Name: an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium
Uploaded: 2012-10-24T12:00:00
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この作品は、国立精神衛生研究所、国立科学財団によってサポートされていました。専門家の魚の飼育のために多くの有益な議論や建設的な批判のためのSive研究室のメンバーに、オリヴィエPaugois氏に感謝します。

1。マイクロインジェクションのための準備<ol><li>サッター楽器ニードルプラーを使用してキャピラリーチューブを引いて、マイクロインジェクション針を準備します。 </li><li>蛍光色素（FITC-デキストラン）とマイクロインジェクションニードルをロードします。 </li><li>マイクロマニピュレータおよびマイクロインジェクション装​​置に針を取り付けます。 </li><li>慎重に幅約2μmに鉗子を?...

     

<ol>
	<li>Harrington, M. J., Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+neurulation:+first+impressions+do+not+count.">Comparative analysis of neurulation: first impressions do not count.</a> Mol. Reprod. Dev. 76, 954-965 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+vertebrate+neurulation+and+a+re-evaluation+of+teleost+neural+tube+formation.">Strategies of vertebrate neurulation and a re-evaluation of teleost neural tube formation.</a> Mech. Dev. 121, 1189-1197 (2004).</li><li>Salehi, Z., Mashayekhi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+survival+in+the+developing+chick+cerebral+cortex:+an+in+vivo+study.">The role of cerebrospinal fluid on neural cell survival in the developing chick cerebral cortex: an in vivo study.</a> Eur. J. Neurol. 13, 760-764 (2006).</li><li>Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 27, 733-740 (2009).</li><li>Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69, 893-905 (2011).</li><li>Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> Anat. Rec. A. Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 284, 475-484 (2005).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Totally+tubular:+the+mystery+behind+function+and+origin+of+the+brain+ventricular+system.">Totally tubular: the mystery behind function and origin of the brain ventricular system.</a> Bioessays. 31, 446-458 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+neuroepithelial+barrier+by+Claudin5a+is+essential+for+zebrafish+brain+ventricular+lumen+expansion.">Establishment of a neuroepithelial barrier by Claudin5a is essential for zebrafish brain ventricular lumen expansion.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1425-1430 (2010).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+brain+ventricle+injection.">Zebrafish brain ventricle injection.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Information+Network+(ZFIN):+a+resource+for+genetic,+genomic+and+developmental+research.">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Research. 29, 87-90 (2001).</li></ol>

私たちは、与えられた分子量が注入された色素に決定されるように生きている胚ゼブラフィッシュの脳の透過性を定量化する能力を示す。ゼブラフィッシュ胚性神経上皮は分子量の異なる染料の差動透過性であるという我々の観察は、色素が傍細胞透過性を介して移動していることを示唆している。しかし、我々は、観測された透過性に経貢献の可能性を排除することはできません。この手?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>デキストラン、フルオレセイン、アニオン、リジン修正可能</td><td>インビトロジェン</td><td> D7136、D7137、D1822、D1820、D1845 </td></tr><tr><td> Tricaine粉</td><td>シグマ</td><td> A5040 </td></tr><tr><td>毛細管</td><td> FHC社</td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium

脳室系は、脊椎動物間で保存されていると脳の発達の初期段階で形成し、その動物の生涯にわたって維持されている脳室と呼ばれる相互接続された空洞のシリーズで構成されています。脳室系は、脊椎動物で発見され、心室は中央の管腔は脳脊髄液（CSF）の1,2を満たすと、神経管形成後に開発されています。 CSFは、正常な脳の発達と機能3-6必須であるタンパク質に富む流体である。 神経管が閉じられた後、ゼブラフィッシュでは、脳室のインフレ率は、約18時間後に受精（HPF）で始まる。複数のプロセスを透磁率とCSF産生を調節する神経上皮、タイトジャンクショ​​ン形成の形成を含む脳室形成、関連付けられています。我々は、Na、K-ATPaseのこれらのすべてのプロセスに影響を与える、脳室のインフレのために必要であることを示したクロー5aはタイトジャンクションの形成9のために必要である間ES 7,8、。さらに、当社は、ミオシンの阻害を介して、胚性神経上皮のその &quot;緩和&quot;を示した脳室のインフレ率に関連付けられています。 ゼブラフィッシュの脳室の膨張時に透過性の調節を調べるために、我々は、心室色素保持アッセイを開発した。この方法では、蛍光脳脊髄液を標識するために、生きているゼブラフィッシュ胚、以前に我々の研究室で開発された10の技術で脳室注入を使用しています。胚は、その後、脳室と神経上皮を通して蛍光染料が移動すると時間をかけて結像される。染料前面が離れて時間をかけて神経上皮の基底（非管腔）側から移動する距離を定量化して、神経上皮透過性（ 図1）の尺度である。我々は染料70 kDaと小さいが、神経上皮を通って移動することを観察し、detecteすることができます24 HPF（ 図2）で、ゼブラフィッシュ胚の脳の外側D。 この色素保持アッセイを開発中に、異なる時間に、異なる遺伝的背景の様々な神経上皮透過性を分析するために使用され、環境変動の後にすることができます。また、CSFの病的集積を検討する上で役に立つかもしれません。全体的に、この手法は、研究者が開発と疾患の間に透磁率の役割と規制を分析することができます。

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An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium

我々は、ゼブラフィッシュ胚の脳の透磁率のためのライブ全体の動物定量的な測定について説明します。技術は神経管管腔内に異なる分子量の脳脊髄液や分子を保持する能力を分析し、心室の彼らの動きを定量化します。この方法では、開発や病気時の上皮透過性と成熟の違いを判別するのに役立ちます。

ゼブラフィッシュ胚性神経上皮の透水性に関するアッセイ

The brain ventricular system is conserved among vertebrates and is composed of a series of interconnected cavities called brain ventricles, which form ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを使用してマウス胎児神経幹細胞培養の確立

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

神経芽細胞アッセイ：フローサイトメトリーを用いて神経幹細胞の子孫を差別から神経前駆細胞の生成と濃縮のためのアッセイ

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

開発神​​経上皮における細胞挙動の高解像度のライブイメージング

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

ゼブラフィッシュ胚の脳室の手動排水

Cerebrospinal fluid  (CSF) is a protein rich fluid contained within the brain ventricles. It is  present during early vertebrate embryonic development and ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

ex vivoでマウス神経上皮における単一細胞分裂のライブイメージング

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

胚ゼブラフィッシュマウスナー細胞からパッチクランプ記録

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

発生中のマウス胚性皮質における有糸分裂のライブイメージング

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

無傷の神経上皮におけるマウス嗅細胞の穿孔パッチクランプ記録：同定された嗅覚受容体を発現するニューロンの機能解析

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

の記録細胞内の電圧応答のための電気生理学的手法<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;光刺激に感光体と介在ニューロン<em&gt;インビボ</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...