Name: isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue
Uploaded: 2012-07-10T13:00:00
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우리는 유동세포계측법와 도움 마르셀 토로 인정 싶어요. 이 연구는 스웨덴어 심장과 폐 재단, 유럽위원회는 FP7 &quot;CardioCell&quot;, 스웨덴어 연구 협의회, AFA 보험 및 ALF에 의해 지원되었다. OB는 도이치 Forschungsgemeinschaft에 의해 지원되었다.

1. 심장 핵​​의 분리 <ol><li> 1퍼센트 BSA / PBS 코팅 용액의 10 ML과 코트 ultracentrifuge 튜브 (Beckman의 원심 분리기 튜브 # 363664). 튜브를 모자하고 그들 튜브 회전에서 30 분 동안 회전하자. 코팅 용액을 제거하고 원심 분리기 튜브 공기 건조 (마우스 심장 당 하나의 튜브가 다른 종류의 단일 마우스 하트, 번갈아 최대 5 마우스의 마음이나 심장 조직의 1g의 분석에 필요한하게 (예 : 인간) 처리할 수 있습?...

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	<li>Ang, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart.">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> American journal of physiology. 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Vis. Exp. (20), e914 (2008).</li></ol>

cardiomyocyte 핵의 정확한 신원은 myocardium 2,3의 재생 과정의 분석을 위해 매우 중요합니다. 신선한 조직에서 cardiomyocytes를 분리하기위한 종래의 기술은 주로 세포외 기질 단백질의 소화 효소 및 저속 원심 분리에 의한 간질 세포에서 이후의 정화를 기준으로합니다. 배아 줄기 세포 (ESC)에서 생활 cardiomyocytes의 자세한 정화는 같은 SIRPA 9 또는 mitochondrial 염료 10 표면 마커와 immun...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1. 용해 완충액 </td></tr><tr><td> 시약의 이름 </td></tr><tr><td> 0.32 M의 자당 </td></tr><tr><td> 10 MM 트리스-HCL (산도 = 8) </td></tr><tr><td> 5 MM CaCl 2 </td></tr><tr><td> 5 밀리미터 마그네슘 아세테이트 </td></tr><tr><td> 2.0 밀리미터 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td></tr><tr><td> 0.5 MM EGTA </td></tr><tr><td> 1 ㎜ DTT </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 2. 자당 버퍼 </td></tr><tr><td> 시약의 이름 </td></tr><tr><td> 2.1 M의 자당 </td></tr><tr><td> 10 MM 트리스-HCL (산도 = 8) </td></tr><tr><td> 5 밀리미터 마그네슘 아세테이트 </td></tr><tr><td> 1 ㎜ DTT </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 3. 핵 저장 버퍼 (NSB 플러스) </td></tr><tR&gt; <td> 시약의 이름 </td></tr><tr><td> 0.44 M의 자당 </td></tr><tr><td> 10 MM 트리스-HCL (산도가 = 7.2) </td></tr><tr><td> 70 MM KCl </td></tr><tr><td> 10 밀리미터 MgCl 2 </td></tr><tr><td> 1.5 MM spermine </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 시약 및 장비 </td><td> 회사 </td></tr><tr><td> Isotype 토끼 IgG 칩 학년, # ab37415 </td><td> Abcam </td></tr><tr><td> 토끼 반 PCM-1 항체, # HPA023374 </td><td> 아틀라스 항체 </td></tr><tr><td> 돈키 초. 항체, 안티 토끼 알렉사 488 형석, #-21206 또는 이와 동등한 초. 형광 항체 </td><td> 생명 기술 </td></tr><tr><td> DRAQ5 </td><td> Biostatus </td></tr><tr><td> 세포 strainers 30 μm의, 70 μm의 및 100 μm의 </td><td> BD Biosciences </td></tr><tr><td> 유리 douncer (40 ML)과&quot;L&quot;을 유봉 </td><td> VWR (Wheaton의 공업 주식 회사) </td></tr><tr><td> T-25 울트라 Turrax 균 질기 </td><td> 이카 독일 </td></tr><tr><td> 공구 S25 N-18 G를 분산 </td><td> 이카 독일 </td></tr><tr><td> Beckman 아벤티의 원심 분리기 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 </td></tr><tr><td> 팔콘 튜브 15 ML 50 ML </td><td> VWR </td></tr><tr><td> Beckman의 원심 분리기 튜브 # 363664 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 </td></tr><tr><td> JS13.1 무료 스윙 로터 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 </td></tr><tr><td> 유입의 cytometer </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 </td></tr><tr><td> 튜브 회전 </td><td> VWR </td></tr></tbody></table>

isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue

대부분의 전략에만 세포질 마커 단백질 1에 의존로 cardiomyocyte 핵의 식별은 조직 섹션에 도전했습니다. 이러한 증식과 apoptosis와 같은 심장 myocytes에서는 드문 행사 심장 myocyte 핵의 정확한 신원은 항상성 및 병리 학적 조건 2의 세포 갱신을 분석해야합니다. 여기서는 pericentriolar 자료 1 (PCM-1)와 후속 유동세포계측법 정렬에 대한 항체가있는 밀도의 침강 및 immunolabeling으로 해부 조직에서 cardiomyocyte 핵을 분리하는 방법을 제공합니다. 이 전략은 신선한 조직 및 냉동 보관 물질에 동일하게 작업의 장점과 높은 처리량 분석 및 절연을 허용합니다. 이렇게하면 이미 biobanks에서 수집한 자료를 공부할 수 있습니다. 이 기술 적용과 종의 광범위한 테스트와 같은 탄소-14 데이트 3 셀 - 사 등 여러 다운 스트림 애플 리케이션에 적합하다CLE 분석 4, thymidine의 analogues의 시각화 (예 : BrdU와 이두) 4, transcriptome 및 epigenetic 분석.

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Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

심장 핵​​은 밀도 침강 통해 격리 및 유동세포계측법 의해 cardiomyocyte 핵 파악하고 정렬하는 pericentriolar 소재 1 (PCM-1)에 대한 항체로 immunolabeled있다.

사후 조직에서 Cardiomyocyte 핵의 분리

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

부분 Pancreatectomized 환자에서 인간 아일 레츠의 분리

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

연구

의학

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

격리 및 프로파일 링 마이크로 RNA-포함하는 인간의 담즙에서 엑소 좀을

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...

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샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

성인 마우스에서 심방 근세포의 격리

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Electromechanical Assessment of Optogenetically Modulated Cardiomyocyte Activity

광유전학적으로 변조된 심근세포 활동의 전기기계적 평가

Over the past two decades, optogenetic tools have been established as potent means to modulate cell-type specific activity in excitable tissues, including ...

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허혈성 심장 질환 및 심장 근막 수축의 비디오 기반 비교 모델

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

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RNA 분석 및 대식세포 표현형에 적합한 인간 내장 지방 조직에서 생존 가능한 지방 세포 및 기질 혈관 분획 분리

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...

Ultrasound-Guided Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocyte Implantation in Myocardial Infarcted Mice

The key objective of cell therapy after myocardial infarction (MI) is to effectively enhance the cell grafted rate, and human induced pluripotent stem ...

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

심근경색 후 성인 마우스 심장에서 단일 세포 RNA 시퀀싱을 위한 비심근세포 세포 현탁액의 제조

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...