Name: measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes
Uploaded: 2013-03-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل Transregio Sonderforschungsbereich 19 (SFB/TR19، C2) من جمعية الألمانية للبحوث (DFG)، والوزارة الاتحادية للاقتصاد والتكنولوجيا مشروع 2727801MD0 ZIM-KF ومركز الابتكار الكفاءة - الاستجابات المناعية الخلطية في مجال أمراض القلب والأوعية الدموية ( ZIK-رفع أسعار الفائدة، BMBF FKZ 03Z2CN12) من الوزارة الاتحادية للتعليم والبحث العلمي في ألمانيا. وأجريت التجارب الإسكان ومع الحيوانات وفقا لتوصيات جمعية مختبر علم الحيوان (GESELLSCHAFT FÜR Versuchstierkunde، GV-SOLAS) والاتحاد الأوروبي للمختبر جمعية علم الحيوان (FELASA).

1. مفتش عزل من عينات المرضى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ميني امتزاز مناعي عن طريق ملء الأعمدة 3 مل المضادة للمفتش sepharose و في 2 مل EDTA المريض البلازما في عمود فارغ باك فندق Econo. مفتش العزلة يتطلب على الأقل 2 مل من البلازما المريض. </li><li style=";text-align:rig...

<ol>
	<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2011+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (4), e18 (2011).</li><li>Caforio, A. L., Vinci, A., Iliceto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-heart+autoantibodies+in+familial+dilated+cardiomyopathy.">Anti-heart autoantibodies in familial dilated cardiomyopathy.</a> Autoimmunity. 41 (6), 462 (2008).</li><li>Yoshikawa, T., Baba, A., Nagatomo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+mechanisms+underlying+dilated+cardiomyopathy.">Autoimmune mechanisms underlying dilated cardiomyopathy.</a> Circ. J. 73 (4), 602 (2009).</li><li>Felix, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+effects+of+immunoadsorption+and+subsequent+immunoglobulin+substitution+in+dilated+cardiomyopathy:+Three-month+results+from+a+randomized+study.">Hemodynamic effects of immunoadsorption and subsequent immunoglobulin substitution in dilated cardiomyopathy: Three-month results from a randomized study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 35 (6), 1590 (2000).</li><li>Staudt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+immunoglobulin+G3+subclass+in+dilated+cardiomyopathy:+results+from+protein+A+immunoadsorption.">Role of immunoglobulin G3 subclass in dilated cardiomyopathy: results from protein A immunoadsorption.</a> Am. Heart J. 150 (4), 729 (2005).</li><li>Nikolaev, V. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescence+method+for+the+rapid+detection+of+functional+beta1-adrenergic+receptor+autoantibodies+in+heart+failure.">A novel fluorescence method for the rapid detection of functional beta1-adrenergic receptor autoantibodies in heart failure.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 50 (5), 423 (2007).</li><li>Jahns, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+activating+human+beta1-adrenergic+receptors+are+associated+with+reduced+cardiac+function+in+chronic+heart+failure.">Autoantibodies activating human beta1-adrenergic receptors are associated with reduced cardiac function in chronic heart failure.</a> Circulation. 99 (5), 649 (1999).</li><li>Gocayne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+structure+of+rat+cardiac+beta-adrenergic+and+muscarinic+cholinergic+receptors+obtained+by+automated+DNA+sequence+analysis:+further+evidence+for+a+multigene+family.">Primary structure of rat cardiac beta-adrenergic and muscarinic cholinergic receptors obtained by automated DNA sequence analysis: further evidence for a multigene family.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 84 (23), 8296 (1987).</li><li>Jaenicke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+complete+sequence+of+the+human+beta-myosin+heavy+chain+gene+and+a+comparative+analysis+of+its+product.">The complete sequence of the human beta-myosin heavy chain gene and a comparative analysis of its product.</a> Genomics. 8 (2), 194 (1990).</li><li>Piper, H. M., Volz, A., Schwartz, P., Piper, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Culture Techniques in Heart and Vessel Research. , (1990).</li><li>Kubin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+endothelial+cells+remodel+cultured+adult+cardiomyocytes+and+increase+their+survival.">Microvascular endothelial cells remodel cultured adult cardiomyocytes and increase their survival.</a> Am. J. Physiol. 276 (6 Pt. 2), H2179 (1999).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> J. Biol. Chem. 260 (6), 3440 (1985).</li><li>Magnusson, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmunity+in+idiopathic+dilated+cardiomyopathy.+Characterization+of+antibodies+against+the+beta+1-adrenoceptor+with+positive+chronotropic+effect.">Autoimmunity in idiopathic dilated cardiomyopathy. Characterization of antibodies against the beta 1-adrenoceptor with positive chronotropic effect.</a> Circulation. 89 (6), 2760 (1994).</li><li>Wakefield, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+application+of+in+vitro+methods+to+safety+pharmacology.">The application of in vitro methods to safety pharmacology.</a> Fundam. Clin. Pharmacol. 16 (3), 209 (2002).</li><li>Kajzar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+physiological+conditions+for+cell+analyses:+forces+of+heart+muscle+cells+suspended+between+elastic+micropillars.">Toward physiological conditions for cell analyses: forces of heart muscle cells suspended between elastic micropillars.</a> Biophys. J. 94 (5), 1854 (2008).</li></ol>

طريقة عرض يوفر وسيلة مناسبة للكشف عن الأجسام المضادة وظيفيا فعالة القلب في المرضى الذين يعانون من أصل DCM غير واضحة. بالمقارنة مع الأساليب الأخرى، مثل الكشف عن الأجسام المضادة النشطة وظيفية ضد المستقبلات-β1 من تأثيرها على مستويات المعسكر 6، لدينا طريقة مستق...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف / معدات </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Immunosorba الحفاظ الحل </td><td> فريزنيوس ميديكال كير </td><td> 903609211 </td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز من النوع 2 </td><td> خلية النظام </td><td> LS004176 </td><td></td></tr><tr><td> BSA، حمض دهني مجانا </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A6003 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin </td><td> سيغما الدريخ </td><td> L2020 </td><td></td></tr><tr><td> FURA-02:00 </td><td> سيغما الدريخ </td><td> F0888 </td><td> 1 ملغ / مل في DMSO </td></tr><tr><td> فندق Econo باك أعمدة اللوني </td><td> BioRad </td><td> 732-1010 </td><td></td></tr><tr><td> أطياف / بور الحيوية السليلوز استر غسيل الكلى MEMBRANه </td><td> Spectrumlabs </td><td> 131417 </td><td></td></tr><tr><td> 4 تشامبيريد جيدا ساترة </td><td> نونك </td><td> 155383 </td><td></td></tr><tr><td> خلية عضلية الكالسيوم وانقباض نظام تسجيل </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> IonWizard برامج التحليل 6،0 </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes

تمدد عضلة القلب (DCM) هي واحدة من الأسباب الرئيسية لفشل القلب في البالغين الأصغر سنا 1. على الرغم من أن المعروف التصرف الوراثية والتعرض للمواد السامة الأسباب لهذا المرض في حوالي ثلث المرضى، وأصل DCM زال من غير الواضح إلى حد كبير. في عدد كبير من هؤلاء المرضى، فقد تم الكشف عن الأجسام المضادة ضد الحواتم القلب والتي يشتبه في أنها تلعب دورا محوريا في بداية وتطور المرض 2،3. وشدد على أهمية الأجسام المضادة التي كتبها القلب تحسن الدورة الدموية لوحظ في المرضى DCM بعد القضاء على الأجسام المضادة من امتزاز مناعي 3-5. مجموعة متنوعة من مستضدات محددة قد حددت بالفعل 2،3 ويمكن الكشف عن الأجسام المضادة ضد هذه الأهداف بحلول المناعية. ومع ذلك، يمكن لهذه المقايسات لا تميز بين تحفيز (وبالتالي فعالة وظيفيا) ومنع الأجسام المضادة. هناك زيادة evidenم أن هذا التمييز هو 6،7 حاسمة. ويمكن أيضا أن يفترض أن الأهداف لعدد من الأجسام المضادة لا تزال مجهولة cardiotropic وبالتالي لا يمكن الكشف عنها بواسطة المناعية. ولذلك، أنشأنا وسيلة للكشف عن الأجسام المضادة وظيفيا cardiotropic نشطة، مستقلة عن مستضد كل منهما. الخلفية للأسلوب هو التماثل عالية وعادة ما يلاحظ بالنسبة للمناطق الوظيفية للبروتينات القلب في الثدييات بين 8،9. هذا يشير إلى أن الأجسام المضادة الموجهة ضد مستضدات القلب الإنسان ومع الخلايا المستهدفة غير البشرية، والذي يسمح اختبار مفتش الحكومة من المرضى DCM على cardiomyocytes الفئران الكبار عبور الرد. طريقتنا تتكون من 3 خطوات: أولا، يتم عزل مفتش من البلازما المريض باستخدام sepharose و يقترن المضادة للمفتش الأجسام المضادة التي تم الحصول عليها من أعمدة امتزاز مناعي (PlasmaSelect، Teterow، ألمانيا). يتم عزل الثاني، cardiomyocytes الكبار بحلول نضح كولاجيناز في جهاز نضح Langendorff باستخدام AProtocol تعديل من الأعمال السابقة 10،11. وترد في الحصول على cardiomyocytes coverglasses حجرات laminin المغلفة وملطخة FURA-2، صبغة الفلورسنت الكالسيوم الانتقائية التي لا يمكن أن تتحقق بسهولة في الخلية داخل الخلايا لمراقبة الكالسيوم (كا 2 +) محتويات 12. في الخطوة الأخيرة، وأثر مفتش المريض على تقصير الخلايا والكالسيوم 2 + يتم رصد العابرين من cardiomyocytes مجال حفز على الانترنت باستخدام خلية عضلية والكالسيوم التجارية انقباض نظام الرصد (IonOptix، ميلتون، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) متصلة الفلورسنت القياسية لمعكوس المجهر.

حفز مثالين لقياس inotropy الخلوية في مجال cardiomyocytes الكبار (الشكل 2) باستخدام خلية عضلية كا 2 + تسجيل انقباض والنظام وترد أدناه. الشكل 3 يعطي انطباعا للقياس السرعة، بينما في الشكل 4 تأثير الأجسام المضادة cardiodepressive للمريض ويظهر مع DCM. <p class="jove_...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes at JoVE.com

Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

طريقة عرض يوفر وسيلة للكشف عن الأجسام المضادة وظيفية فعالة cardiotropic في البلازما من المرضى الذين يعانون من تمدد عضلة القلب، بغض النظر عن مستضد محددة، من خلال تحليل أثر المناعي المريض معزولة على تقصير الخلوية والعابرين الكالسيوم داخل الخلايا في الفئران المعزولة cardiomyocytes.

قياس تأثيرات على الأجسام المضادة من وظيفة الخلوية Cardiomyocytes متفرقة

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

قياس الكالسيوم عصاري خلوي 2 + في مفاوية مقلص متفرقة

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

والفحص صفيحة ميكروسكوبية لتقييم تأثيرات المواد الكيماوية على RBL-2H3 الصاري تحبب الخلايا: آثار التريكلوسان بدون استخدام مذيب عضوي

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

طرق للكشف الكمي للجسم التي يسببها تكملة التنشيط على خلايا الدم الحمراء.

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

تحليل آثار خلايا انسجة على تجنيد الكريات البيض من التدفق

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

تدفق تحليل Cytometric من متجهة الجسيمات بيت ت 1 مسببات الحساسية في PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Peptide Scanning-assisted Identification of a Monoclonal Antibody-recognized Linear B-cell Epitope

تحديد حاتمة الخطي B-خلية المعترف بها الأجسام المضادة وحيدة النسيلة-الببتيد الضوئي بمساعدة

The identification of an antigenic epitope by the immune system allows for the understanding of the protective mechanism of neutralizing antibodies that ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

اختبار تحمل الجلوكوز داخل، قياس وظيفة الرئة، والتثبيت في الرئة لدراسة تأثير السمنة والايض البصر على النتائج الرئوية

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

تقييم آثار المخدرات على أساس الأجسام المضادة على موريني نخاع العظام وتنشيط بلعم البريتوني

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...