Name: chemoselective modification of viral surfaces via bioorthogonal click chemistry
Uploaded: 2012-08-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry at JoVE.com

نود أن نعترف جبهة الخلاص الوطني للتمويل (CBET-0846259).

الرجوع إلى الجدول رقم 1 لإعداد جميع المخازن، ووسائل الإعلام والحلول المشار إليها في هذا البروتوكول. 1. إنتاج آها المسمى اتش <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد زراعة الأنسجة 11 100 ملم أطباق من خلايا الكلى ...

<ol>
	<li>Banerjee, P. S., Ostapchuk, P., Hearing, P., Carrico, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoselective+Attachment+of+Small+Molecule+Effector+Functionality+to+Human+Adenoviruses+Facilitates+Gene+Delivery+to+Cancer+Cells.">Chemoselective Attachment of Small Molecule Effector Functionality to Human Adenoviruses Facilitates Gene Delivery to Cancer Cells.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13615-13617 (2010).</li><li>Banerjee, P. S., Carrico, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoselective+Modification+of+Viral+Proteins+Bearing+Metabolically+Introduced+"Clickable"+Amino+Acids+and+Sugars.">Chemoselective Modification of Viral Proteins Bearing Metabolically Introduced "Clickable" Amino Acids and Sugars.</a> Methods Mol. Biol. 751, 55-66 (2011).</li><li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy.">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).</li><li>Magnusson, M. K., Hong, S. S., Henning, P., Boulanger, P., Lindholm, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Retargeting+of+Adenovirus+Vectors:+Functionality+of+Targeting+Ligands+and+Their+Influence+on+Virus+Viability.">Genetic Retargeting of Adenovirus Vectors: Functionality of Targeting Ligands and Their Influence on Virus Viability.</a> J. Gene Med. 4, 356-370 (2002).</li><li>Henning, P., Lundgren, E., Carlsson, M., Frykholm, K., Johannisson, J., Magnusson, M. K., TÃ¥ng, E., Franqueville, L., Hong, S. S., Lindholm, L., Boulanger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+Type+5+Fiber+Knob+Domain+has+a+Critical+Role+in+Fiber+Protein+Synthesis+and+Encapsidation.">Adenovirus Type 5 Fiber Knob Domain has a Critical Role in Fiber Protein Synthesis and Encapsidation.</a> J. Gen. Virol. 87, 3151-3160 (2006).</li><li>Zhang, M. M., Tsou, L. K., Charron, G., Raghavan, A. S., Hang, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tandem+fluorescence+imaging+of+dynamic+S-acylation+and+protein+turnover.">Tandem fluorescence imaging of dynamic S-acylation and protein turnover.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 8627-8632 (2010).</li><li>Banerjee, P. S., Ostapchuk, P., Hearing, P., Carrico, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unnatural+amino+acid+incorporation+onto+adenoviral+(Ad)+coat+proteins+facilitates+chemoselective+modification+and+retargeting+of+Ad+type+5+vectors.">Unnatural amino acid incorporation onto adenoviral (Ad) coat proteins facilitates chemoselective modification and retargeting of Ad type 5 vectors.</a> J. Virol. 85, 7546-7554 (2011).</li><li>Hong, V., Presolski, S. I., Ma, C., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+and+Optimization+of+Copper-Catalyzed+Azide-Alkyne+Cycloaddition+for+Bioconjugation.">Analysis and Optimization of Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition for Bioconjugation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 48, 9879-9883 (2009).</li><li>Best, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Click+Chemistry+and+Bioorthogonal+Reactions:+Unprecedented+Selectivity+in+the+Labeling+of+Biological+Molecules.">Click Chemistry and Bioorthogonal Reactions: Unprecedented Selectivity in the Labeling of Biological Molecules.</a> Biochemistry. 48, 6571-6584 (2009).</li><li>Agard, N. J., Prescher, J. A., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Strain-Promoted+[3+++2]+Azide-Alkyne+Cycloaddition+for+Covalent+Modification+of+Biomolecules+in+Living+Systems.">A Strain-Promoted [3 + 2] Azide-Alkyne Cycloaddition for Covalent Modification of Biomolecules in Living Systems.</a> J. Am. Chem. Soc. 46, 15046-15047 (2004).</li><li>Dommerholt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Readily+Accessible+Bicyclononynes+for+Bioorthogonal+Labeling+and+Three-Dimensional+Imaging+of+Living+Cells.">Readily Accessible Bicyclononynes for Bioorthogonal Labeling and Three-Dimensional Imaging of Living Cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49, 9422-9425 (2010).</li><li>Link, A. J., Vink, M. K. S., Tirrell, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+the+functionalizable+methionine+surrogate+azidohomoalanine+via+copper-catalyzed+diazotransfer.">Preparation of the functionalizable methionine surrogate azidohomoalanine via copper-catalyzed diazotransfer.</a> Nat. Protoc. 2, 1879-1883 (2007).</li></ol>

تطور ردود الفعل فوق chemoselective وbioorthogonal، بما فيها تلك التي من أزيدات، هو منطقة التطور السريع للبحوث، وبعد ذلك هناك عدد متزايد من ردود الفعل هذه للاختيار من بينها لتقديم الطلبات bioconjugation. قيدت نحن في نطاق هذا البروتوكول لتشمل اثنين فقط من الأساليب التي تم اختيارها بسبب فا...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> نوع اتش 5 (Ad5) تحتوي على التحوير GFP </td><td> BCBC </td><td> 391 </td></tr><tr><td> الكلى الجنينية البشرية (كلوة الجنين البشري 293) الخلايا </td><td> ATCC </td><td> CRL-1573 </td></tr><tr><td> Dulbecco ومعدلة النسر متوسطة (DMEM)، ارتفاع نسبة الجلوكوز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11965-092 </td></tr><tr><td> Dulbecco ومعدلة النسر متوسطة، لا الميثيونين، لا سيستين (DMEM و الأرصاد الجوية /-السيستئين)، ارتفاع نسبة الجلوكوز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 21013-024 </td></tr><tr><td> الأبقار العجل المصل </td><td> إينفيتروجن </td><td> 16170-078 </td></tr><tr><td> بنسلين - الستربتوميسين 100 × الحل (القلم بكتيريا) </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> 0.5٪ التربسين-EDTA (10 ×) </td><td&gt; إينفيتروجن </td><td> 15400-054 </td></tr><tr><td> 100 خلية ثقافة صحن مم، الأنسجة ثقافة البوليسترين المعالجة </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 353003 </td></tr><tr><td> خلية ثقافة CO 2 حاضنة </td><td></td><td></td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> معقم مرشح محقنة (0.2 ميكرون، خلات السليلوز) </td><td> VWR </td><td> 28145-477 (NA)، 514-0061 (أوروبا) </td></tr><tr><td> أفانتي JE الطرد المركزي </td><td> بيكمان كولتر </td><td> 369001 </td></tr><tr><td> مخروطي أنابيب (50 مل، معقمة) </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352098 </td></tr><tr><td> أنبوب، Thinwall، فائقة الوضوح، 13.2 مل، 14 × 89 ملم </td><td> بيكمان </td><td> 344059 </td></tr><tr><td> منبذة فائقة مجهزة 41 SW SW و 60 Rotor </td><td> بيكمان </td><td></td></tr><tr><td> إيبندورف بيوبور الآمن للقفل أنابيب، 1.5 مل </td><td> إيبندورف </td><td> 0030 121.589 </td></tr><tr><td> منبذة 5418 </td><td> إيبندورف </td><td> 5418 </td></tr><tr><td> Centri سبتمبر تدور الترشيح أعمدة هلام </td><td> فصل برينستون </td><td> CS-901 </td></tr><tr><td> إبرة معقمة، قياس 18 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> النيتروجين قفاز كيس (إذا CuAAC امؤكسج التي يتعين القيام بها) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> قارورة ديوار </td><td></td><td></td></tr><tr><td> النيتروجين السائل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الكهربائي للخلية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> فلوري هلام الماسح الضوئي </td><td></td><td></td></tr><tr><td> استعداد جل تريس، حمض الهيدروكلوريك جل </td><td> الحيوي راد </td><td> 161-1105 </td></tr><tr><td> L-Azidohomoalanine </td><td> AnaSpec </td><td> 63669 </td></tr><tr><td> جينا العلوم البيولوجية </td><td> CLK-AA005 </td><td></td></tr><tr><td> Peracetylated N-azidoacetylgalactosamine (ميلان 4 GalNAz) </td><td> إينفيتروجن </td><td> C33365 </td></tr><tr><td> الحرارية العلمية </td><td> 88905 </td><td></td></tr><tr><td> سيغما الدريخ </td><td> A7480 </td><td></td></tr><tr><td> Bathophenanthroline disulfonic حامض (BDA) ملح الصوديوم </td><td> النائب Biomedicals </td><td> 0215011201 </td></tr><tr><td> ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الميثانول </td><td></td><td></td></tr><tr><td> تريس قاعدة (تريس (hydroxymethyl) aminomethane) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> فوسفات الصوديوم (نا2 هبو 4) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1M حمض الهيدروكلوريك </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الغليسيرول </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ألبومين المصل البقري </td><td></td><td></td></tr><tr><td> L-السيستين </td><td></td><td></td></tr><tr><td> L-ميثيونين </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SDS (سلفات الصوديوم دوديسيل) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2-المركابتويثانول </td><td></td><td></td></tr><tr><td> جليكاين </td><td></td><td></td></tr><tr><td> زرقة البروموفينول </td><td></td><td></td></tr><tr><td> السيزيوم كلوريد (CSCL) </td><td></td><td> &amp; Nباهوجان ساماج؛ </td></tr><tr><td> النحاس (I) بروميد (CuBr) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الكالسيوم (CaCl 2) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم (بوكل) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كلوريد المغنيسيوم (MgCl 2) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> آلكاين مسبار ل* CuAAC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> طمرة آلكاين </td><td> إينفيتروجن </td><td> T10183 </td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> توتر آلكاين مسبار ل* SPAAC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> طمرة ديبو آلكاين </td><td> إينفيتروجن </td><td> C10410 </td></tr></tbody></table> * شركات بارزة من الكواشف الكيمياء نقرة ومجموعات تشمل إينفيتروجن، العلوم البيولوجية جينا، شركاء بري، سيغما الدريخ، بحث غلين، انقر فوق أدوات الكيمياء، وBaseclick. ويمكن الاطلاع على مجموعة متنوعة من الأصباغ وآلكاين يغاندس تستهدف في كتالوجات هؤلاء البائعين &quot;.

chemoselective modification of viral surfaces via bioorthogonal click chemistry

وقد تلقت لتعديل جزيئات الفيروس قدرا كبيرا من الاهتمام لإمكانياتها الهائلة في التأثير على العلاج الجيني، والتطبيقات oncolytic وتطوير لقاح. 1،2،3 النهج الحالية لتعديل أسطح الفيروسية، والتي هي في معظمها على أساس علم الوراثة، وغالبا ما تعاني من التوهين تنبيغ. 4،5 الإنتاج الفيروس، والعدوى والخلوية عن طريق chemoselective الكيمياء نقرة، قمنا بتطوير نهج بديل مباشر التي الالتفاف حول هذه القضايا على حد سواء في حين تبقى مرنة للغاية ويمكن الوصول إليها. 1،2 الهدف من هذا البروتوكول هو للتدليل على فعالية استخدام bioorthogonal كيمياء فوق لتعديل سطح من نوع اتش 5 الجسيمات. ويمكن استخدام هذه عملية من خطوتين سواء على المستوى العلاجي 1 أو تحليلي، 2،6 لأنها تسمح لربط chemoselective من الجزيئات التي تستهدف والأصباغ أو الجزيئات الأخرى ذات الاهتمام على البروتيناتمسبقا مع وصفت به أزيد. المزايا الثلاث الرئيسية لهذه الطريقة هي أن (1) وضع العلامات الأيضية يوضح شيئا يذكر لولا تأثير على اللياقة البدنية الفيروسية، 1،7 (2) يمكن أن تستخدم مجموعة واسعة من يغاندس المستجيب، و (3) فهي سريعة بشكل ملحوظ، وموثوق بها يسهل الوصول إليها. 1،2،7 في أول خطوة من هذا الإجراء، ويتم إنتاج جزيئات اتش تحمل إما azidohomoalanine (آها، مركب ميثيونين) أو السكر غير طبيعي O-N-مرتبط azidoacetylglucosamine (O-GlcNAz)، وكلاهما والتي تحتوي على أزيد (N-3) وظيفية المجموعة. بعد تنقية للجزيئات الفيروس أزيد المعدلة، وligated تحقيقا آلكاين يحتوي على شاردة طمرة فلوري بطريقة chemoselective إلى البروتينات قبل المسمى أو بروتينات سكرية. أخيرا، يجري تحليل SDS-PAGE للتدليل على الربط الناجح للمسبار على البروتينات قفيصة الفيروسية. ويرد آها التأسيس لتسمية جميع قفيصة الفيروسيةالبروتينات (Hexon، بينتون والألياف)، في حين أن نتائج دمج O-GlcNAz في وضع العلامات من الألياف فقط. في هذا المجال المتطور، وقد تم طرق متعددة لأزيد-آلكاين ربط نجحت في تطوير، ولكن فقط وهما أننا وجدنا أن يكون الأكثر ملاءمة وأثبت هنا - السلالة التي تروج لها أزيد-آلكاين الاضافه الحلقيه (SPAAC) والنحاس والمحفز الاضافه الحلقيه أزيد-آلكاين (CuAAC) تحت جو امؤكسج.

Watch this Scientific Journal Video about Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry at JoVE.com

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

صممت جزيئات الفيروس الغدي لاحتواء إما غير طبيعي التماثلية الأحماض الأمينية azidohomoalanine أو السكر azido<em&gt; O</em&gt;-GlcNAz. وligated chemoselectively المجموعة أزيد من كل ردود الفعل عن طريق &quot;فوق&quot; كيمياء كوسيلة لتعديل سطح الفيروسية.

Chemoselective تعديل السطوح الفيروسية عن طريق الكيمياء نقرة Bioorthogonal

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

باستخدام الفحص ميكروأري عموم الفيروسي (Virochip) إلى الشاشة العينات السريرية لمسببات الأمراض الفيروسية

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

بمعزل عن المتغيرات الاخلاص للفيروسات الحمض النووي الريبي وتوصيف التردد يتحور الفيروس

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Preparation of Viral DNA from Nucleocapsids

إعداد الحمض النووي الفيروسي من Nucleocapsids

Viruses are obligate cellular parasites, and thus the study of their DNA requires isolating viral material away from host cell contaminants and DNA. ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

إنتاج وناقلات Titering الغدة المؤتلف المرتبطة الفيروسية

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac تعديل النظام الأساسي للخلايا ينقول T الإنسان

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

إرساء ثقافة السائل المغطاة من مجرى الهواء الإنسان المستقطب طلائي Calu-3 خلايا لدراسة استجابة الخلية المضيفة لمسببات الأمراض التنفسية<em&gt; في المختبر</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

باستخدام الكيمياء فوق لقياس تأثير عدوى فيروسية في خلية المضيف RNA التجميعي

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

تطوير بوساطة حلقة-المجففة بالتبريد متساوي التضخيم الكواشف للكشف عن<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

قياس الأنفلونزا النورامينيداز تثبيط الجسم المضاد التتر من قبل انزيم مرتبط كتين الفحص

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

مسحة طريقة أخذ العينات للكشف عن نوروفيروس الإنسان على السطوح

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...