Name: human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy
Uploaded: 2012-08-14T13:00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy at JoVE.com

Мы искренне благодарим доктора Чена Wenjin за помощь с программой MATLAB и Института рака в Нью-Джерси гистопатология объекта и объекта микроскопии. Мы также благодарны рецензентам за их комментарии и предложения. Данное исследование опирается на Раймонд и Беверли Sackler исследовательский фонд.

<ol>
	<li>Taal, B. G., Visser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+neuroendocrine+tumours.">Epidemiology of neuroendocrine tumours.</a> Neuroendocrinology. 80, 3-7 (2004).</li><li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-365 (2007).</li><li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid-based+drug+screen:+considerations+and+practical+approach.">Spheroid-based drug screen: considerations and practical approach.</a> Nat. Protocol. 4, 309-324 (2009).</li><li>Chan, T. F., Vese, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+contours+without+edges.">Active contours without edges.</a> IEEE Trans Image Process. 10, 266-277 (2001).</li><li>Olert, J., Wiedorn, K. H., Goldmann, T., K&#252;hl, H., Mehraein, Y., Scherthan, H., Niketeghad, F., Vollmer, E., M&#252;ller, A. M., M&#252;ller-Navia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE++Fixation:+A+Novel+Fixing+Method+and+Paraffin-embedding+Technique+for+Human+Soft+Tissues.">HOPE Fixation: A Novel Fixing Method and Paraffin-embedding Technique for Human Soft Tissues.</a> Pathology-Research and Practice. 197, 823-826 (2001).</li><li>Baradari, V., Huether, A., H&#246;pfner, M., Schuppan, D., Scher&#252;bl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiproliferative+and+proapoptotic+effects+of+histone+deacetylase+inhibitors+on+gastrointestinal+neuroendocrine+tumor+cells.">Antiproliferative and proapoptotic effects of histone deacetylase inhibitors on gastrointestinal neuroendocrine tumor cells.</a> Endocr. Relat. Cancer. 13, 1237-1250 (2006).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids.">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J. Vis. Exp. (51), e2720 (2011).</li><li>Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+basement+membrane+cultures+to+model+oncogene-induced+changes+in+mammary+epithelial+morphogenesis.">Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 9, 297-310 (2004).</li><li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis.">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J. Biomol. Screen. 11, 922-932 (2006).</li><li>Napolitano, A. P., Chai, P., Dean, D. M., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+Self-Assembly+of+Complex+Cellular+Aggregates+on+Micromolded+Nonadhesive+Hydrogels.">Dynamics of the Self-Assembly of Complex Cellular Aggregates on Micromolded Nonadhesive Hydrogels.</a> Tissue Engineering. 13, 2087-2094 (2007).</li><li>do Amaral, J. B., Rezende-Teixeira, P., Freitas, V. M., Machado-Santelli, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7+cells+as+a+three-dimensional+model+for+the+study+of+human+breast+cancer.">MCF-7 cells as a three-dimensional model for the study of human breast cancer.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 1097-1107 (2011).</li><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148, 3-15 (2010).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Мы показали, простой, надежный и воспроизводимый метод для формирования 3D многоклеточных сфероид от человека нейроэндокринных клеток опухоли использованием агарозы покрытые 24-луночных планшетах. Успех этого метода является возможность получения одного сфероид с однородным размером и формой равномерный по 6-й день, начиная с фиксированным числом клеток. Ключевым шагом является медленное возбуждение пластины с NET клеток в первые 16-24 часа после покрытия. Этот метод может также применяться для общей рака молочной железы человека клеточной линии MCF-7 аденокарциномы толстой кишки человека клеточной линии НТ-29, человеческое немелкоклеточного рака легкого клеточной линии H1299 и человеческие эмбриональные линии клеток почек НЕК-293. Все они могут сформировать единый и компактный 3D сфероидов для терапевтического экран наркотиков (данные не представлены). Хотя некоторые методы сообщила о создании 3D сфероидов, 7-10 метод сообщили здесь не требует специальных пластин или реагентов и, таким образом, простым и экономически эффективным. Наши неопубликованные данные продемонстрировалоNET, что электронная 3D сфероидов выросли на агарозном имитировать в естественных условиях NET опухоли ксенотрансплантата геометрически и молекулярно, по сравнению с однослойной 2D-клеток. Это похоже на то, что было сообщено в 3D сфероидов из на других человеческих клеточных линий рака. 11,12 ограничение 3D-модели культуры клеток является то, что он не может полностью заменить тестирование в естественных условиях эффективность любых лекарств или лечебных процедур, потому что 3D сфероиды как аваскулярный опухоли, которая отличается от опухолей в естественных условиях в этом аспекте. Тем не менее, этот метод поможет преодолеть разрыв и оценки NET лекарственных препаратов из в пробирке в естественных условиях в некоторых аспектах. Иммунофлуоресценции пятна на многоклеточных сфероидов очень трудно выполнить в связи с большими размерами и геометрией плавающей 3D сфероидов и ограничения конфокальной микроскопии. Здесь мы проиллюстрируем метод для обработки HistoGel вложения для парафинавложения, позволяющий иммуногистохимического окрашивания последовательного секционного слайды 3D сфероидов. Кроме того, наши специально разработанные программы MATLAB позволяет точно и воспроизводимо оценивать размер сфероидов, контролировать эффективность препарата эффективно, и могут быть включены в высокой пропускной способности экрана в разработке препаратов для пациентов NET.

<table border="1"><tbody><tr><td> Имя </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> DMEM/F12 СМИ </td><td> Гибко </td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td> Гибко </td><td> 12604 </td><td></td></tr><tr><td> 24-луночных </td><td> Сокол </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 70 мМ ячейки фильтра </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td> Стерильные уплотнительная лента </td><td> Nunc </td><td> 236366 </td><td></td></tr><tr><td> Трихостатин </td><td> Сигма </td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td> Орбитальный Шейкер </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

Нейроэндокринные опухоли (НРТ) редкие опухоли, с частотой два раза в 100 000 человек в год, и на их долю приходится 0,5% всех злокачественных опухолей человека. 1, кроме хирургии для меньшинства пациентов, которые представляют с локализованным заболеванием, есть мало или вообще не выживаемости системной терапии. Таким образом, существует большая потребность, чтобы лучше понять биологию сетей, в частности, определить новые терапевтические мишени для пациентов с неоперабельными метастазами или нейроэндокринных опухолей. 3D культуре клеток становится все более популярным методом для скрининга препаратов из-за своей актуальности и в моделировании в естественных условиях опухоль организации тканей и микросреды. 2,3 3D многоклеточных сфероидов может дать ценную информацию более оперативно и менее дорогим способом, чем непосредственно перейти от 2D культуры клеток экспериментов животных (мышиные) модели. Для облегчения открытия новых терапевтических средств для NET погладитьients, мы создали в пробирке 3D модель многоклеточных сфероидов помощи человека NET клеточных линий. NET клетки высевают в неклейкой агарозном покрытые 24-луночного планшета и инкубировали в физиологических условиях (5% 2 CO, 37 ° C) с очень медленном перемешивании в течение 16-24 часов после покрытия. Клетки образуют многоклеточный сфероидов, начиная с 3-го или 4-й день. Сфероидов становятся более сферическими с 6-й день, после чего препарат лечение начато. Эффективность медикаментозного лечения на NET сфероидов контролируется на основе морфологии, формы и размера сфероидов с фазово-контрастной световой микроскоп. Размер сфероидов оценивается автоматически, используя специально разработанные MATLAB программа, основанная на активной алгоритм контура. Кроме того, мы покажем простой способ обработки HistoGel вложения на эти 3D сфероидов, что позволяет использовать стандартные гистологических и иммуногистохимических методов. <pкласс = &quot;jove_content&quot;&gt; Это первый доклад о создании 3D сфероидов с помощью NET клеточных линий для изучения влияния лекарственных средств. Мы провели также гистология на эти 3D сфероидов, и отображается пример эффект одного препарата на рост и распространение NET сфероидов. Наши результаты подтверждают, что NET сфероидов ценны для дальнейших исследований NET биологии и разработки лекарственных препаратов.

Watch this Scientific Journal Video about Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy at JoVE.com

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Мы предлагаем простое наложение агарозном платформы расти 3D многоклеточных сфероидов использованием нейроэндокринные клеточные линии рака. Этот метод обеспечивает очень удобный способ изучить влияние лекарственных препаратов на нейроэндокринные клетки опухоли. Это также может помочь нам установить человека нейроэндокринные опухоли сфероидов для лечения рака.

Человека нейроэндокринной опухоли клеточных линий в качестве трехмерных моделей по изучению прав нейроэндокринные опухоли терапия

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

Роман с высоким разрешением<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображений методика исследования динамических характеристик внутричерепных структур к росту опухоли и терапии

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Трехмерная Tissue Culture моделью для изучения первичного костного мозга человека и его злокачественных новообразований

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Экзайтотоксическим Стимуляция мозга Microslices как<em&gt; В пробирке</em&gt; Модель инсульта

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Количественное определение клеток рака молочной железы инвазивности Использование трехмерной (3D) модель

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Трехмерная Co-культура Модель опухолью стромы взаимодействия

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Оценка опухоли инфильтрирующие лейкоцитов подмножеств в подкожной опухоли модели

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Создание человека Множественная миелома модели ксенотрансплантата в Курица по изучению роста опухоли, инвазии и ангиогенеза

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Трехмерная (3D) опухоли Сфероид Вторжение Пробирной

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Динамический легких Отслеживание опухоли для стереотаксической АБЛЯЦИОННОГО Body радиационной терапии

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Модель культивирования органотипической кусочки глиобластомы человека для изучения миграции опухолевых клеток и специфических для пациента эффектов антиинвазивных препаратов

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...