Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
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Die Autoren danken für die Unterstützung durch Fördermittel der Deutschen Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 und BIOSS von der Medizinischen Fakultät der Universität Freiburg (CS).

Ein. Vorbereitung von pathogenen Antikörper Anmerkung: Die Reinigung und die Konzentration der Antikörper sollten am selben Tag durchgeführt werden, wie Antikörper nicht in 0,1 M Glycin pH 2,5-3 (Elutionspuffer) über Nacht (ON) gespeichert werden. Affinitätsreinigung von IgG: Verwenden Sie 25 ml des Immunsystems Kaninchenserum: <ol><li> Auftauen Kaninchenserum ON bei 4 ° C, mischen Sie es 1:1 mit 1xPBS (Laufpuffer) und zentrifugieren es bei 1260 xg für ...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

Die passive Übertragung von Antikörpern in Versuchstieren ist ein wichtiger Ansatz für den Nachweis ihrer Pathogenität 7, -12. Tiermodelle durch dieses Verfahren erhalten wird, abgesehen davon, dass der indirekte Nachweis für Autoimmunität 13, ermöglichen die Untersuchung des efferenten Phase des pathogenen Mechanismus. Der passive Transfer-Modell von Antikörper-induzierte Granulozyten-abhängige Haut Blasenbildung Epidermolysis bullosa acquisita (EBA) wurde verwendet, um die Mechanismen de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> rekombinantes Antigen </td><td></td><td></td><td> Die Plasmide Codierung für die rekombinante Formen von murinem Kollagen VII sind aus der entsprechenden Autor zugeordnet. </td></tr><tr><td> Immunsystem Kaninchenserum </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> Wir hatten weißen Neuseeland-Kaninchen mit 200 ug Antigen, 3 mal in 2 Wochen-Intervallen immunisiert. Zu diesem Zweck haben wir die Dienste von Eurogentec SA, Belgien verwendet. </td></tr><tr><td> Protein G Agarose </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / c-Mäusen </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> OCT-Verbindung, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> Oktober, optimale Schnittleistung Temperatur </td></tr><tr><td> Cryomold Standard </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 mm × 20 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Cryomold Zwischen </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm × 15 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link-Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> Histologie Verarbeitung und Einbettkassetten </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co. KG </td><td> 71492000 </td><td> Tätowieren Paste </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. Becker &amp; Co GmbH </td><td></td><td> Tätowieren Gerät </td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7692,1 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehyd 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaminhydrochlorid </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xylazinhydrochlorid </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> sterile PBS </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> Digitalkamera </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Spritze getrieben Filtereinheit 0,45 um </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Caliper </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (Verteiler) </td></tr><tr><td> Krankheit Scoring-Blatt </td><td></td><td></td><td> B. Kapselungsed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Autoimmune Phänomene treten bei gesunden Personen, aber wenn Selbst-Toleranz fehl, kann der Autoimmun-Reaktion kann in bestimmten Pathologie führen. Gemäß Witebsky Postulate, eines der Kriterien bei der Diagnose einer Krankheit wie Autoimmun ist die Reproduktion der Krankheit bei Versuchstieren durch die passive Übertragung von Autoantikörpern. Für Epidermolysis bullosa acquisita (EBA), eine prototypische organspezifische Autoimmunerkrankung der Haut und Schleimhäute, wurden mehrere experimentelle Modelle kurzem gegründet. Im Tiermodell in unserem vorliegenden Arbeit beschriebenen gereinigten IgG-Antikörpern gegen eine Strecke von 200 Aminosäuren (aa 757-967) von Kollagen VII werden wiederholt in Mäuse Wiedergeben der Blasenbildung Phänotyp sowie der Histo-und immunpathologischen charakteristischen Merkmale der menschlichen eingespritzt EBA 1. Ausgewachsenen verbreitete Krankheit wird meist gesehen 5-6 Tage nach der ersten Injektion und das Ausmaß der Erkrankung korreliert mit der Dosis des verabreichten collagen VII-spezifischen IgG. Die Gewebeschäden (Blasenbildung) in der experimentellen EBA wird auf die Rekrutierung und Aktivierung von Granulozyten je nach Gewebe-gebundenen Autoantikörper 2, -4. Daher ermöglicht dieses Modell für die Präparation der Granulocyten-abhängige entzündlichen Wegs in der Autoimmun Gewebeschädigung beteiligt, da das Modell reproduziert nur das T-Zell-unabhängige Phase des efferenten Autoimmunantwort. Ferner wird dessen Wert von einer Reihe von Studien, die die Blister-induzierendes Potential von Autoantikörpern in vivo und Untersuchung des Mechanismus der Blasenbildung in EBA 1,3, -6 unterstrichen. Schließlich wird dieses Modell erheblich erleichtern die Entwicklung neuer anti-inflammatorische Therapien Autoantikörper-bedingten Krankheiten. Insgesamt ist die passive Übertragung Tiermodell der EBA eine zugängliche und lehrreich Krankheit Modell und hilft Forschern dabei nicht nur EBA Pathogenese analysieren, sondern zu beantworten grundlegende biologisch und klinischwesentliche Autoimmunität Fragen.

Die passive Übertragung von Antigen-spezifischen Antikörpern führt zu einer ausgewachsenen Krankheit in Mäusen ähnelt in klinischen, histologischen und immunpathologische Ebenen der menschlichen EBA. Blasen, Krusten, Erosionen und Alopezie auf den Ohren, Schnauze, Pfoten, Beine, Rücken und um die Augen der Mäuse entwickeln. Die ersten klinischen Anzeichen der Krankheit wird höchstwahrscheinlich auf den Ohren und / oder Kopfbereich erscheinen. Ablagerung von spezifischen Kaninchen IgG und Maus Komplement C3 wird ...

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Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Im Tiermodell in unserem vorliegenden Arbeit beschriebenen gereinigten IgG-Antikörpern gegen eine Strecke von 200 Aminosäuren (aa 757-967) von Kollagen VII werden wiederholt in Mäuse Wiedergeben der Blasenbildung Phänotyp sowie der Histo-und immunpathologischen charakteristischen Merkmale der menschlichen eingespritzt Epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulozyten-abhängige Autoantikörper-induzierten Blasenbildung

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Kutane Leishmaniose in der Rückenhaut von Hamstern: ein nützliches Modell für das Screening von Drogen leishmanientötende

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

Forschung

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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Imaging von HIV-1 Envelope-induzierte virologische Synapse und Signalisierung auf Synthetic Lipiddoppelschichten

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Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation von Haut-Schwanz zu allogene CD4-T-Zellantworten in Mäusen untersucht

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolierung von menschlicher Haut für phänotypische Analyse und<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Zellkultur

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Preparation of Single-cell Suspensions for Cytofluorimetric Analysis from Different Mouse Skin Regions

Herstellung von Einzelzellsuspensionen für Cytofluorimetric Analyse von verschiedenen Mäusehaut Regionen

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Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolation der infiltrierenden Leukozyten aus Mäusehaut unter Verwendung enzymatischer Digest und Gradiententrennung

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloischen Zellisolierung von Mäusehaut und ableitenden Lymphknoten Nach intradermale Impfung mit attenuierten Lebend<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoiten

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

Vasodilatation isolierter Gefäße und die Isolierung der extrazellulären Matrix von Fest-Haut Mäuse

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Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murine Vollhauttransplantation

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Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

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Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...