Name: measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes
Uploaded: 2013-03-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes at JoVE.com

Эта работа была поддержана Sonderforschungsbereich Transregio 19 (SFB/TR19, C2) из ​​Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), Федерального министерства экономики и технологий проект ЗИМ-KF 2727801MD0 и Центра инновационных компетенций - гуморальный иммунный ответ сердечно-сосудистых заболеваний ( ZIK-поход, BMBF ФКЗ 03Z2CN12) Федерального министерства образования и научных исследований Германии. Жилищного строительства и экспериментах на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Общество лабораторных животных науки (Gesellschaft für Versuchstierkunde, GV-СОЛАС) и Федерации европейских лабораторных животных Science Association (FELASA).

1. IgG Изоляция от образцов пациентов <ol><li> Подготовить мини-иммуноадсорбции столбцов, заполняя 3 мл анти-IgG сефарозе в 2 мл ЭДТА плазма пациента в пустую колонку Econo Pac. IgG изоляции требуется по меньшей мере 2 мл плазмы пациента. </li><li> Поместите фильтр в верхней части анти-IgG сефарозе, разреза...

<ol>
	<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2011+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (4), e18 (2011).</li><li>Caforio, A. L., Vinci, A., Iliceto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-heart+autoantibodies+in+familial+dilated+cardiomyopathy.">Anti-heart autoantibodies in familial dilated cardiomyopathy.</a> Autoimmunity. 41 (6), 462 (2008).</li><li>Yoshikawa, T., Baba, A., Nagatomo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+mechanisms+underlying+dilated+cardiomyopathy.">Autoimmune mechanisms underlying dilated cardiomyopathy.</a> Circ. J. 73 (4), 602 (2009).</li><li>Felix, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+effects+of+immunoadsorption+and+subsequent+immunoglobulin+substitution+in+dilated+cardiomyopathy:+Three-month+results+from+a+randomized+study.">Hemodynamic effects of immunoadsorption and subsequent immunoglobulin substitution in dilated cardiomyopathy: Three-month results from a randomized study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 35 (6), 1590 (2000).</li><li>Staudt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+immunoglobulin+G3+subclass+in+dilated+cardiomyopathy:+results+from+protein+A+immunoadsorption.">Role of immunoglobulin G3 subclass in dilated cardiomyopathy: results from protein A immunoadsorption.</a> Am. Heart J. 150 (4), 729 (2005).</li><li>Nikolaev, V. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescence+method+for+the+rapid+detection+of+functional+beta1-adrenergic+receptor+autoantibodies+in+heart+failure.">A novel fluorescence method for the rapid detection of functional beta1-adrenergic receptor autoantibodies in heart failure.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 50 (5), 423 (2007).</li><li>Jahns, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+activating+human+beta1-adrenergic+receptors+are+associated+with+reduced+cardiac+function+in+chronic+heart+failure.">Autoantibodies activating human beta1-adrenergic receptors are associated with reduced cardiac function in chronic heart failure.</a> Circulation. 99 (5), 649 (1999).</li><li>Gocayne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+structure+of+rat+cardiac+beta-adrenergic+and+muscarinic+cholinergic+receptors+obtained+by+automated+DNA+sequence+analysis:+further+evidence+for+a+multigene+family.">Primary structure of rat cardiac beta-adrenergic and muscarinic cholinergic receptors obtained by automated DNA sequence analysis: further evidence for a multigene family.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 84 (23), 8296 (1987).</li><li>Jaenicke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+complete+sequence+of+the+human+beta-myosin+heavy+chain+gene+and+a+comparative+analysis+of+its+product.">The complete sequence of the human beta-myosin heavy chain gene and a comparative analysis of its product.</a> Genomics. 8 (2), 194 (1990).</li><li>Piper, H. M., Volz, A., Schwartz, P., Piper, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Culture Techniques in Heart and Vessel Research. , (1990).</li><li>Kubin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+endothelial+cells+remodel+cultured+adult+cardiomyocytes+and+increase+their+survival.">Microvascular endothelial cells remodel cultured adult cardiomyocytes and increase their survival.</a> Am. J. Physiol. 276 (6 Pt. 2), H2179 (1999).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> J. Biol. Chem. 260 (6), 3440 (1985).</li><li>Magnusson, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmunity+in+idiopathic+dilated+cardiomyopathy.+Characterization+of+antibodies+against+the+beta+1-adrenoceptor+with+positive+chronotropic+effect.">Autoimmunity in idiopathic dilated cardiomyopathy. Characterization of antibodies against the beta 1-adrenoceptor with positive chronotropic effect.</a> Circulation. 89 (6), 2760 (1994).</li><li>Wakefield, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+application+of+in+vitro+methods+to+safety+pharmacology.">The application of in vitro methods to safety pharmacology.</a> Fundam. Clin. Pharmacol. 16 (3), 209 (2002).</li><li>Kajzar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+physiological+conditions+for+cell+analyses:+forces+of+heart+muscle+cells+suspended+between+elastic+micropillars.">Toward physiological conditions for cell analyses: forces of heart muscle cells suspended between elastic micropillars.</a> Biophys. J. 94 (5), 1854 (2008).</li></ol>

Представленный метод предлагает подходящий способ обнаружения функционально эффективными сердечными аутоантитела у больных с DCM неясного происхождения. По сравнению с другими методами, например, выявление функциональных активные антитела против β1-адренорецепторов их влияние ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента / оборудования </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Immunosorba сохранение решение </td><td> Fresenius Medical Care </td><td> 903609211 </td><td></td></tr><tr><td> Коллагеназы типа 2 </td><td> Сотовые системы </td><td> LS004176 </td><td></td></tr><tr><td> BSA, жирных кислот </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A6003 </td><td></td></tr><tr><td> Ламинин </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L2020 </td><td></td></tr><tr><td> Фура-2 утра </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F0888 </td><td> 1 мг / мл в ДМСО </td></tr><tr><td> Econo Pac Хроматографические колонки </td><td> BioRad </td><td> 732-1010 </td><td></td></tr><tr><td> Spectra / Por Biotech эфиров целлюлозы диализа Membranэлектронной </td><td> Spectrumlabs </td><td> 131417 </td><td></td></tr><tr><td> 4 хорошо Chambered покровного стекла </td><td> Nunc </td><td> 155383 </td><td></td></tr><tr><td> Миоцитов кальция и сократимость записи </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> IonWizard 6,0 ​​программное обеспечение для анализа </td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes

Дилатационная кардиомиопатия (DCM) является одной из основных причин сердечной недостаточности у молодых взрослых 1. Хотя генетическая предрасположенность и экспозиции воздействию токсичных веществ известны причины этого заболевания примерно у одной трети пациентов, происхождение DCM остается во многом неясной. В Значительное число этих больных аутоантител против сердечных эпитопы были обнаружены и, как предполагается, играют ключевую роль в возникновении и прогрессировании заболевания 2,3. Важность сердечного аутоантител подчеркивается улучшение гемодинамики наблюдается в DCM пациентам после удаления аутоантител к иммуноадсорбции 3-5. Различные специфические антигены уже определены 2,3 и антитела против этих целей могут быть обнаружены с помощью иммуноанализа. Тем не менее, эти методы не могут различать стимулирование (и, следовательно, функционально эффективными) и блокирование аутоантител. Там растет Доказательство томсе, что это различие имеет решающее значение 6,7. Можно также предположить, что цели для ряда кардиотропной антитела еще неизвестные и поэтому не могут быть обнаружены с помощью иммуноанализа. Таким образом, мы создали метод для выявления функционально активных кардиотропной антител, независимо от их соответствующим антигеном. Фон для метода является высокая гомология обычно наблюдаются функциональные области сердечной белков между млекопитающими 8,9. Это означает, что сердечные антител, направленных против антигенов человека будет перекрестно реагируют с не-человека клетки-мишени, которая позволяет тестирование IgG у пациентов DCM на взрослых кардиомиоцитов крысы. Наш метод состоит из 3 шагов: во-первых, IgG изолирован от пациента плазмы с помощью сефарозы связанных анти-IgG антител, полученных из столбцов иммуноадсорбции (PlasmaSelect, Teterow, Германия). Во-вторых, взрослые кардиомиоциты выделяют коллагеназы перфузии в аппарат Лангендорфа перфузии Использование AProtocol изменения от предыдущих работах 10,11. Полученные кардиомиоциты, которые прикреплены к ламинин покрытием камерных coverglasses и окрашивали Фура-2, кальций-селективный флуоресцентный краситель, который может быть легко приведена в клетке для наблюдения внутриклеточного кальция (Ca 2 +) содержание 12. В последнем шаге, эффект от пациента IgG на сокращение клеток и Ca 2 + переходных полей стимулировали кардиомиоцитов контролируется в Интернете с помощью коммерческих миоцитов кальцием и сократительной системы мониторинга (IonOptix, Милтон, Массачусетс, США), подключенный к стандартному обратный флуоресцентный микроскопом.

Два примера для измерения сотовой инотропный эффект в области стимулировали взрослых кардиомиоцитов (рис. 2) с помощью миоцитов Са 2 + и сократительной системы записи приведены ниже. Рисунок 3 дает представление о контрольных измерений, а на рисунке 4 эфф...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes at JoVE.com

Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

Представленный метод предлагает способ определения функционального эффективной кардиотропной аутоантител в плазме пациентов с дилатационной кардиомиопатией, независимо от специфического антигена, анализируя влияние изолированного иммуноглобулина пациента на клеточном сокращения и внутриклеточного кальция в переходных изолированные кардиомиоцитов крысы.

Измерение антител воздействие на клеточные функции кардиомиоцитов изолированного

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Измерение цитозольного Са 2 + В изолированном Сократительная лимфатических

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

Микропланшет анализа для оценки химического воздействия на RBL-2H3 дегрануляцию тучных клеток: Влияние триклозан без использования органического растворителя

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Методы количественного определения антител-индуцированной активации комплемента по ЭРИТРОЦИТОВ

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Анализ влияния стромальных клеток на вербовкой лейкоцитов из потока

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Поток Cytometric Анализ связанного с твердыми частицами Bet v 1 аллергена в PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Визуализация Эффекты мокроте на биопленки развития с использованием модели Chambered покровного стекла

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Peptide Scanning-assisted Identification of a Monoclonal Antibody-recognized Linear B-cell Epitope

Пептид Сканирование при содействии идентификации моноклональных антител узнаваемым Линейная B-клеточный эпитоп

The identification of an antigenic epitope by the immune system allows for the understanding of the protective mechanism of neutralizing antibodies that ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Тест на переносимость глюкозы внутрибрюшинного, измерение функции легких и фиксации легких, для изучения последствий ожирения и нарушением метаболизма на легочных исходов

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Оценки воздействия наркотиков на основе антител на мышиных костного мозга и перитонеальных макрофагов активации

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Метод для измерения функции слюнной железы у мышей

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...