Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
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Os autores reconhecem o apoio por concessões do Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 e BIOS da Faculdade de Medicina da Universidade de Freiburg (para CS).

1. Preparação de Anticorpo Pathogenic Nota: A purificação e concentração dos anticorpos deve ser realizada no mesmo dia, na forma de anticorpos não são para ser armazenada em glicina 0,1 M pH 2,5-3 (tampão de eluição) durante a noite (ON). A purificação por afinidade de IgG: usar 25 ml de soro de coelho imune: <ol><li> Descongelar o soro de coelho ON a 4 ° C, mistura-a 1:1 com tampão de corrida (1xPBS) e centrifugar a 1260 ela xg durante 10 min a...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

A transferência passiva de anticorpos em animais experimentais é uma abordagem importante para a demonstração da sua patogenicidade 7, -12. Os modelos animais obtidos por meio deste método, para além de ser a evidência indirecta para autoimunidade 13, permite a investigação da fase eferente do mecanismo patogénico. O modelo de transferência passiva de anticorpos induzida pela pele de granulócitos-dependente de bolhas Epidermólise bolhosa adquirida (EBA), foi usada para dissecar os meca...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> antigénio recombinante </td><td></td><td></td><td> A codificação de plasmídeos para as formas recombinantes do colagénio murino VII estão disponíveis a partir do autor correspondente. </td></tr><tr><td> soro de coelho imune </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> Tivemos coelhos New Zealand White imunizados com 200 ug de antigénio, 3 vezes em 2 semanas de intervalo. Para isso, usaram os serviços de Eurogentec SA, Bélgica. </td></tr><tr><td> Proteína G agarose </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Camundongos Balb / c </td><td> Charles Ri ver Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> Outubro composto, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> OCT, a temperatura de corte óptima </td></tr><tr><td> Cryomold padrão </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 milímetros × 20 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Cryomold intermediário </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm × 15 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link Einbettkassette- </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> Histologia processamento e cassetes de incorporação </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co. KG </td><td> 71492000 </td><td> tatuagem pasta </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. Becker &amp; Co GmbH </td><td></td><td> tatuagem dispositivo </td></tr><tr><td> Heparina </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7692,1 </td><td></td></tr><tr><td> De formaldeído a 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> Cloridrato de cetamina </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Cloridrato de xilazina </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> PBS estéril </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> câmera digital </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Seringa conduzida unidade de filtro de 0,45 um </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Compasso de calibre </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (distribuidor) </td></tr><tr><td> folha de pontuação doença </td><td></td><td></td><td> exemplo recintosed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Fenómenos auto-imunes ocorrem em indivíduos saudáveis, mas, quando a auto-tolerância falhar, a resposta auto-imune pode resultar na patologia específica. De acordo com os postulados de Witebsky, um dos critérios para o diagnóstico de uma doença auto-imune, como seja a reprodução da doença em animais experimentais por uma transferência passiva de anticorpos. Para epidermólise bolhosa adquirida (EBA), uma doença órgão-específica protótipo auto-imune da pele e membranas mucosas, vários modelos experimentais foram recentemente estabelecida. No modelo animal descrito no nosso trabalho, purificou anticorpos IgG contra uma extensão de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colagénio VII são injectados repetidamente em ratinhos que reproduzem o fenótipo empolar, bem como a histo-e imunopatológicas características de humano EBA 1. Full-blown doença generalizada é normalmente visto 5-6 dias após a primeira injecção e a extensão da doença está correlacionada com a dose administrada de a collagen VII-IgG específico. A lesão tecidual (a formação de bolhas) na EBA experimental é, dependendo do recrutamento e ativação de granulócitos por tecidos ligados auto-anticorpos 2, -4. Portanto, este modelo permite a dissecção da via dependente de granulócitos-inflamatório envolvido no dano de tecido auto-imune, como o modelo reproduz apenas a fase de células T independente da resposta auto-imune eferente. Além disso, o seu valor é sublinhado por uma série de estudos que demonstram o potencial de indução de blister de anticorpos in vivo e investiga o mecanismo da formação de bolhas na EBA 1,3, -6. Finalmente, o modelo vai facilitar grandemente o desenvolvimento de novas terapias anti-inflamatórios em doenças induzidas por auto-anticorpos. No geral, o modelo animal passiva transferência da EBA é um modelo de doença acessível e instrutivo e vai ajudar os pesquisadores a analisar não só a patogênese EBA, mas a resposta fundamental biológica e clinicamenteperguntas essenciais autoimunidade.

A transferência passiva de anticorpos específicos de antigénio resulta numa doença soprado em ratinhos, assemelhando-se a níveis clínicos, histológicos e imunopatológicas, a ABE humano. Bolhas, crostas, erosões e alopecia desenvolver nas orelhas, focinho, patas, pernas, costas e ao redor dos olhos dos camundongos. Os primeiros sinais clínicos da doença, muito provavelmente aparecer nas orelhas e / ou área de cabeça. Deposição de coelho específico IgG e complemento do mouse C3 é detectado pelo IF direta ...

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Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

No modelo animal descrito no nosso trabalho, purificou anticorpos IgG contra uma extensão de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colagénio VII são injectados repetidamente em ratinhos que reproduzem o fenótipo empolar, bem como a histo-e imunopatológicas características de humano epidermólise bolhosa adquirida (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulócitos-dependente Blistering pele induzida por auto-anticorpos

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

JoVE Journal

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Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

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