Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

著者は、フライブルク大学（CSに）医学部からドイツ学術振興SI-1281/4-1とBIOSにからの補助金によって支援を認める。

1。病原性抗体の作製注意：抗体は一晩0.1MグリシンpHは2.5から3（溶出バッファー）（ON）に格納されるべきではないとして精製と抗体の濃度は、同じ日に行われるべきである。 IgGのアフィニティー精製：免疫ウサギ血清25mlを使用します。 <ol><li> 4でONウサギ血清を融解℃で、20℃で1xPBS（バッファを実行している）と、それを1:1で混合し、10分間1260 x...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

実験動物への自己抗体の受動的な転送は、その病原性7、-12を実証するための主要なアプローチです。この方法により得られた動物モデルは、自己免疫13の間接的な証拠であることに加えて、病原性機構の遠心性の相の調査を可能にします。後天性表皮水疱症（EBA）の膨れ抗体誘導性顆粒球依存皮膚の受動的伝達モデルは、自己免疫性皮膚疾患における組織損傷のメカ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>組換え抗原</td><td></td><td></td><td>マウスVII型コラーゲンの組換え形態をコードするプラスミドは、対応する著者から提供されています。 </td></tr><tr><td>免疫ウサギ血清</td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td>我々は、抗原200μgの、2週間隔で3回で免疫されたニュージーランドホワイトウサギを持っていた。このために、我々はEurogentec、SA、ベルギーのサービスを使用している。 </td></tr><tr><td>プロテインGアガロース</td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / cマウス</td><td>チャールズ·リバー·ラボラトリーズ</td><td></td><td></TD&gt; </tr><tr><td> OCTコンパウンド、ティッシュテック</td><td>サクラファインテック</td><td> 4583 </td><td> 10月、最適な切削温度</td></tr><tr><td> Cryomold標準</td><td>サクラファインテック</td><td> 4557 </td><td> 25ミリメートル×20ミリメートル×5ミリメートル</td></tr><tr><td> Cryomold中間</td><td>サクラファインテック</td><td> 4566 </td><td> 15ミリメートル×15ミリメートル×5ミリメートル</td></tr><tr><td>ユニリンクEinbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09から0503 </td><td>組織学処理や埋カセット</td></tr><tr><td> SPEZIAL-Tatowierfarbeシュワルツ</td><td> H. Hauptnerund＆リチャードHerberholz社＆Co KG </td><td> 71492000 </td><td>ペーストを刺青</td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E.ベッカー＆カンパニー社</td><td></td><td>刺青装置</td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>カール·ロート社＆Co。 </td><td> 7692.1 </td><td></td></tr><tr><td> 37％ホルムアルデヒド</td><td>カール·ロート社＆Co。 </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td>塩酸ケタミン</td><td>シグマアルドリッチケミー</td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン塩酸塩</td><td>シグマアルドリッチケミー</td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td>滅菌PBS </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td>デジタルカメラ</td><td>ニコン</td><td> COOLPIX 5400 </td><td></td></tr><tr><td>シリンジフィルターユニット0.45μmのを牽引</td><td>ミリポア</td><td></td><td></td></tr><tr><td>キャリパー</td><td>ミツトヨ7309 </td><td> 1667338 </td><td>ファーネル（ディストリビュータ） </td></tr><tr><td>病気のスコアシート</td><td></td><td></td><td>柵の例SED </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

自己免疫現象は、健康な個体で発生しますが、自己寛容が失敗したときに、自己免疫応答が特定の病状になることがあります。によるWitebskyのは、自己免疫疾患などの診断の基準のいずれかを仮定すると、自己抗体の受動的伝達によって、実験動物における疾患の再生です。後天性表皮水疱症（EBA）、皮膚や粘膜の原型の臓器特異的自己免疫疾患のために、いくつかの実験モデルは、最近設立された。 VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入されEBA 1。本格的な広範な疾患は、通常、最初の注射後5-6日見られ、疾患の程度は、投与されたCの線量と相関しているollagen VII-特異的IgG。実験EBAにおける組織損傷（ブリスター形成）-4組織結合自己抗体2によって顆粒球の動員および活性化に依存している。モデルは唯一の遠心性自己免疫応答のT細胞非依存位相を再現したがって、このモデルでは、自己免疫組織損傷に関与する顆粒球依存性炎症経路の解剖を可能にします。また、その値は、in vivoで自己抗体のブリスター誘導可能性を示すとEBA 1,3、-6における水疱形成のメカニズムを調査研究の数によって強調される。最後に、このモデルでは、大幅に自己抗体によって誘発される疾患における新たな抗炎症治療薬の開発を容易にするでしょう。全体的に、EBAの受動転送動物モデルがアクセス可能で有益な疾患モデルであると研究者はEBAの病因ではないだけを分析するのではなく、基本的な生物学的にも臨床的に答えるのに役立ちます本質的な自己免疫の質問。

マウスでは、本格的な疾患における抗原特異的抗体結果の受身伝達、臨床組織学的および免疫病理学的なレベルで人間EBA似ている。水疱、痂皮、びらん、脱毛症は、耳、鼻、足、脚、背中、マウスの目の周りに開発しています。病気の最初の臨床症状は、おそらく耳および/または頭部領域に表示されます。特定ウサギIgG、およびマウス補体C3の沈着は、IF病変部周囲の皮膚の凍結切片で真皮?...

Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入され後天性表皮水疱症（EBA）<sup&gt; 1</sup&gt;。

顆粒球に依存する自己抗体誘発皮膚水疱形成

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

ハムスターの背部皮膚における皮膚リーシュマニア症：Antileishmanial薬剤のスクリーニングのための有用なモデル

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

合成脂質二重膜上でHIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプスとシグナリングのイメージング

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

マウスにおける同種のCD4 T細胞応答を研究する尾皮膚の移植

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

表現型分析のためのヒト皮膚からリンパ球単離と<em&gt; ex vivoで</em&gt;細胞培養

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Preparation of Single-cell Suspensions for Cytofluorimetric Analysis from Different Mouse Skin Regions

別のマウス皮膚の領域から細胞蛍光分析のための単一細胞懸濁液の調製

The skin is a barrier organ that interacts with the external environment. Being continuously exposed to potential microbial invasion, the dermis and ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

酵素消化および勾配分離を使用したマウス皮膚から浸潤白血球の単離

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

弱毒で皮内免疫後のマウスの皮膚及び排出リンパノードから骨髄性細胞の単離<em&gt;マラリア原虫</em&gt;スポロゾイト

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

単離された血管の血管拡張およびタイト皮膚マウスの細胞外マトリックスの単離

The interferon regulatory factor 5 (IRF5) is crucial for cells to determine if they respond in a pro-inflammatory or anti-inflammatory fashion. IRF5's ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

マウス全層皮膚移植

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

「Acufection」と肌の研究への応用により、経済的なDNAデリバリーシステムの開発

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...