 20 उनके strikingly असममित mitotic 2 डिवीजनों का एक परिणाम के रूप में द्विगुणित संतान उत्पन्न करने के लिए जन्म दे. युग्मनज गठन की घटनाओं का एक जटिल अनुक्रम द्वारा करवाया जाता है: इस प्रक्रिया में, घुलनशील संभोग कारकों रिसेप्टर्स मातृपक्षी बाँध, रिसेप्टर की मध्यस्थता संकेत हैं कि cascades सेल सेल संलयन में सेल चक्र और culminate की रुकावट की सुविधा को ट्रिगर. Zygotes पूर्वज या स्टेम सेल समारोह के लिए एक मॉडल माना जा सकता है. हालांकि ज्यादा युग्मनज के गठन के बारे में सीखा है और हालांकि zygotes सामान्य signif सेल आणविक सवाल की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया हैicance, लगभग सभी अध्ययन जिसमें zygotes अगुणित कोशिकाओं 3-8 के बहुमत जनसंख्या के साथ intermixed संभोग मिश्रण के इस्तेमाल किया है. युग्मनज गठन के जैव रसायन और युग्मनज का सतत जीवन के कई पहलुओं इसलिए uninvestigated रहते हैं. खमीर युग्मनज की शुद्धि की रिपोर्ट उनके अवसादन 9 गुणों पर आधारित प्रोटोकॉल का वर्णन है, तथापि, यह अवसादन आधारित प्रक्रिया हमारे हाथ में लगभग 90% शुद्धता उपज नहीं था. इसके अलावा, यह नुकसान है कि कोशिकाओं hypertonic sorbitol को उजागर कर रहे है. इसलिए हम एक बहुमुखी शोधन प्रक्रिया को विकसित किया है. इस प्रयोजन के लिए अगुणित कोशिकाओं के जोड़े लाल या हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त युग्मनज गठन, विभिन्न समय पर काटा, और जिसके परिणामस्वरूप zygotes एक प्रवाह cytometry आधारित छँटाई प्रोटोकॉल का उपयोग कर शुद्ध थे अनुमति सह incubated थे. इस तकनीक को पवित्रता और परिपक्वता का एक सुविधाजनक दृश्य मूल्यांकन प्रदान करता है. औसत पवित्रताअंश का लगभग 90% है. फसल के समय के अनुसार, परिपक्वता की डिग्री बदलती के zygotes बरामद किया जा सकता है. शुद्ध नमूने &quot;omic&quot; अध्ययन के लिए प्रारंभिक संतान की वसूली के लिए, और इस पूर्वज सेल के व्यवस्थित जांच के लिए प्रस्थान का एक सुविधाजनक बिंदु प्रदान करते हैं.

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Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

की युग्मनज को शुद्ध<em&gt; एस cerevisiae</em&gt; संभोग प्रकार विपरीत अगुणित कोशिकाओं लाल या हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन, सह incubated युग्मनज गठन की अनुमति, और fractionated एक प्रवाह cytometry आधारित प्रोटोकॉल का उपयोग को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर थे. अंश अत्यधिक समृद्ध बाद &quot;omic&quot; प्रारंभिक संतान का अध्ययन वसूली, और युग्मनज morphogenesis की व्यवस्थित जांच के लिए सक्षम बनाता है.

फ्लो आधारित शोधन<em&gt; एस cerevisiae</em&gt; Zygotes

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Research

JoVE Journal

Biology

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

आसंजन और एस cerevisiae में अग्रवाल आक्रमण के लिए परख

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

एक उच्च throughput के लिए विश्व स्तर पर एस cerevisiae में organelle आकारिकी अध्ययन विधि

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

मात्रात्मक प्रोटिओमिक्स के साथ एस cerevisiae में प्रोटीन परिसरों की पहचान

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

माउस meiotic कक्ष का फ्लो Cytometry शोधन

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

आयु पर निर्भर जीनोमिक अस्थिरता अध्ययन का उपयोग एस. cerevisiae कालानुक्रमिक जीवन मॉडल

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

और सिस्टिक फाइब्रोसिस transmembrane प्रवाहकत्त्व नियामक में प्रोटीन की अभिव्यक्ति और शोधन Saccharomyces cerevisiae

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

सेल डिवीजन ट्रैकिंग सेल रंजक का उपयोग करने की निगरानी के लिए अनुकूलित धुंधला और प्रसार मॉडलिंग तरीकों

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

High Throughput Microinjections of Sea Urchin Zygotes

समुद्री साही युग्मनजों के उच्च throughput microinjections

Microinjection into cells and embryos is a common technique that is used to study a wide range of biological processes. In this method a small amount of ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

में अभिव्यक्त किए जाते हैं सिस्टिक फाइब्रोसिस transmembrane प्रवाहकत्त्व नियामक प्रोटीन का शुद्धीकरण<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...