Name: ex vivo assessment of contractility, fatigability and alternans in isolated skeletal muscles
Uploaded: 2012-11-01T12:00:00
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Questo lavoro è stato sostenuto da AHA SDG 10SDG2630086 di Zhao X, RO1-AR061385 a Ma J e GO di Grant RC2AR05896 di M. Brotto

Soluzione composizione: 2,5 mM Ca 2 + soluzione di Tyrode: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM HEPES, 2,5 mM CaCl 2, 2 mM MgCl2 e 10 mM di glucosio 0 mM Ca 2 + Tyrode soluzione: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM HEPES, 2 mM MgCl2, 0,1 mM di etilene glicole acido tetraacetico (EGTA) e 10 mM di glucosio Nota: soluzione balneazione deve essere saturato con 100% O 2 se si utilizza la soluzione di cu...

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Misurazione della forza contrattile e affaticabilità è importante per la valutazione complessiva della funzione muscolare scheletrico. Lo scopo principale di questo test è quello di identificare i cambiamenti nella forza muscolare e le proprietà affaticanti in determinate condizioni patologiche, come sarcopenia e l&#39;affaticamento muscolare, e per testare l&#39;effetto dei farmaci / reagenti sulla contrattilità muscolare. Dal momento che la forza muscolare è strettamente correlato con intracellulare Ca 2 + ...

Muscoli scheletrici allegare ossa dello scheletro e generano forze contrattili sotto il controllo del sistema nervoso centrale. Eccitazione-contrazione (ECC) si riferisce al processo di conversione di uno stimolo elettrico ad una risposta meccanica. Ca 2 + segnalazione è un componente essenziale della funzione contrattile nel muscolo scheletrico. Efficace Ca 2 + mobilitazione dal reticolo sarcoplasmatico (SR) è un componente importante di ECC in cellule muscolari 1, 2, e cambiamenti intracellulare Ca 2 + segnalazione alla base della disfunzione contrattile corrispondente in una serie di malattie muscolari 3-5. Corretta valutazione della contrattilità muscolare è essenziale e gratuito per Ca 2 + imaging e altri test per acquisire conoscenze in funzione dei muscoli scheletrici, non solo a livello contrattile, ma anche a livello cinetico. Forza e velocità possono anche essere ottenuti per informare l&#39;importante proprietà dimuscolo potenza e lo stato del processo ECC in diverse condizioni fisiologiche e fisiopatologiche. Questo campo fecondo di ricerca ha una storia molto ricca e molte teorie di contrazione muscolare è apparso più di due millenni 6. Di ricerca del muscolo moderna comincia probabilmente in 1674-1682 con l&#39;osservazione microscopica di cross-striature e le miofibrille nelle fibre muscolari di Leeuwenhoek 6. Quasi un secolo dopo, Luigi Galvani ha osservato che muscolo si contrae rana vigorosamente quando il suo nervo è toccato con bisturi durante una scarica di scintille da una macchina elettrica distante 7-9. Contrazione potrebbe anche essere prodotto collegando il nervo gamba al muscolo attraverso un conduttore metallico. I dettagli del complesso meccanismo di segnalazione elettrica sostenuti da Galvani finalmente sono stati formulati da Hodgkin, Huxley e Katz nella loro famosa equazione 10, 11 che divenne il fondamento di elettrofisiologia. Le osservazioni notevoli di Ringer sugli effetti di Ca 2 + extracellulare sulla contrattilità del cuore rana e nei muscoli scheletrici 12-15 rappresentano il primo passo importante nel riconoscimento di Ca 2 + come un regolatore chiave della contrattilità muscolare 16, 17. Dal 1980 ad oggi una raffica di scoperte nel campo contrattilità muscolare è stato realizzato a causa dell&#39;introduzione della contrattilità muscolare e affaticabilità protocolli in murine muscoli scheletrici 18. Jones e Edwards sono stati i primi a suggerire che la fatica a bassa frequenza intermittente (indotta da esercizio fisico riduzione della forza) 19 è stato associato con modifiche ai macchinari ECC e non l&#39;apparato contrattile. Alla fine del 1980 e all&#39;inizio del 1990, Kolkeck et al 20, Kolbeck e Nosek 21, e Reid 22 sono stati utilizzando muscolo diaframma da modelli di roditori per studiare gli effetti della teofillina, cortiosterone, e dei radicali liberi sulla contrattilità del muscolo scheletrico, mentre Brooks e Faulkner sono stati i primi a riferire sulle misure di forza ripetute e misure di potenza in rapida-e-lenti i muscoli di topi 22. Inoltre, Lannegren, Westerblad, Agnello, e Westerblad stati i primi a collegare direttamente la contrattilità ex vivo con intracellulare di Ca 2 + regolamento e ha iniziato a mettere in discussione il ruolo di acidosi nella fatica muscolare 23, 24. I nostri laboratori hanno contribuito in modo significativo fin dai primi anni del 2000 verso la comprensione di nuovi geni con modulante e ruoli di regolamentazione sul muscolo ECC con ruoli critici nella contrattilità muscolare, affaticabilità, e l&#39;invecchiamento utilizzando una combinazione di studi intatti topo muscolari contrattilità, intracellulare Ca 2 monitoraggio + in fibre muscolari intatte e dalla pelle e genetico-molecolari manipolazioni 3-5, 25-29. Qui dettagliato protocollo di sperimentazione per la misurazione della contrattilità murini soleo isolate e estensore lungo delle dita (EDL muscoli), che corrispondono ad una prevalentemente lenta ossidativo (tipo I e fibre muscolari IIa) e un muscolo prevalentemente fast-glyocolytic (tipo IIb e fibre muscolari IIx) con spiccate proprietà contrattili. In questo protocollo, intatte muscolotendinee complessi sono stati isolati e immersi in un sistema PowerLab ADI Radnotti camera fornito sia con ossigeno puro o una miscela di ossigeno (95%) e CO 2 (5%). Forze contrattili sono stati generati da stimoli elettrici da uno stimolatore Erba e rilevato utilizzando un trasduttore di forza che è stato integrato con un sistema ADI PowerLab/400, consentendo la personalizzazione delle routine macro per controllare l&#39;acquisizione, la raccolta, digitalizzazione e archiviazione dei dati. Questa configurazione può misurare la forza muscolare, potenza muscolare, nonché il rapporto di forza rispetto a frequenza, affaticamento muscolare, recupero da affaticamento muscolare, velocità e complessivi proprietà cinetiche di contrazione muscolare. Inoltre, gli effetti dei farmaci sulla contrazione muscolare può essere monitorata attraverso questi esperimenti. </p&gt; I vantaggi di questo metodo consistevano nel rimuovere i componenti neuronali e vascolari dal muscolo scheletrico, consentendo la valutazione diretta delle proprietà intrinseche di contrazione muscolare. Inoltre, saggi contrattilità ex vivo consentire la manipolazione del mezzo extracellulare che circonda i muscoli isolati, che consente l&#39;uso di manipolazioni farmacologiche dei vari canali ionici permeazione e trasportatori per definire i loro ruoli fisiologici per la funzione del muscolo scheletrico. Questo sistema ex vivo ci ha permesso di scoprire recentemente un comportamento distinto alternan in taluni preparati muscolari mutanti, che erano legate ad una alterata intracellulare di Ca 2 + la gestione delle proprietà 4. Alternanza sono definiti come episodi scoppio fluttuanti di forza contrattile durante la fase di declino del profilo faticosa. Durante questi eventi forze contrattili momentaneamente aumentare di sopra del suo livello precedente di forza durante la stimolazione faticoso, forse perché più o Ca 2 + è stato rilasciato o la macchina contrattile è diventato più sensibile alle Ca 2 + 30. Trattamento con acido ciclopiazonico (CPA), un bloccante reversibile-sarcoplasmatico reticolo endoplasmatico calcio ATPasi (SERCA), caffeina, un agonista del canale rianodina (RyR) e faticoso stimolazioni ripetute possono indurre alternans meccaniche 4, suggerendo che alternans sono direttamente collegate modulazione del processo di accoppiamento CE. Dimostrazione del metodo per indurre e registrare in alternanza meccanici in configurazione contrattilità in vitro serve come esempio per mostrare i parametri diversificati sperimentali che potrebbero essere ottenuti con questo sistema o simili, sulla base di interessi di ricerca individuali. Questo metodo può essere di interesse per i ricercatori che studiano la fisiologia muscolare. Configurazione simile può essere utilizzato anche per isolati complessi muscle-tendon/ligament scheletrici di altrisedi anatomiche, nonché per singole fibre muscolari e strisce.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> 2-APB </td><td> Tocris </td><td> 1224 </td><td> Bloccante di un certo numero di Ca 2 + canali di ingresso comprese SOC e TRP ecc </td></tr><tr><td> SKF96365 </td><td> Sigma </td><td> SKF-96365 </td><td> Bloccante di un certo numero di canali di ingresso Ca 2 + compresa SOC e recettore-mediata Ca 2 + entrata ecc </td></tr><tr><td> BTP-2 </td><td> Millipore </td><td> 203890-5MG </td><td> Relativamente specifico SOC bloccante </td></tr><tr><td> CPA </td><td> Sigma </td><td> C1530 </td><td> Reversibile SERCA bloccante </td></tr><tr><td> caffeina </td><td> Sigma </td><td> C0750 </td><td> Veloce azione agonista RyR </td></tr><tr><td> Radnoti Quattro Unità tessuti per sistemi e organi Bath </td><td> Radnoti </td><td> 159920 </td><td></td></tr><tr><td> Combinazione di sostegno del tessuto / elettrodo stimolante </td><td> Radnoti </td><td> 160151 </td><td> Verticale Zig Zag tipo con il supporto del tessuto </td></tr><tr><td> Quad Ponte Amp </td><td> ADInstruments </td><td> FE224 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/400 </td><td> ADInstruments </td><td></td><td> Questo prodotto non è più disponibile. Scegliere altre versioni del sistema di acquisizione dati. </td></tr><tr><td> Trasduttori di forza (5 mg - 25 g) </td><td> ADInstruments </td><td> MLT0201/RAD </td><td></td></tr><tr><td> Grafico v4.02 </td><td> ADInstruments </td&gt; <td></td><td> LabChart 7.3 è l&#39;ultima versione del software grafico. </td></tr><tr><td> S8800 doppia Pulse Digital Stimolatore </td><td> GRASS TECNOLOGIE </td><td></td><td> Questo prodotto non è più disponibile. S88X doppia uscita Piazza impulso stimolatore è uno stimolatore più recente. </td></tr><tr><td> RF trasformatore di isolamento Unità </td><td> GRASS TECNOLOGIE </td><td> Modello SIU5 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo assessment of contractility, fatigability and alternans in isolated skeletal muscles

Qui descritto è un metodo per misurare la contrattilità dei muscoli scheletrici isolati. Parametri come forza muscolare, potenza muscolare, cinetica contrattili, affaticabilità, e il recupero dopo la fatica può essere ottenuta per valutare aspetti specifici della eccitazione-contrazione (ECC) di processo quali eccitabilità, contrattilità macchinari e Ca 2 + capacità di movimentazione. Questo metodo elimina la fornitura nervoso e sangue e si concentra sul muscolo scheletrico isolato stessa. Abbiamo regolarmente usare questo metodo per identificare i componenti genetiche che alterano la proprietà contrattile del muscolo scheletrico se modulanti Ca 2 + vie di segnalazione. Qui, descriviamo un fenotipo appena identificato muscolo scheletrico, cioè, alternans meccanico, come esempio di varie informazioni e ricco che può essere ottenuto usando la prova in vitro contrattilità muscolare. La combinazione di questo test con saggi su cellule singole, approcci genetiche e biochimichesaggi Stry in grado di fornire importanti informazioni sui meccanismi di ECC nei muscoli scheletrici.

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Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Descriviamo un metodo per misurare direttamente la forza muscolare, potenza muscolare, cinetica contrattili e affaticabilità dei muscoli scheletrici isolati in un<em&gt; In vitro</em&gt; Sistema tramite stimolazione del campo. Informazioni preziose su Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Proprietà di manipolazione e macchinari contrattile del muscolo può essere ottenuta utilizzando diversi protocolli stimolanti.

Vivo Valutazione Ex della contrattilità, affaticabilità e alternanza in isolati muscoli scheletrici

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da Intra-vitale Microscopia

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Ricerca

Biologia

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

Transfection DNA dei mammiferi muscoli scheletrici con In Vivo Elettroporazione

 A growing interest in cell biology is to express transgenically modified forms of essential proteins (e.g. fluorescently tagged constructs and/or mutant ...

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Il Ex vivo Preparazione isolato microvasi scheletrico per le Indagini di reattività vascolare

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Isometric and Eccentric Force Generation Assessment of Skeletal Muscles Isolated from Murine Models of Muscular Dystrophies

Isometrica ed eccentrica valutazione della forza dei muscoli scheletrici Isolato da modelli murini di distrofie muscolari

Critical to the evaluation of potential  therapeutics for muscular disease are sensitive and reproducible physiological  assessments of muscle function. ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Valutazione del calcio Sparks in intatte fibre muscolari scheletriche

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Misure contrattilità isolati su muscoli papillari per le inchieste sui Cardiac inotropo nei topi

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

La proteina C-FOS immunoistologiche Detection: uno strumento utile come indicatore di percorsi centrali coinvolti nelle risposte fisiologiche specifiche<em&gt; In Vivo</em&gt; e<em&gt; Ex Vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Misurare la rigidità<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mouse aorte Utilizzando microscopia a forza atomica

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

Misurazione dell'assorbimento di glucosio stimolato da insulina e contrazione in muscolo scheletrico maturo isolato e incubato da topi

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...

Single Myofiber Culture Assay for the Assessment of Adult Muscle Stem Cell Functionality Ex Vivo

Test di coltura di una singola miofibra per la valutazione della funzionalità delle cellule staminali muscolari adulte Ex Vivo

Adult skeletal muscle tissue harbors a stem cell population that is indispensable for its ability to regenerate. Upon muscle damage, muscle stem cells ...