Name: heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00
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Esta pesquisa foi realizada na Escola Keck de Medicina da Universidade da Califórnia, EUA, e da University College de Londres, Reino Unido. KL é financiado pelo Instituto Nacional de Saúde concessão 5 U19 CA148112-02. BG foi financiado por uma doação do projeto da caridade de oncologia ginecológica Eve Appeal (Reino Unido). Parte deste trabalho realizado no UCLH / UCL foi parcialmente financiamento do Departamento de Saúde Biomédica esquema de financiamento da investigação NIHR Centro.

A Figura 1 ilustra uma vista geral do fluxo de trabalho descritos a seguir. 1. Isolamento de fibroblastos normais de ovário e de extensão de Lifespan in vitro por superexpressão da subunidade catalítica da holoenzima hTERT <ol><li> Tecidos ovarianos podem ser coletadas com consentimento informado do doente e aprovação do Conselho de Revisão Institucional (para instituições dos EUA). Tecidos ovarianos normais pode ser recolhida após histerectomia...

<ol>
	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

A biologia da fase precoce de câncer epitelial de ovário (EOC) é mal compreendida. Talvez um dos principais impedimentos na matéria, durante muitos anos tem sido a falta de compreensão das origens de tecidos específicos da doença, e da importância do papel do microambiente no desenvolvimento AOE. Ao longo dos últimos anos, é tornou-se claro que EOC é uma doença heterogênea, com vários subtipos distintos histophathological, provavelmente com diferentes origens celulares para diferentes subtipos. Por exemplo...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Fornecedor </td><td> Número de Catálogo </td></tr><tr><td> PolyHEMA, adequado para cultura de células </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Etanol de grau de biologia molecular </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Água estéril para cultura de células </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Meio 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Soro fetal de bovino Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> A anfotericina B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-higrômetro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% de tripsina-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Célula filtro (40 ou 70 mm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-anticorpo de fibroblastos proteína de superfície, clone 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-citoqueratina anticorpo (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (brometo Hexadimetrina) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Ensaio comprimento dos telômeros </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Reagentes e equipamentos referidos no estudo.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

Câncer epitelial de ovário (EOCs) são a principal causa de morte por neoplasia ginecológica nas sociedades ocidentais. Apesar dos avanços em tratamentos cirúrgicos e melhoradas baseadas em platina quimioterapias, houve pouca melhora nas taxas de sobrevivência do EOC por mais de quatro décadas 1,2. Enquanto tumores estádio I têm taxas de sobrevida em 5 anos&gt; 85%, as taxas de sobrevivência para a fase III / IV doença são &lt;40%. Assim, as elevadas taxas de mortalidade para EOC pode ser significativamente reduzida se os tumores foram detectados em anteriores, mais tratáveis, etapas 3-5. Neste momento, a base molecular genética e biológica da fase inicial de desenvolvimento da doença não é bem entendido. Mais especificamente, pouco se sabe sobre o papel do microambiente do tumor durante a iniciação, mas factores de risco conhecidos para EOCs (por exemplo, idade e paridade) sugerem que o microambiente desempenha um papel essencial na génese precoce de EOCs. Por isso, desenvolveu modelos tridimensionais heterotípicostanto de ovário normal e dos cânceres de ovário em estágio inicial. O ovário normal, que co-cultivadas superfície de ovário epitelial (Iosé) e de fibroblastos do estroma normais (INOF) células, imortalizado por transdução retrovrial da subunidade catalítica da holoenzima telomerase humana (hTERT) para prolongar o tempo de vida das células em cultura. Para modelar as primeiras fases da transformação da célula epitelial do ovário, a superexpressão do oncogene nas células CMYC Iosé, de novo co-cultivadas com células INOF. Estes modelos heterotípicas foram utilizados para investigar os efeitos do envelhecimento e a transformação em senescência e invasão de células epiteliais. Aqui descrevemos os passos metodológicos no desenvolvimento destes modelo tridimensional; estas metodologias não são específicos para o desenvolvimento de ovário normal e tecidos de cancro do ovário, e pode ser usado para estudar outros tipos de tecidos em que as interacções de células estromais e epiteliais são fundamentais aspecto da manutenção dos tecidos e didesenvolvimento Sease.

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Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Descrevemos metodologias para estabelecer<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotípicas modelos tridimensionais compreendendo fibroblastos de ovário e de superfície do ovário normal ou células ovarianas cancerosas epiteliais. Discute-se o uso desses modelos para estudar estromal-epiteliais interações que ocorrem durante o desenvolvimento do câncer de ovário.

Heterotípica tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

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Modelos MAME para formação de imagens 4D Live-célula do tumor: Interações microambiente que a progressão de Impacto maligno

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Medicina

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