Name: heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Это исследование было выполнено в Кек Школы медицины Университета Калифорнии, США, и Университетского колледжа в Лондоне, Великобритания. KL финансируется Национальным институтом здравоохранения гранта 5 до 19 лет CA148112-02. BG был профинансирован проект грант от Апелляционного Ева гинекологической онкологии благотворительность (Великобритания). Часть этой работы, проделанной на UCLH / UCL был частично финансируется Департаментом здравоохранения NIHR биомедицинских исследований схему финансирования центра.

На рисунке 1 показано обзор рабочего процесса описаны ниже. 1. Выделение нормальных фибробластов яичников и продление продолжительности жизни в пробирке с помощью избыточной экспрессии каталитической субъединицы холофермента hTERT <ol><li> Яичников ткан...

<ol>
	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

Биология ранней стадии эпителиального рака яичников (EOC) еще плохо изучены. Возможно, одним из основных препятствий в этой области на протяжении многих лет было отсутствие понимания ткани конкретные истоки болезни, и о значимости роли микроокружения в EOC развития. За последние нескольк...

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> PolyHEMA, пригодных для клеточной культуры </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Молекулярная биология этанола класса </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Стерильная вода для клеточных культур </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Среда 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone эмбриональной бычьей сывороткой </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;TD&gt; гентамицина </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Амфотерицин </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-гигро-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% трипсина-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Сотовый фильтр (40 или 70 мкм) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-фибробластов поверхностного белка антитела, клон 1B10 </td><td> Сигма </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-пан-цитокератин антител (C11) </td><td> Санта-Крус </td><td> SC-8018 </td></tr><tr><td> Полибрен (hexadimethrine бромид) </td><td> Сигма </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG теломеразы ПЦР ИФА PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG теломер Анализ длина </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Таблица 1. Реактивов и оборудования, указанного в данном исследовании.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

Эпителиального рака яичников (EOCs) являются ведущей причиной смерти от злокачественных гинекологических в западных обществах. Несмотря на успехи хирургического лечения и улучшения на основе платины химиотерапии, наблюдается небольшое улучшение в EOC выживаемость в течение более четырех десятилетий 1,2. В то время как I этап опухоли имеют 5-летнюю выживаемость&gt; 85%, выживаемость этап III / IV заболевания &lt;40%. Таким образом, высокий уровень смертности для EOC может быть существенно уменьшена, если опухоль была обнаружена на ранней, более поддающихся лечению, стадиях 3-5. В настоящее время молекулярно-генетические и биологические основы раннего развития стадии заболевания изучена плохо. В частности, мало известно о роли микроокружения опухоли во время посвящения; но известные факторы риска для EOCs (например, возраст и четности) предполагают, что микроокружение играет ключевую роль в начале генезиса EOCs. Поэтому мы разработали трехмерную гетеротипические моделейкак нормальный яичник и ранней стадии рака яичников. Для нормального яичника, мы совместно культивируемых нормальных поверхности яичников эпителиального (IOSE) и нормальных стромальных фибробластов (INOF) клетки, увековеченный retrovrial трансдукции каталитической субъединицы теломеразы человека холофермента (hTERT), чтобы продлить срок службы этих клеток в культуре. Для моделирования ранних стадиях яичников эпителиального трансформации клеток, избыточная экспрессия онкогена CMYC в IOSE клетки, опять совместно культивировали с INOF клеток. Эти гетеротипические модели были использованы для изучения влияния старения и старения на трансформации и вторжение в эпителиальных клетках. Здесь мы опишем методологические шаги в развитии этих трехмерных моделей; эти методики не являются специфическими для развития нормальной ткани яичников и рака яичников, и может быть использована для изучения других типов тканей, где стромальные и эпителиальные клетки взаимодействия являются фундаментальными аспектом поддержания тканей и ди-Сиз развития.

Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Мы описываем методологии для установления<em&gt; В пробирке</em&gt; Гетеротипические трехмерных моделей содержащие яичников фибробластов и нормальной поверхности яичников или раком яичников эпителиальных клеток. Мы обсудим использование этих моделей для изучения стромальных-эпителиальных взаимодействий, которые происходят во время развития рака яичников.

Гетеротипические Трехмерные<em&gt; In Vitro</em&gt; Моделирование Стромальные-эпителиальных взаимодействий во время посвящения яичников Рак и прогресс

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

MAME Модели 4D Онлайн-клеточного изображения опухоли: микроокружение взаимодействия, что воздействие злокачественной прогрессии

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

В пробирке мезотелиальной Анализ просвет, что модели ранних стадиях рака яичников Метастазы

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Биолюминесцентный Ортотопическая Модель прогрессировании рака поджелудочной железы

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Трехмерная Tissue Culture моделью для изучения первичного костного мозга человека и его злокачественных новообразований

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Трехмерные культуры: инструмента для изучения Normal Acinar Архитектура против злокачественной трансформации клеток молочной железы

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Количественное определение клеток рака молочной железы инвазивности Использование трехмерной (3D) модель

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

В пробирке обогащения рака яичников опухоли, инициирующие клетки

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Трехмерная (3D) опухоли Сфероид Вторжение Пробирной

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

Моделирование ранних стадиях рака яичников распространение в качестве Органотипической культуры человека брюшную полость

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Моделирование резистентностью к химиотерапии лейкоз<em&gt; In Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...