Name: measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes
Uploaded: 2013-03-08T12:00:00
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Humorale Immunantworten in Cardiovascular Diseases (- Diese Arbeit wurde durch den Sonderforschungsbereich Transregio 19 (SFB/TR19, C2) der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG), das Bundesministerium für Wirtschaft und Technologie Projekt ZIM-KF 2727801MD0 und das Zentrum für Innovationskompetenz unterstützt ZIK-Wanderung, BMBF FKZ 03Z2CN12) des Bundesministeriums für Bildung und Forschung, Deutschland. Gehäuse und Experimente mit Tieren wurden in Übereinstimmung mit den Empfehlungen der Society for Laboratory Animal Science (Gesellschaft für Versuchstierkunde GV-SOLAS) und der Federation of European Laboratory Animal Science Association (FELASA) durchgeführt.

Ein. IgG Isolation aus Patientenproben <ol><li> Bereiten Mini-Immunadsorption Spalten, indem 3 ml anti-IgG-Sepharose pro 2 ml Patienten EDTA-Plasma in ein leeres Econo Pac Spalte. IgG Isolation erfordert mindestens 2 ml Patientenplasma. </li><li> Legen Sie einen Filter auf der Anti-IgG Sepharose, schnitt den unteren Spitze der Kolonne und drücken Sie die Filter, um eine Flussrate von ca. 1 Tropfen / sec erreichen. Lassen Sie die Konservierungslösung aus der Säule laufen. </li><li> Die Säule wird mit 3 Volumen 0,9%...

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	<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2011+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (4), e18 (2011).</li><li>Caforio, A. 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Die vorgestellte Methode bietet einen geeigneten Weg, um funktionell wirksame kardiale Autoantikörper bei Patienten mit DCM unklarer Herkunft zu erkennen. Im Vergleich zu anderen Methoden, wie zB die Erfassung von funktionell aktiven Antikörper gegen den β1-Adrenozeptor durch ihre Auswirkungen auf die cAMP-Spiegel 6, ist unsere Methode unabhängig von einem bestimmten Epitop. Selbstverständlich gibt es andere Epitop unabhängigen Assays in der Literatur beschrieben, dh Zählen der Schlag...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz / Ausrüstung </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Immunosorba Konservierungslösung </td><td> Fresenius Medical Care </td><td> 903609211 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase Typ 2 </td><td> Cell System </td><td> LS004176 </td><td></td></tr><tr><td> BSA, fettsäurefrei </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A6003 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L2020 </td><td></td></tr><tr><td> Fura-2 AM </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F0888 </td><td> 1 mg / ml in DMSO </td></tr><tr><td> Econo Pac Chromatographiesäulen </td><td> BioRad </td><td> 732-1010 </td><td></td></tr><tr><td> Spectra / Por Biotech Cellulose Ester Dialyse Membrane </td><td> Spectrumlabs </td><td> 131417 </td><td></td></tr><tr><td> 4 gut Chambered Deckglas </td><td> Nunc </td><td> 155383 </td><td></td></tr><tr><td> Myozyten Calcium und Kontraktilität Recording System </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> IonWizard 6,0-Analyse-Software </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes

Die dilatative Kardiomyopathie (DCM) ist eine der Hauptursachen für Herzinsuffizienz bei jüngeren Erwachsenen 1. Obwohl genetische Disposition und Exposition gegenüber toxischen Substanzen Ursachen für diese Erkrankung in etwa einem Drittel der Patienten bekannt sind, bleibt der Ursprung der DCM weitgehend unklar. In einer beträchtlichen Anzahl dieser Patienten haben Autoantikörper gegen kardiale Epitope erkannt und stehen im Verdacht, eine entscheidende Rolle bei der Entstehung und Progression der Erkrankung 2,3 spielen. Die Bedeutung der kardialen Autoantikörper wird durch eine hämodynamische Verbesserung DCM-Patienten nach der Eliminierung von Autoantikörpern durch Immunadsorption 3-5 beobachtet unterstrichen. Eine Vielzahl von spezifischen Antigenen wurden bereits identifiziert und 2,3 Antikörper gegen diese Ziele können durch Immunoassays nachgewiesen werden. Allerdings können diese Assays nicht zwischen Stimulierung (und daher funktionell wirksame) und Blockieren Autoantikörpern diskriminieren. Es gibt immer mehr evidence, dass diese Unterscheidung wichtig 6,7 ist. Es kann auch angenommen werden, dass die Ziele für eine Reihe von Antikörpern kardiotropen noch unidentifizierten und daher nicht durch Immunoassays nachgewiesen werden können. Daher haben wir ein Verfahren zum Nachweis von funktionell aktiven Antikörpern kardiotropen, unabhängig von ihrer jeweiligen Antigen. Der Hintergrund für das Verfahren ist die hohe Homologie der Regel für funktionelle Bereiche der kardialen Proteinen in Säugern zwischen 8,9 beobachtet. Dies deutet darauf hin, dass Antikörper gegen menschliches Herz-Antigene gerichtet wird mit nicht-humanen Zielzellen, die Prüfung von IgG aus DCM ermöglicht Patienten an adulten Rattenkardiomyozyten kreuzreagieren. Unsere Methode besteht aus 3 Schritten: Zunächst IgG aus Patientenplasma mit Sepharose gekoppelten anti-IgG-Antikörper aus Immunadsorption Spalten (PlasmaSelect, Teterow, Deutschland) isoliert. Zweitens adulten Kardiomyozyten durch Kollagenase Perfusion in einem Langendorff Perfusionsapparatur mit ap isoliertROTOKOLLS aus früheren Werken 10,11 modifiziert. Die erhaltenen Kardiomyozyten an Laminin beschichteten Deckgläsern gekammerten befestigt und gefärbt mit Fura-2, ein Calcium-selektiven Fluoreszenzfarbstoff, der leicht in die Zelle gebracht werden kann, um die intrazelluläre Calcium beobachten (Ca 2 +)-Inhalt 12. Im letzten Schritt wird die Wirkung der Patient auf dem IgG Zellverkürzung und Ca 2 + Transienten Feld stimuliert Kardiomyozyten wird online unter Verwendung eines kommerziellen Myozyten Calcium und Kontraktilität Überwachungssystem (IonOptix, Milton, MA, USA), die mit einer Standard-inversen fluoreszierenden überwachten Mikroskop.

Zwei Beispiele für die Messung der zellulären Inotropie im Feld stimuliert adulten Kardiomyozyten (Abbildung 2) unter Verwendung eines Ca 2 +-Myozyten und Kontraktilität Aufzeichnungssystem sind unten angegeben. Abbildung 3 gibt einen Eindruck einer Kontrollmessung, während in Figur 4 die Wirkung von Antikörpern kardiodepressiven eines Patienten mit DCM dargestellt. In beiden Beispielen ersten Zellverkürzung und Ca 2 +<...

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Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

Die vorgestellte Methode bietet eine Möglichkeit, funktionelle wirksame kardiotropen Autoantikörpern im Plasma von Patienten mit dilatativer Kardiomyopathie erfassen, unabhängig von dem spezifischen Antigen, durch Analyse der Auswirkung der isolierten Immunglobulin Patienten auf zelluläre Backfett und intrazellulärem Calcium in isolierter Transienten Rattenkardiomyozyten.

Die Messung der Antikörper Auswirkungen auf zelluläre Funktion von isolierten Kardiomyozyten

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Die Messung der cytosolischen Ca 2 + In Isolated Kontraktile Lymphgefäße

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Forschung

Immunologie und Infektion

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

Ein Mikroplatten Assay Chemical Auswirkungen auf die RBL-2H3 Mastzelldegranulation bewerten: Effekte von Triclosan ohne Verwendung eines organischen Lösungsmittels

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden für die quantitative Bestimmung von Antikörper-induzierte Komplementaktivierung auf Red Blood Cells

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Analyse der Auswirkungen von Stromazellen an der Rekrutierung von Leukozyten von Flow

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Durchflusszytometrische Analyse von partikelgebundenen Bet v 1 Allergens in PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf Biofilm-Entwicklung eines Modells mit Kammerdeckgläser

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Peptide Scanning-assisted Identification of a Monoclonal Antibody-recognized Linear B-cell Epitope

Peptid-Scanning-gestützte Identifizierung eines monoklonalen Antikörpers anerkannte Linear B-Zell-Epitop

The identification of an antigenic epitope by the immune system allows for the understanding of the protective mechanism of neutralizing antibodies that ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Intraperitoneale Glucose-Toleranz-Test, Messung der Lungenfunktion und Fixierung der Lunge, um die Auswirkungen von Übergewicht und beeinträchtigter Stoffwechsel auf pulmonale Ergebnisse studieren

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Bewertung der Antikörper-basierte Medikamente Auswirkungen auf murinen Knochenmark und peritonealen Makrophagen Aktivierung

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Eine Methode zur Messung der Speicheldrüse Funktion bei Mäusen

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...