Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

De auteurs erkennen ondersteuning door subsidies van de Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 en BIOSS van de Medische Faculteit van de universiteit van Freiburg (CS).

1. Voorbereiding van Pathogene Antilichaam Opmerking: zuivering en concentratie van de antilichamen worden uitgevoerd op dezelfde dag als antilichamen niet worden opgeslagen in 0,1 M glycine pH van 2,5-3 (elutiebuffer) gedurende de nacht (ON). Affiniteitszuivering van IgG: gebruik 25 ml immune konijnenserum: <ol><li> Ontdooi de konijnenserum ON bij 4 ° C, mengen 1:1 met 1xPBS (loopbuffer) en Centrifugeer bij 1260 g gedurende 10 min bij 20 ° C. Eventueel kan e...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

De passieve overdracht van antistoffen in proefdieren is een belangrijke benadering voor het demonstreren van hun pathogeniciteit 7, -12. Diermodellen verkregen door deze methode, naast het feit dat het indirect bewijs voor autoimmuniteit 13, zodat het onderzoek van de efferente fase van de pathogenese. De passieve transfer model van antilichaam-geïnduceerde granulocyt-afhankelijke blaarvorming van epidermolysis bullosa acquisita (EBA) werd gebruikt om de mechanismen van weefselschade in autoimmun...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> recombinant antigen </td><td></td><td></td><td> De plasmiden coderen voor de recombinante vormen van murine collageen VII zijn bij de desbetreffende auteur. </td></tr><tr><td> immuun konijnenserum </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> We hadden New Zealand White konijnen geïmmuniseerd met 200 ug antigeen, 3 keer op 2 weken. Hiervoor hebben we gebruik gemaakt van de diensten van Eurogentec SA, België. </td></tr><tr><td> Proteïne G agarose </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / c muizen </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> Oktober verbinding, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> LGO, optimale snijtemperatuur </td></tr><tr><td> Cryomold standaard </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 mm x 20 mm x 5 mm </td></tr><tr><td> Cryomold intermediaire </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm x 15 mm x 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link-Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09 tot 0503 </td><td> Histologie verwerking en inbedcassettes </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co KG </td><td> 71492000 </td><td> tatoeëren pasta </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> Ebeco E. Becker &amp; Co GmbH </td><td></td><td> tatoeëren apparaat </td></tr><tr><td> Heparine </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co </td><td> 7692,1 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehyde 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamine hydrochloride </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xylazinehydrochloride </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> steriele PBS </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> digitale camera </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Injectiespuit aangedreven filtereenheid 0,45 urn </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Caliper </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (distributeur) </td></tr><tr><td> ziekte scoreblad </td><td></td><td></td><td> Bijvoorbeeld kastsed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Auto-immune verschijnselen optreden bij gezonde personen, maar als zelf-tolerantie mislukt, de auto-immune reactie kan resulteren in specifieke pathologie. Volgens Witebsky postulaten, een van de criteria in de diagnose van auto-immuun ziekte als de reproductie van de ziekte bij proefdieren door passieve overdracht van autoantilichamen. Voor epidermolysis bullosa acquisita (EBA), een prototype orgaanspecifieke auto-immuunziekte van huid en slijmvliezen werden verschillende experimentele modellen onlangs. In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke EBA 1. Volwaardige wijdverspreide ziekte wordt meestal 5-6 dagen na de eerste injectie en de omvang van de ziekte correleert met de dosis van de toegediende collagen VII-specifieke IgG. De weefselbeschadiging (blaarvorming) in de experimentele EBA is afhankelijk van de rekrutering en activering van granulocyten door weefsel-gebonden antistoffen 2, -4. Daarom dit model het mogelijk om de ontleding van de granulocyt-afhankelijke inflammatoire pathway betrokken bij de auto weefselbeschadiging als model reproduceert alleen de T-cel-onafhankelijke efferente fase van de auto-immuunreactie. Verder wordt de waarde onderstreept door een aantal studies waaruit de blister-inducerende vermogen van autoantilichamen in vivo onderzoeken en het mechanisme van de blaarvorming in EBA 1,3, -6. Tenslotte zal dit model sterk de ontwikkeling van nieuwe anti-inflammatoire therapieën in autoantilichaam-geïnduceerde ziekten. Over het geheel genomen de passieve overdracht diermodel van EBA is een toegankelijke en leerzaam ziekte model en zal onderzoekers helpen om niet alleen EBA pathogenese te analyseren, maar om te antwoorden fundamenteel biologisch en klinischessentiële auto-immuniteit vragen.

De passieve overdracht van antigeen specifieke antilichamen resulteert in een full blown ziekte in muizen, die lijkt op de klinische, histologische en immunopathologische niveaus van de menselijke EBA. Blaren, korsten, erosies en alopecia ontwikkelen op de oren, snuit, poten, benen, rug en rond de ogen van de muizen. De eerste klinische tekenen van de ziekte zal waarschijnlijk op de oren en / of hoofdgebied. Depositie van specifieke konijn IgG, en de muis complement C3 wordt gedetecteerd door directe IF op de huid epide...

Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulocyt-afhankelijke auto-antilichaam-geïnduceerde blaarvorming

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Cutane leishmaniasis in het dorsale huid van Hamsters: een bruikbaar model voor de screening van antileishmaniale Drugs

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Imaging van HIV-1 Envelope-geïnduceerde Virologische Synapse en signalering op synthetische lipidendubbellagen

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymfocyt Isolatie van Human Skin voor Fenotypische Analyse en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Preparation of Single-cell Suspensions for Cytofluorimetric Analysis from Different Mouse Skin Regions

Voorbereiding van de Single-cell Charms voor Cytofluorimetric Analyse van verschillende Mouse Skin Regio

The skin is a barrier organ that interacts with the external environment. Being continuously exposed to potential microbial invasion, the dermis and ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolatie van Infiltrating leukocyten uit Mouse huid met behulp van enzymatische Digest en Gradient Scheiding

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloïde Cell Isolatie van Mouse Skin en aftappen lymfkliertest Na Intradermal Immunisatie met levende verzwakte<em&gt; Plasmodium</em&gt; sporozoieten

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

Vasodilatatie van geïsoleerde Schepen en de isolatie van de extracellulaire matrix van Tight-skin Muizen

The interferon regulatory factor 5 (IRF5) is crucial for cells to determine if they respond in a pro-inflammatory or anti-inflammatory fashion. IRF5's ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murine volledige dikte van de huid Transplantation

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

Ontwikkeling van een Economische DNA Delivery System door &quot;Acufection&quot; en de toepassing ervan op Skin Research

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...