Name: heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Dit onderzoek werd uitgevoerd bij de Keck School of Medicine, University of California, VS, en het University College London, Verenigd Koninkrijk. KL wordt gefinancierd door het National Institute of Health subsidie ​​5 U19 CA148112-02. BG werd gefinancierd door een projectsubsidie ​​van de Eve beroep gynaecologische oncologie liefdadigheid (UK). Een deel van deze werkzaamheden die op UCLH / UCL werd gedeeltelijk gefinancierd uit het ministerie van Volksgezondheid de NIHR Biomedical Research Centre subsidieregeling.

Figuur 1 toont een overzicht van de workflow hieronder beschreven. 1. Isolatie van normale fibroblasten en Ovarian Uitbreiding van in vitro levensduur door overexpressie van de katalytische subeenheid van het hTERT holoënzym <ol><li> Ovariële weefsels kunnen worden verzameld met geïnformeerde toestemming van de patiënt en de goedkeuring van de Institutional Review Board (voor Amerikaanse instellingen). Normaal ovariële weefsels kunnen worden verzamel...

<ol>
	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

De biologie van een vroeg stadium ovariumcarcinoom (EOC) is slecht begrepen. Misschien is een van de voornaamste problemen op dit gebied vele jaren is het gebrek aan inzicht in de weefselspecifieke oorsprong van de ziekte, en het belang van de rol van de micro EOC in ontwikkeling. In de afgelopen jaren is wordt duidelijk geworden dat EOC is een heterogene ziekte met meerdere verschillende histophathological subtypes, waarschijnlijk met verschillende cellulaire oorsprong voor verschillende subtypes. Bijvoorbeeld, de huid...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Leverancier </td><td> Catalogus nummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, geschikt voor celkweek </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Moleculaire biologie klas ethanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Steriel water voor celcultuur </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicine </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfotericine B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% trypsine-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Mobiele zeef (40 of 70 pm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblast oppervlakte-eiwit antilichaam, kloon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-cytokeratine antilichaam (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybreen (hexadimethrine bromide) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR-ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomeerlengte Assay </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Reagentia en apparatuur die in deze studie verwezen.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

Epitheliale eierstokkanker (EOCs) zijn de belangrijkste oorzaak van overlijden door gynaecologische maligniteit in de westerse samenlevingen. Ondanks de vooruitgang in chirurgische behandelingen en verbeterde op platina gebaseerde chemotherapie, is er weinig verbetering in de EOC overlevingscijfers voor meer dan vier decennia 1,2. Terwijl stadium I tumoren hebben 5-jaarsoverleving&gt; 85%, overleving voor stadium III / IV ziekte zijn &lt;40%. Zo kan de hoge sterftecijfers voor EOC aanzienlijk worden verlaagd als tumoren werden aangetroffen bij eerder, meer behandelbaar, podia 3-5. Momenteel wordt de moleculaire genetische en biologische basis van beginnende ziekte ontwikkeling slecht begrepen. Meer in het bijzonder, is er weinig bekend over de rol van de micro-omgeving tijdens tumorinitiatie, maar bekende risicofactoren voor EOCs (zoals leeftijd en pariteit) suggereren dat de micro-omgeving een belangrijke rol speelt in de vroege ontstaan ​​van EOCs. Daarom ontwikkelde drie-dimensionale heterotypische modellenvan zowel de normale eierstok van beginnende eierstokkanker. Voor de normale ovarium, we co-gekweekte normale ovarium oppervlak epitheel (IOSE) en normale stromale fibroblasten (INOF) cellen geïmmortaliseerd door retrovrial transductie van de katalytische subeenheid van menselijk telomerase holoënzym (hTERT) om de levensduur van deze cellen in kweek te verlengen. De vroegste stadia van eierstokepitheliaalcellen celtransformatie, overexpressie van het oncogen in CMYC IOSE cellen opnieuw samen gekweekt met cellen INOF model. Deze heterotypische modellen werden gebruikt om de effecten van veroudering en veroudering onderzoeken op de transformatie en invasie van epitheelcellen. Hier beschrijven we de methodologische stappen in de ontwikkeling van deze driedimensionale model, deze methoden zijn niet specifiek voor de ontwikkeling van normale ovarium en eierstokkanker weefsels en kan worden gebruikt om andere weefseltypes waar bestuderen stromale en epitheelcellen interacties fundamenteel aspect van het weefsel onderhoud en diSease ontwikkeling.

Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We beschrijven methoden voor het vaststellen<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypische driedimensionale modellen die ovarian fibroblasten en normale ovarium oppervlak of eierstokkanker epitheelcellen. We bespreken het gebruik van deze modellen stroma-epitheliale interacties die plaatsvinden tijdens eierstokkanker ontwikkeling te bestuderen.

Heterotypische Driedimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

MAME Modellen voor 4D live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn Maligne Progression

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Ontruiming Assay dat de modellen van de vroege stappen van eierstokkanker Metastase

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Bioluminescent Orthotope Model van pancreaskanker Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Een Drie-dimensionale Tissue Culture Model om te studeren Primary humaan beenmerg en zijn Malignancies

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Drie dimensionaal culturen: Een hulpmiddel om te studeren Normaal Acinaire Architectuur versus maligne transformatie van cellen borst

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Verrijking van eierstokkanker tumor-initiërende cellen

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

Modelleren van de eerste stappen van eierstokkanker Verspreiding in een Organotypische Cultuur van de menselijke buikholte

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapie Resistant Leukemie<em&gt; In Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...