Name: heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

מחקר זה בוצע בקק הספר לרפואה, אוניברסיטת קליפורניה, ארה&quot;ב, ויוניברסיטי קולג&#39; בלונדון, בריטניה. KL ממומן על ידי המכון הלאומי לבריאות מענק 5 U19 CA148112-02. BG מומן על ידי מענק מפרויקט צדקת ערב המגבית האונקולוגית הגינקולוגית (בריטניה). חלק מעבודה זו בוצעה בUCLH / UCL היה קצת מימון מהמחלקה לבריאות תכניתו של NIHR Biomedical Research Centre המימון.

איור 1 מדגים סקירה של תהליך העבודה המתוארת להלן. 1. בידוד של Fibroblasts שחלות הרגילים והארכת תוחלת חיים במבחנה על ידי Overexpression של מקטע קטליטי של Holoenzyme hTERT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות שחלה ני...

<ol>
	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

הביולוגיה של סרטן השחלות האפיתל בשלב מוקדם (EOC) הוא הבין היטב. אולי אחד המכשולים העיקריים בתחום זה במשך שנים רבות היה חוסר הבנה של מקורות הרקמות הספציפיים של המחלה, ושל המשמעות של תפקיד microenvironment בפיתוח EOC. במהלך השנים האחרונות, הוא הפך להיות ברור כי EOC הוא מחלה הטרוגנית ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> PolyHEMA, מתאים לתרבית תאים </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> אתנול כיתת ביולוגיה מולקולרי </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> מים סטריליים לתרבית תאים </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> בינוני 199 </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> סרום שור עוברי Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; גנטמיצין </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0.25% טריפסין-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> תא מסננת (40 או 70 מיקרומטר) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> נוגדן אנטי פיברובלסטים פני חלבון, השיבוט 1B10 </td><td> סיגמא </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> נוגדן אנטי הפאן cytokeratin (C11) </td><td> סנט קרוז </td><td> SC-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (hexadimethrine רומיד) </td><td> סיגמא </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> רוש </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Assay אורך הטלומרים </td><td> רוש </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> לוח 1. ריאגנטים וציוד המכונים במחקר זה.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

סרטן שחלות אפיתל (EOCs) הם הגורם המוביל למוות ממחלה ממארת גינקולוגית בחברות מערביות. למרות התקדמות בטיפול ניתוחי וטיפולי הכימותרפיה משופרים מבוססים-Platinum, חל שיפור קטן בשיעורי הישרדות EOC במשך יותר מארבעה העשורים 1,2. בעוד בשלב I. גידולי בעלי סיכויי הישרדות 5-שנה&gt; 85%, שיעורי הישרדות בשלב III / המחלה הרביעית הם &lt;40%. לפיכך, השיעור הגבוה של תמותה לEOC ניתן היה להפחית באופן משמעותי אם גידולים התגלו בשלבים מוקדמים יותר, הניתנים לטיפול, עוד 3-5. כיום, בסיס הגנטי וביולוגי המולקולרי של התפתחות מחלה בשלב מוקדם הוא הבין היטב. באופן ספציפי יותר, מעט מאוד ידוע על תפקידו של המיקרו במהלך חניכת גידול, אך גורמי סיכון ידועים לEOCs (למשל גיל וזוגיות) מצביעים על כך שmicroenvironment ממלא תפקיד מרכזי בהיווצרות המוקדמת של EOCs. לכן פתחו מודלים תלת ממדיים heterotypicשל שניהם שחלה הנורמלית ושל סרטן שחלות בשלבים מוקדם. לשחלה הנורמלית, אנחנו משטח שיתוף תרבותי נורמלי שחלות אפיתל (יפסיד) ופיברובלסטים נורמלים סטרומה (INOF) תאים, שהונצחו על ידי תמרת retrovrial של המקטע הקטליטית של holoenzyme telomerase האנושי (hTERT) כדי להאריך את תוחלת החיים של תאים אלה בתרבות. למודל בשלבים הראשונים של שינוי שחלות האפיתל תא, ביטוי יתר של אונקוגן CMYC בתאים יפסידו, שוב בשיתוף עם תאים בתרבית-INOF. מודלי heterotypic אלה שמשו כדי לחקור את ההשפעות של הזדקנות והזדקנות על השינוי והפלישה של תאי אפיתל. כאן אנו מתארים את הצעדים מתודולוגיים בפיתוח של אלה מודל תלת ממדי; מתודולוגיות אלה אינן ספציפיות להתפתחות של שחלה נורמלית ורקמות סרטן שחלות, ויכולות לשמש כדי לחקור סוגי רקמות אחרים שבו אינטראקציות תא סטרומה ואפיתל הן בסיסיות היבט של תחזוקת רקמות ודיפיתוח sease.

Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

אנו מתארים שיטות לקביעה<em&gt; במבחנה</em&gt; מודלים תלת מימדיים heterotypic מרכיבים fibroblasts בשחלות והשחלות משטח רגיל או תאי אפיתל סרטן שחלות. אנו דנים בשימוש במודלים אלה ללמוד אינטראקציות stromal-האפיתל המתרחשים במהלך התפתחות סרטן שחלות.

Heterotypic תלת ממדי<em&gt; במבחנה</em&gt; מידול של אינטראקציות stromal-אפיתל בייזום והתקדמות סרטן השחלות

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

מיים מודלים של הדמיה חיה של תאים 4D גידול: אינטראקציות microenvironment המשפיעים ממאירה התקדמות

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

דגם תרבות רקמות תלת ממדי למחקר עיקרי עצם אדם מח וממאיר שלו

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

שלוש תרבויות ממדים: כלי ללמוד רגיל אדריכלות acinar לעומת שינוי ממאיר של תאי שד

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

בהעשרת מבחנה של תאי ייזום-גידול סרטן השחלות

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

לוקמיה עמידה דוגמנות כימותרפיה<em&gt; במבחנה</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...