Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
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Gli autori riconoscono il supporto da finanziamenti della Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 e BIOS della Facoltà di Medicina dell&#39;Università di Friburgo (a CS).

1. Preparazione di anticorpi patogeni Nota: Purificazione e concentrazione degli anticorpi deve essere eseguito lo stesso giorno, come anticorpi non devono essere immagazzinati in 0,1 M glicina pH 2,5-3 (tampone di eluizione) per tutta la notte (ON). Purificazione di affinità di IgG: utilizzare 25 ml di siero di coniglio immune: <ol><li> Scongelare il siero di coniglio ON a 4 ° C, mescolare 1:1 con 1xPBS (tampone di corsa) e centrifugare a 1260 xg per 10 min ...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

Il trasferimento passivo di anticorpi in animali sperimentali è un approccio importante per dimostrare la patogenicità 7, -12. Modelli animali ottenuti mediante questo metodo, oltre ad essere la prova indiretta per autoimmunità 13, permettono l&#39;indagine della fase efferente del meccanismo patogenetico. Il modello di trasferimento passivo di anticorpi indotta granulociti-dipendente pelle vescicole di epidermolisi bollosa acquisita (EBA) è stato utilizzato per analizzare i meccanismi di danno...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> antigene ricombinante </td><td></td><td></td><td> La codifica plasmidi per le forme ricombinanti di murino collagene VII sono disponibili presso l&#39;autore corrispondente. </td></tr><tr><td> siero di coniglio immune </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> Avevamo conigli bianchi New Zealand immunizzati con 200 mg di antigene, 3 volte ad intervalli di 2 settimane. A questo scopo abbiamo utilizzato i servizi di Eurogentec SA, Belgio. </td></tr><tr><td> Proteine ​​G agarosio </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Topi BALB / c </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> Ottobre composto, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> Ottobre, temperatura di taglio ottimale </td></tr><tr><td> Cryomold di serie </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 millimetri × 20 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Cryomold intermedio </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm × 15 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link-Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> Istologia trasformazione e Cassette per inclusione </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co. KG </td><td> 71492000 </td><td> tatuaggio pasta </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. Becker GmbH &amp; Co </td><td></td><td> tatuaggio dispositivo </td></tr><tr><td> Eparina </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7.692,1 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldeide 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> Cloridrato di ketamina </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xylazina cloridrato </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> PBS sterile </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> macchina fotografica digitale </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Siringa guidato unità filtro da 0,45 micron </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinza </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (distributore) </td></tr><tr><td> malattia punteggio foglio </td><td></td><td></td><td> esempio custodie insed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Fenomeni autoimmuni si verificano in individui sani, ma quando auto-tolleranza non riesce, la risposta autoimmune può portare a patologia specifica. Secondo Witebsky postulati, uno dei criteri di diagnosi di una malattia autoimmune, come è la riproduzione della malattia in animali da esperimento dal trasferimento passivo di autoanticorpi. Per epidermolisi bollosa acquisita (EBA), un prototipo di organo-specifica malattia autoimmune della pelle e le mucose, diversi modelli sperimentali sono stati di recente istituzione. Nel modello animale descritto nel nostro lavoro attuale, purificati anticorpi IgG contro un tratto di 200 aminoacidi (aa 757-967) del collagene VII vengono iniettate più volte in topi che riproducono il fenotipo vesciche così come le caratteristiche del isto-e immunopatologiche caratteristiche per la salute umana EBA 1. Conclamata malattia diffusa è visto solitamente 5-6 giorni dopo la prima iniezione e l&#39;estensione della malattia correla con la dose somministrata di collagen VII-IgG specifiche. Il danno tissutale (formazione di bolle) nel sperimentale EBA dipende il reclutamento e l&#39;attivazione di granulociti da parte del tessuto-bound autoanticorpi 2, -4. Pertanto, questo modello consente la dissezione del granulociti-dipendente percorso infiammatorie coinvolte nel danno tissutale autoimmune, come il modello riproduce soltanto la cellula T-indipendente fase della risposta autoimmune efferente. Inoltre, il suo valore è sottolineata da una serie di studi che dimostrano il blister che inducono potenziale di autoanticorpi in vivo e indagare il meccanismo di formazione in blister EBA 1,3, -6. Infine, questo modello agevolerà notevolmente lo sviluppo di nuove terapie anti-infiammatorie in autoanticorpi malattie dovute al. Nel complesso, il passivo modello animale trasferimento di EBA è un modello di malattia accessibile e istruttivo e consentirà ai ricercatori di analizzare non solo patogenesi EBA, ma di rispondere a fondamentali biologicamente e clinicamenteautoimmunità domande essenziali.

Il trasferimento passivo di anticorpi antigene specifici risultati in una malattia in piena regola nei topi, che assomigliano a livelli clinici, istologici e immunopatologiche l&#39;EBA umano. Blister, croste, erosioni e alopecia sviluppano sulle orecchie, muso, zampe, gambe, schiena e intorno agli occhi dei topi. I primi segni clinici della malattia probabilmente apparirà sulle orecchie e / o della zona testa. Deposizione di specifiche IgG di coniglio, e il mouse del complemento C3 viene rilevato da diretta IF all&#39...

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Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Nel modello animale descritto nel nostro lavoro attuale, purificati anticorpi IgG contro un tratto di 200 aminoacidi (aa 757-967) del collagene VII vengono iniettate più volte in topi che riproducono il fenotipo vesciche così come le caratteristiche del isto-e immunopatologiche caratteristiche per la salute umana epidermolisi bollosa acquisita (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulociti-dipendente indotta da autoanticorpi pelle vescicole

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

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