Name: an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium
Uploaded: 2012-10-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للصحة العقلية، والمؤسسة الوطنية للعلوم. شكر خاص لأعضاء المختبر لإجراء مناقشات SIVE كثيرة مفيدة والنقد البناء، وأوليفييه لتربية الأسماك Paugois الخبراء.

1. التحضير للحقن مكروي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإبر حقن مكروي عن طريق سحب الأنابيب الشعرية باستخدام إبرة سوتر مجتذب الصكوك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل إبرة حقن مكروي مع صبغة الفلورسنت (FITC-دكستران). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحم?...

     

<ol>
	<li>Harrington, M. J., Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+neurulation:+first+impressions+do+not+count.">Comparative analysis of neurulation: first impressions do not count.</a> Mol. Reprod. Dev. 76, 954-965 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+vertebrate+neurulation+and+a+re-evaluation+of+teleost+neural+tube+formation.">Strategies of vertebrate neurulation and a re-evaluation of teleost neural tube formation.</a> Mech. Dev. 121, 1189-1197 (2004).</li><li>Salehi, Z., Mashayekhi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+survival+in+the+developing+chick+cerebral+cortex:+an+in+vivo+study.">The role of cerebrospinal fluid on neural cell survival in the developing chick cerebral cortex: an in vivo study.</a> Eur. J. Neurol. 13, 760-764 (2006).</li><li>Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 27, 733-740 (2009).</li><li>Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69, 893-905 (2011).</li><li>Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> Anat. Rec. A. Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 284, 475-484 (2005).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Totally+tubular:+the+mystery+behind+function+and+origin+of+the+brain+ventricular+system.">Totally tubular: the mystery behind function and origin of the brain ventricular system.</a> Bioessays. 31, 446-458 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+neuroepithelial+barrier+by+Claudin5a+is+essential+for+zebrafish+brain+ventricular+lumen+expansion.">Establishment of a neuroepithelial barrier by Claudin5a is essential for zebrafish brain ventricular lumen expansion.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1425-1430 (2010).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+brain+ventricle+injection.">Zebrafish brain ventricle injection.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Information+Network+(ZFIN):+a+resource+for+genetic,+genomic+and+developmental+research.">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Research. 29, 87-90 (2001).</li></ol>

علينا أن نظهر القدرة على تحديد النفاذية للدماغ الزرد الجنينية المعيشة كما هو محدد لصباغة حقن من وزن جزيئي معين. ملاحظتنا أن الظهارة العصبية الجنينية الزرد هو نفاذية تفاضلي لصبغات مختلفة من الأوزان الجزيئية تشير إلى أن الصبغة تتحرك عبر نفاذية paracellular. ومع ذلك، لا يمكن...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> ديكستران، فلوريسئين، أنيوني، ليسين قابل للتثبيت </td><td> إينفيتروجن </td><td> D7136، D7137، D1822، D1820، D1845 </td></tr><tr><td> Tricaine مسحوق </td><td> سيجما </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> أنابيب الشعرية </td><td> شركة FHC </td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium

يتم حفظها في النظام البطيني الدماغ بين الفقاريات وتتألف من سلسلة من تجاويف الدماغ مترابطة تسمى البطينين، والتي تشكل خلال المراحل المبكرة من نمو الدماغ ويتم الاحتفاظ طوال حياة الحيوان. تم العثور على نظام البطين الدماغ في الفقاريات، والبطينين تطوير بعد تشكيل الأنبوب العصبي، وعندما يملأ التجويف المركزي مع السائل النخاعي (CSF) 1،2. CSF هو السائل الغنية بالبروتين التي لا غنى عنها لنمو الدماغ الطبيعي وظيفة 3-6. في الزرد والدماغ التضخم البطين يبدأ في حوالي 18 ساعة الإخصاب آخر (HPF)، بعد إغلاق الأنبوب العصبي. وترتبط عمليات متعددة مع تشكيل البطين الدماغ، بما في ذلك تشكيل الظهارة العصبية، مشددة تشكيل تقاطع الذي ينظم نفاذية والإنتاج CSF. أظهرت لنا أن نا، مطلوب K-أتباز للتضخم البطين الدماغ، مما يؤثر كل هذه العمليةوفاق 7،8، في حين claudin 5A هو ضروري لتشكيل تقاطع ضيق 9. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت لنا أن &quot;الاسترخاء&quot; من الظهارة العصبية الجنينية، عن طريق تثبيط الميوسين، ويرتبط مع التضخم البطين الدماغ. للتحقيق في تنظيم النفاذية خلال الدماغ الزرد التضخم البطين، وضعنا الاحتفاظ صبغ مقايسة البطين. هذا الأسلوب يستخدم حقن الدماغ البطين في جنين الزرد المعيشة، وهي تقنية طورت من قبل في مختبرنا 10، لتسمية fluorescently السائل المخي الشوكي. وتصوير الأجنة ثم مع مرور الوقت بينما يتحرك صبغة الفلورسنت من خلال البطينين الدماغ والظهارة العصبية. المسافة الجبهة صبغ يتحرك بعيدا عن الجانب القاعدية (غير اللمعية) من الظهارة العصبية مع مرور الوقت هو كميا وهي مقياس لنفاذية عصبية ظهارية (الشكل 1). نلاحظ أن الأصباغ 70 كيلو دالتون وأصغر سوف تتحرك من خلال الظهارة العصبية ويمكن كشفهاد خارج الدماغ الزرد الجنينية في 24 HPF (الشكل 2). ويمكن استخدام هذا الاختبار لتحليل الصبغة الاحتفاظ نفاذية عصبية ظهارية في مجموعة متنوعة من الخلفيات وراثية مختلفة، في أوقات مختلفة خلال التنمية، وبعد الاضطرابات البيئية. قد يكون من المفيد أيضا في دراسة تراكم المرضية من CSF. وعموما، هذا الأسلوب يسمح للمحققين تحليل دور وتنظيم نفاذية خلال تطوير والمرض.

Watch this Scientific Journal Video about An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium at JoVE.com

An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium

وصفنا يعيش القياس الكمي للحيوان كامل النفاذية للدماغ الزرد الجنينية. هذه التقنية يحلل القدرة على الاحتفاظ السائل المخي الشوكي والجزيئات ذات أوزان جزيئية مختلفة داخل تجويف الأنبوب العصبي والكمي حركة للخروج من البطينين. هذه الطريقة مفيدة لتحديد الاختلافات في نفاذية الظهارية والنضج خلال تطوير والمرض.

مقايسة لنفاذية الظهارة العصبية الجنينية واسماك الزرد

The brain ventricular system is conserved among vertebrates and is composed of a series of interconnected cavities called brain ventricles, which form ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

عالية الدقة التصوير لايف من سلوك خلية في الظهارة العصبية النامية

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

دليل الصرف من البطينين الدماغ الجنينية اسماك الزرد

Cerebrospinal fluid  (CSF) is a protein rich fluid contained within the brain ventricles. It is  present during early vertebrate embryonic development and ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

فيفو السابقين التصوير لايف من الانقسامات الخلوية واحدة في الظهارة العصبية ماوس

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا الجنينية الزرد ماوتنر

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

مثقب تسجيل التصحيح، المشبك من الماوس العصبونات الحسية الشمية في الظهارة العصبية السليمة: التحليل الوظيفي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها إبداء الرائحة مستقبلات

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

الطريقة الكهربية لالردود تسجيل بين الخلايا الجهد ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء وInterneurons إلى النور المحفزات<em&gt; في فيفو</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...