Name: differentiating functional roles of gene expression from immune and non-immune cells in mouse colitis by bone marrow transplantation
Uploaded: 2012-10-01T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation at JoVE.com

Эта работа финансировалась пилота и гранты технико-экономическое обоснование с UCLA-CURE центр, Крона и колит фонда Америки развития карьеры Award (# 2691) и Национального института здоровья NIDDK K01 (DK084256) финансирование Hon Вай Кун. Костный мозг облучения операция была оказана помощь Бернард Левин и Скотт Кухня UCLA Центра исследований СПИДа мыши / человека Химера объекта Core. Операции проточной цитометрии помогал UCLA объекта основных вектора.

1. Перед тем, как начать-технического соображения <ol><li> Мы рекомендуем использовать как C57/BL6 мышей дикого типа и нокаутных мышей для эксперимента потому, что мыши с соответствующими молекулами CD можно приобрести у основных поставщиков мыши. </li><li> Поскольку трудно отслеживать мышей дик?...

<ol>
	<li>Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Intestinal+Inflammation+in+DSS-induced+Model+of+IBD.">Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD.</a> J. Vis. Exp. (60), e3678 (2012).</li><li>Ungaro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+Toll-like+receptor+4+antagonist+antibody+ameliorates+inflammation+but+impairs+mucosal+healing+in+murine+colitis.">A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).</li><li>Castagliuolo, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+neurokinin-1+receptor+during+colitis+in+mice:+role+of+the+epidermal+growth+factor+receptor.">Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor.</a> Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).</li><li>Koon, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathelicidin+signaling+via+the+Toll-like+receptor+protects+against+colitis+in+mice.">Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice.</a> Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).</li><li>Lee, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=marrow+cells+in+murine+colitis:+multi-signal+analysis+confirms+pericryptal+myofibroblast+engraftment+without+epithelial+involvement.">marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement.</a> PLoS One. 6, e11 (2011).</li><li>Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+cell+therapy+using+bone+marrow-derived+stem+cells/endothelial+progenitor+cells+to+accelerate+neovascularization+in+healing+of+experimental+ulcerative+colitis.">New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis.</a> Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).</li><li>Valcz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphoid+aggregates+may+contribute+to+the+migration+and+epithelial+commitment+of+bone+marrow-derived+cells+in+colonic+mucosa.">Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa.</a> J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).</li><li>Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+bone+marrow-derived+monocytes/macrophages+in+the+repair+of+mucosal+damage+caused+by+irradiation+and/or+anticancer+drugs+in+colitis+model.">Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model.</a> Mediators Inflamm. 2010, 634145 (2010).</li><li>Bakhautdin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+macrophage-derived+ceruloplasmin+in+inflammatory+bowel+disease.+.">Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. .</a> Gut. , (2012).</li><li>Seta, N., Kuwana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+multipotent+progenitors+from+human+circulating+CD14++monocytes.">Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes.</a> Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).</li><li>Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplanted+human+bone+marrow+cells+generate+new+brain+cells.">Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells.</a> J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).</li><li>Finnberg, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+and+antitumor+effects+of+GFP(+)+bone+marrow-derived+cells+homing+to+syngeneic+mouse+colon+tumors.">High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors.</a> Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).</li><li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+bone+marrow+transplantation+(BMT):+providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies.">Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).</li><li>Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+dose+correlates+with+the+speed+of+immune+reconstitution+after+stem+cell+transplantation.">Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation.</a> Blood. 103, 4344-4352 (2004).</li></ol>

Это трансплантации костного мозга подход годится для иммунологии исследования колит, инфекции, рак, ожирение и другие заболевания. Это трансплантации костного мозга эксперимента необходима, когда ген интересов, выражается в обоих костного мозга и не костного мозга и клеток, полученны...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> Буфер сотовых окрашивания </td><td> Biolegend </td><td> # 420201 </td></tr><tr><td> 10X лизис буфера РБК </td><td> Biolegend </td><td> # 420301 </td></tr><tr><td> FITC мыши контроля изотипа </td><td> Biolegend </td><td> # 400207 </td></tr><tr><td> PE мыши контроля изотипа </td><td> Biolegend </td><td> # 400211 </td></tr><tr><td> PE анти-мышиных CD45.2 </td><td> Biolegend </td><td> # 109807 </td></tr><tr><td> FITC анти-мышиных CD45.1 </td><td> Biolegend </td><td> # 110705 </td></tr><tr><td> Anti-мышь CD16/32 блокировки </td><td> Biolegend </td><td> # 101301 </td></tr><tr><td> 40 мкм фильтр клетке </td><td> Fisherbrand </td><td> # 22363547 </td></tr><tr><td> PBS 1X </td><tD&gt; MP Biomedicals </td><td> # 1860454 </td></tr><tr><td> Гепарин </td><td> Fisherbrand </td><td> # BP2425 </td></tr><tr><td> Sulfatrim (СМЗ) </td><td> QualiTest </td><td> NC9242720 (Фишер) </td></tr><tr><td> Лизола IC </td><td> Andwin Научные </td><td> NC9745686 (Фишер) </td></tr><tr><td> Vaccutainer </td><td> BD </td><td> # 8000813 </td></tr><tr><td> Мышь фиксатор </td><td> Braintree Научные </td><td> # TV-150 </td></tr><tr><td> Облучатель </td><td> JL Пастух и Associates </td><td> Mark I 68A </td></tr><tr><td> Проточный цитометр </td><td> BD </td><td> BD FACSCanto II </td></tr><tr><td> Проточный цитометр пробирке </td><td> Сокол </td><td> # 352052 </td></tr><tr><td> Цифровой суппорт </td><td> Fisherbrand </td><td> 14-648-17 </td></tr><tr><td> Hemoccult ИКТ </td><td> Beckman Coulter </td><td> G0328QW </td></tг&gt; </tbody></table>

differentiating functional roles of gene expression from immune and non-immune cells in mouse colitis by bone marrow transplantation

Чтобы понять роль генов в развитии колита, мы сравнили ответы мышей дикого типа и ген интересов, дефицитных мышей нокаутом колит. Если ген интересов, выражается и в костном мозге клеток, полученных и не полученных костного мозга клеток хозяина, однако можно дифференцировать роль интересующего гена в костном мозге клеток, полученных и не костного мозга клеток, полученных из костного технику трансплантации костного мозга. Для изменения костного мозга клетки генотипа мышей, оригинальный костный мозг получателя мышей были уничтожены путем облучения, а затем заменяются новыми костного мозга донора различных генотипов. Когда мышей дикого типа донора костного мозга пересаживают на мышах, мы могли бы генерировать нокаутных мышей дикого типа экспрессия генов в клетках костного мозга, полученных клеток. Кроме того, при нокаутных мышей-доноров костного мозга пересаживают в дикий тип получателя мышей, мышей дикого типа без гена интересов, выражающийиз костного мозга клеток, полученных были произведены. Тем не менее, пересадка костного мозга не может быть на 100%. Таким образом, мы использовали кластер дифференцировки (CD) молекул (CD45.1 и CD45.2) в качестве маркеров донора и реципиента клетки для отслеживания доли донорского костного мозга клеток, полученных в получатель мышей и успех трансплантации костного мозга. Дикого типа мышей с генотипом и CD45.1 нокаутных мышей с генотипом CD45.2 были использованы. После облучения получателя мышей, доноров клеток костного мозга различных генотипов вводили в получатель мышей. Когда новый костный мозг регенерировать взять на свой иммунитет, мышей заражали химического агента (декстран сульфат натрия, DSS 5%), чтобы вызвать колит. Здесь мы также показали способ, чтобы побудить колита у мышей и оценить роль генов интерес, проявленный из костного мозга, полученных клеток. Если ген интересов, от клеток, полученных из костного играет важную роль в развитии заболевания (такие как кишечнаяТИС), фенотип получателя мышей с трансплантацией костного мозга может быть существенно изменен. В конце колит экспериментов, костного мозга клеток в крови и костном мозге были помечены антитела против CD45.1 и CD45.2 и их количественное соотношение существование может быть использован для оценки успеха пересадки костного мозга методом проточной цитометрии. Успешная трансплантация костного мозга должны показать подавляющее большинство генотипа (в срок маркер молекулу CD) над получателем генотипа как в костном мозге и крови мышей получателя.

Если ген интересов, играет важную роль в иммунных клетках в процессе развития колита, мышей, получавших костного мозга различных генотипов по трансплантации костного мозга (WT, чтобы KO KO или в WT) должны иметь измененный ответ на DSS колит. Одним из наиболее важных параметров для определени...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation at JoVE.com

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

Трансплантация костного мозга дает возможность изменить генотип костного мозга клетки. Если ген интерес выражается как в костном мозге клеток, полученных и не полученных костного мозга клеток, трансплантация костного мозга может изменить костного мозга клеток разного генотипа без изменения без костного мозга клетки генотипа.

Дифференцируя функциональной роли экспрессии генов от иммунной и не-иммунных клеток в мышь колит трансплантацией костного мозга

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Измерение кальпаин деятельности в фиксированных и живых клеток методом проточной цитометрии

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Seven Steps to Stellate Cells

Семь шагов к звездчатых клеток

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Выделение функциональных сердечно иммунных клеток

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Выделение, очистка и маркировки Мышь нейтрофилов костного мозга для функциональных исследований и приемных Эксперименты Трансфер

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Костного мозга, полученных макрофагов производства

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

Отслеживание костного мозга мышей моноцитов<em&gt; В Vivo</em

Real time multiphoton imaging provides a great opportunity to study cell trafficking and cell-to-cell interactions in their physiological 3-dimensionnal ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Генерация и идентификация GM-CSF производный альвеол, как макрофаги и дендритные клетки из костного мозга мыши

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Identification and Isolation of Oligopotent and Lineage-committed Myeloid Progenitors from Mouse Bone Marrow

Выявление и изоляция Oligopotent и Lineage, совершенные миелоидного предшественники костного мозга мыши

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

В естественных условиях модель мыши для активации Т-клеток CD4 наивно мера, пролиферации и дифференцирования Th1, индуцированных дендритные клетки костного мозга, полученных

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...