Name: heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Denna forskning utfördes vid Keck School of Medicine, University of California, USA, och University College London, Storbritannien. KL finansieras av National Institute of Health bidrag 5 U19 CA148112-02. BG har finansierats av ett projekt bidrag från Eva Appeal gynekologisk onkologi välgörenhet (Storbritannien). En del av detta arbete bedrivs på UCLH / UCL delvis finansiering från Department of Health: s NIHR biomedicinsk forskning Centre stödordning.

Figur 1 illustrerar en översikt av arbetsflödet som beskrivs nedan. 1. Isolering av normala äggstockarna fibroblaster och förlängning av in vitro livslängd med Överuttryck av den katalytiska subenheten av hTERT holoenzym <ol><li> Ovarian vävnader kan samlas med informerad patient samtycke och godkännande av Institutional Review Board (för amerikanska institutioner). Normala äggstockarna vävnader kan samlas efter total abdominal hysterektomi el...

<ol>
	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

Biologi tidig epitelial äggstockscancer (EOC) är dåligt känd. Kanske en av de största hindren på detta område under många år har varit bristen på förståelse för vävnadsspecifika ursprung sjukdomen, och av betydelsen av den roll som mikromiljön i EOC utveckling. Under de senaste åren har har blivit tydligt att EOC är en heterogen sjukdom med flera olika histophathological subtyper, förmodligen med olika cellulära ursprung för olika subtyper. Till exempel de aktuella data tyder på att hög kvalitet se...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Leverantör </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, lämplig för cellodling </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Molecular Biology Grade etanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Sterilt vatten för cellodling </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone fetalt bovint serum </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfotericin B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% trypsin-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Cellfilter (40 eller 70 | im) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblast ytprotein antikropp, klon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-cytokeratin antikropp (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> SC-8018 </td></tr><tr><td> Polybren (hexadimetrinbromid) </td><td> Sigma </td><td> 107.689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomeras PCR-ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerlängd analys </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabell 1. Reagenser och utrustning som avses i denna studie.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

Epitelial äggstockscancer (EOCs) är den vanligaste orsaken till död i gynekologisk malignitet i västerländska samhällen. Trots framsteg inom kirurgiska behandlingar och förbättrade platinabaserade kemoterapi, har det varit lite förbättring i EOC överlevnad för mer än fyra decennier 1,2. Samtidigt steg I tumörer har 5-årsöverlevnaden&gt; 85%, överlevnad för steg III / IV sjukdom är &lt;40%. Således kunde den höga dödligheten för EOC avsevärt minskas om tumörer upptäcktes vid tidigare, mer behandlingsbara, steg 3-5. För närvarande är den molekylära genetiska och biologiska grunden för tidigt sjukdomens utveckling dåligt förstådd. Mer specifikt är lite känt om den roll som mikromiljön vid tumörinitiering, men kända riskfaktorer för EOCs (t.ex. ålder och paritet) tyder på att mikromiljön spelar en nyckelroll i den tidiga uppkomsten av EOCs. Vi utvecklade därför tredimensionella heterotypiska modellerav både normal äggstock och tidigt stadium äggstockscancer. För den normala äggstocken, samarbetar vi odlade normala äggstockar yta epitelial (IOSE) och normal stromal fibroblast (INOF) celler, som förevigats av retrovrial transduktion av den katalytiska subenheten av humant telomeras holoenzym (hTERT) för att förlänga livslängden på dessa celler i kultur. Att modellera de tidigaste stadierna av äggstockarna epitelceller omvandling, överuttryck av CMYC onkogen i IOSE celler, återigen samodlas med INOF celler. Dessa heterotypiska modeller användes för att undersöka effekterna av åldrande och åldrande på omvandling och invasion av epitelceller. Här beskriver vi de metodologiska stegen i utvecklingen av dessa tredimensionella modell, dessa metoder är inte specifika för utvecklingen av normala äggstockar och äggstockscancer vävnad cancer, och kan användas för att studera andra vävnadstyper där stromala och epiteliala cell interaktioner är en grundläggande aspekt av vävnaden underhåll och di-sjukdomsbekämpning utveckling.

Watch this Scientific Journal Video about Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression at JoVE.com

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Vi beskriver metoder för att fastställa<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypiska tredimensionella modeller består äggstockarna fibroblaster och normala äggstockar yta eller äggstockscancer epiteliala celler. Vi diskuterar användningen av dessa modeller för att studera stromal-epiteliala samspel som sker under äggstockscancer utveckling.

Heterotypisk Tredimensionell<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering av Stromal-Epithelial interaktioner Under äggstockscancer Inledande och progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

Mame Modeller för 4D Live-cell imaging av tumör: mikromiljö Interaktioner som påverkar malign progression

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro mesothelial Avslutande analys att modeller de tidiga stegen av äggstockscancer Metastasis

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Bioluminescent Orthotopic Modell av bukspottkörtelcancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

En Tredimensionell Tissue Culture modell för att studera Primary humana benmärg och dess Maligniteter

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Tredimensionell kulturer: Ett verktyg för att studera Normal Acinar arkitektur kontra malignt Omformning av bröstceller

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kvantifiering av bröstcancer Cell Invasivt hjälp av en tredimensionell (3D) Modell

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Enrichment of Ovarian Cancer Tumor-initiating Cells

In vitro Anrikning av äggstockscancer tumör-initierande celler

Evidence suggests that small subpopulations of tumor cells maintain a unique self-renewing and differentiation capacity and may be responsible for tumor ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensionell (3D) Tumör Spheroid invasionsanalys

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

Modellering de tidiga stegen av äggstockscancer Spridning i en Organotypic Kultur av den mänskliga Peritoneal Cavity

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

Modellering Chemotherapy Resistent Leukemi<em&gt; In Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...