Name: a practical and novel method to extract genomic dna from blood collection kits for plasma protein preservation
Uploaded: 2013-05-18T14:00:00
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1. Probenentnahme <ol><li> Sammeln von Blutproben von Personen mit entsprechenden Einwilligung. Für jeden einzelnen, ziehen 4 bis 5 ml Blut in ein Röhrchen P100 (BD Diagnostics, Franklin Lake, NY, USA). Zu Vergleichszwecken wurden gleichzeitig sammeln Blut in einem EDTA-Röhrchen. </li><li> Die BD P100 Röhrchen enthalten 15,8 ml sprühgetrockneten K2EDTA und eine lyophilisierte proprietären breites Spektrum Cocktail von Proteaseinhibitoren zur Gerinnung zu verhindern und zur Stabilisierung der Plasmaproteine. Sie ...

<ol>
	<li>Yi, J., Kim, C., Gelfand, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+intrinsic+proteolytic+activities+moderates+preanalytical+variability+and+instability+of+human+plasma.">Inhibition of intrinsic proteolytic activities moderates preanalytical variability and instability of human plasma.</a> Journal of Proteome Research. 6, 1768-1781 (2007).</li><li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood.">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clinical Chemistry. 42, 647-648 (1996).</li><li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing.">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clinical Chemistry. 44, 1748-1750 (1998).</li><li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood.">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Molecular Biotechnology. 46, 258-264 (2010).</li><li>Cortes, A., Brown, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promise+and+pitfalls+of+the+Immunochip.">Promise and pitfalls of the Immunochip.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 13, 101 (2011).</li><li>Basuni, A. A., Butterworth, L. A., Cooksley, G., Locarnini, S., Carman, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+extraction+method+from+blood+clots+for+studies+requiring+both+host+and+viral+DNA.">An efficient extraction method from blood clots for studies requiring both host and viral DNA.</a> Journal of Viral Hepatitis. 7, 241-243 (2000).</li><li>Kanai, N., Fujii, T., Saito, K., Tokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+simple+method+for+preparation+of+genomic+DNA+from+easily+obtainable+clotted+blood.">Rapid and simple method for preparation of genomic DNA from easily obtainable clotted blood.</a> Journal of Clinical Pathology. 47, 1043-1044 (1994).</li><li>Adkins, K. K., Strom, D. A., Jacobson, T. E., Seemann, C. R., O'Brien, D. P., Heath, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+genomic+DNA+purified+from+clotted+blood+samples+for+single+nucleotide+polymorphism+genotyping.">Utilizing genomic DNA purified from clotted blood samples for single nucleotide polymorphism genotyping.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 126, 266-270 (2002).</li><li>Siafakas, N., Burnett, L., Bennetts, B., Proos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonenzymatic+extraction+of+DNA+from+blood+collected+into+serum+separator+tubes.">Nonenzymatic extraction of DNA from blood collected into serum separator tubes.</a> Clinical Chemistry. 41, 1045-1046 (1995).</li><li>Everson, R. B., Mass, M. J., Gallagher, J. E., Musser, C., Dalzell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+DNA+from+cryopreserved+clotted+human+blood.">Extraction of DNA from cryopreserved clotted human blood.</a> BioTechniques. 15, 18-20 (1993).</li><li>Se Fum Wong, S., Kuei, J. J., Prasad, N., Agonafer, E., Mendoza, G. A., Pemberton, T. J., Patel, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+DNA+isolation+from+clotted+blood+extricated+rapidly+from+serum+separator+tubes.">A simple method for DNA isolation from clotted blood extricated rapidly from serum separator tubes.</a> Clin. Chem. 53, 522-524 (2007).</li><li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood.">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clin. Chem. 42, 647-648 (1996).</li><li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing.">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clin. Chem. 44, 1748-1750 (1998).</li><li>Matheson, L. A., Duong, T. T., Rosenberg, A. M., Yeung, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sample+collection+and+storage+methods+for+multicenter+immunologic+research+in+children.">Assessment of sample collection and storage methods for multicenter immunologic research in children.</a> Journal of Immunological Methods. 339, 82-89 (2008).</li><li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood.">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Mol. Biotechnol. 46, 258-264 (2010).</li><li>Polychronakos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+points+in+mapping+autoimmunity.">Fine points in mapping autoimmunity.</a> Nature. 43, 1173-1174 (2011).</li><li>Cooper, J. D., Simmonds, M. J., Walker, N. M., Burren, O., Brand, O. J., Guo, H., Wallace, C., Stevens, H., Coleman, G., Franklyn, J. A., Todd, J. A., Gough, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seven+newly+identified+loci+for+autoimmune+thyroid+disease.">Seven newly identified loci for autoimmune thyroid disease.</a> Human Molecular Genetics. , (2012).</li></ol>

Viele menschliche Erkrankungen genetische Ursachen haben und die Erforschung der genetischen Grundlagen von Erkrankungen des Menschen verlangt eine zunehmende hochwertige DNA. Die häufigste Quelle von DNA in genetischen Studien verwendet wird Vollblut Antikoagulation. Da die meisten klinischen Labors biochemische, serologische und viraler Tests durchzuführen, wie in einem ersten Schritt phänotypische Untersuchung Ergebnis wird das Blut oft in einem Plasma-Röhrchen gesammelt. Nach der Entnahme des Plasmas wird der ve...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent/equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BD P100 tubes</td>
 <td>BD Diagnostics</td>
 <td>366448</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA tubes</td>
 <td>BD Diagnostics</td>
 <td>367863</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sucrose</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>S9378</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Paper clip</td>
 <td>Office product</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15 ml tube</td>
 <td>Corning</td>
 <td>430052</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Red blood cells (RBC)</td>
 <td>Qiagen</td>
 <td>158389 (kit)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>SH30256.01</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BioSprint 96 DNA Blood Kit (48) </td>
 <td>Qiagen</td>
 <td>940054</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.7 ml microtubes</td>
 <td>Axygen</td>
 <td>MCT-175-C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Human Immuno DNA Analysis BeadChip Kit</td>
 <td>Illumina</td>
 <td>WG-352-1001</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bead array reader</td>
 <td>Illumina</td>
 <td>NA</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>GenomeStudio Software</td>
 <td>Illumina</td>
 <td>N/A</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

a practical and novel method to extract genomic dna from blood collection kits for plasma protein preservation

Labortests können auf zellulärer oder Fluidanteile des Blutes erfolgen. Die Verwendung unterschiedlicher Blutsammelröhrchen bestimmt den Anteil des Blutes, das analysiert werden kann (Vollblut, Plasma oder Serum). Laboratories in das Studium der genetischen Grundlagen menschlicher Erkrankungen beteiligt vertrauen auf antikoaguliertes Vollblut in EDTA-haltige vacutainer als Quelle der DNA für genetische / genomische Analyse gesammelt. Da die meisten klinischen Laboratorien, biochemische und serologische viraler Tests in einem ersten Schritt in phänotypischen Ergebnis Untersuchung durchzuführen, wird auch in Antikoagulans Heparin-haltigen Rohr (Plasmarohr) gesammelt. Daher, wenn die DNA-und Plasma für simultane und parallele Analysen sowohl Genomik und Proteomik-Daten benötigt werden, ist es üblich, Blut sowohl EDTA und Heparin Röhrchen zu sammeln. Wenn Blut in einem Röhrchen gesammelt werden konnte und als Quelle für Plasma und DNA, würde das Verfahren als eine Weiterentwicklung bestehender meth werdenODS. Die Verwendung des verdichteten Blut nach Plasmaextraktion stellt eine alternative Quelle für genomische DNA und damit Minimierung der Menge von Blutproben verarbeitet und die Verringerung der Anzahl von Proben von jedem Patienten erforderlich. Dies würde letztendlich Zeit und Ressourcen sparen. Der BD P100 Blutentnahme für Plasmaprotein Erhaltung wurden als ein verbessertes Verfahren gegenüber früheren Plasma oder Serum-Röhrchen 1 erstellt haben, um den Proteingehalt des Blutes zu stabilisieren, was eine bessere Protein Biomarkern und Proteomik Experimente aus menschlichem Blut. Die BD P100 Röhrchen enthalten 15,8 ml sprühgetrockneten K2EDTA und eine lyophilisierte proprietären breites Spektrum Cocktail von Protease-Inhibitoren zur Verhinderung der Koagulation und Stabilisierung der Plasmaproteine. Sie umfassen auch eine mechanische Trennvorrichtung, die eine physische Barriere zwischen Plasma und Zellpellets nach Zentrifugation stellt. Nur wenige Methoden wurden entwickelt, um DNA aus geronnenes Blut sa extrahierenmples in alten Plasmaröhrchen 2-4 gesammelt. Herausforderungen von diesen Methoden wurden hauptsächlich mit der Art der Separator im Inneren der Rohre (Gel-Separator) zugeordnet ist und inklusive Schwierigkeiten bei der Gewinnung des geronnenen Blut, die Unannehmlichkeiten der Fragmentierung oder Dispergieren des Gerinnsels und Behinderung des Gerinnsels durch Extraktion des Trenngels. Wir präsentieren die erste Methode, die extrahiert und reinigt genomischer DNA aus Blut in den neuen BD P100 Rohre gezogen. Wir vergleichen die Qualität der DNA-Probe von P100 Röhren dass von EDTA. Unser Ansatz ist einfach und effizient. Es handelt sich um vier große Schritte wie folgt: 1) die Verwendung eines Plasmas BD P100 (BD Diagnostics, Sparks, MD, USA) Rohr mit mechanischen Abscheider für die Blutentnahme, 2) die Entfernung des mechanischen Abscheider mit einer Kombination aus Saccharose und eine sterile Büroklammer Metallhakgen, 3) die Abtrennung des buffy coat Schicht, die die weißen Zellen und 4) die Isolierung der genomischen DNA aus derBuffy-Coat mit einem normalen kommerziellen DNA-Extraktions-Kits oder eine ähnliche Standard-Protokoll.

DNA Qualitätsbewertung und Konzentrationsmessung Die Ausbeuten an P100_DNAs waren signifikant niedriger als die der EDTA_DNAs (Tabellen 1 und 2). Die DNA-Reinheit durch seine 260/280 Verhältnis Wert dargestellt ist ähnlich für beide P100_DNA und EDTA_DNA Probe-Set (Tabellen 1 und 2). Die Qualität der DNA ist ziemlich einheitlich in jedem Satz der Probe, obwohl einige Verschlechterung der EDTA_DNA Proben gesehen, wie durch ...

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A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

Wir beschreiben eine neue Methode zur Isolierung von genomischer DNA aus Vollblut für Plasma / Serologie gesammelt. Nach Plasma-Sammlung wird die verdichtete Blut in der Regel verworfen. Unsere neue Methode stellt eine signifikante Verbesserung gegenüber bestehenden Verfahren und macht DNA und Plasma von einem einzigen Sammlung, ohne Anforderung zusätzlicher Blut.

Eine praktische und neuartige Methode, um genomische DNA aus Blutentnahme Kits Auszug für Plasma Protein Preservation

Laboratory tests can be done on the cellular or  fluid portions of the blood. The use of different blood collection tubes  determines the portion of the ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Forschung

Biologie

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