Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
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Los autores reconocen el apoyo de subvenciones de la Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 y BIOSS de la Facultad de Medicina de la Universidad de Friburgo (para CS).

1. Preparación de anticuerpo patógeno Nota: La purificación y concentración de los anticuerpos se debe realizar en el mismo día, ya que los anticuerpos no son para ser almacenados en 0,1 M de glicina pH 2,5 a 3 (tampón de elución) durante la noche (ON). Purificación por afinidad de IgG: utilizar 25 ml de suero inmune de conejo: <ol><li> Descongele el suero de conejo en a 4 ° C, se mezcla 1:1 con tampón de 1xPBS () y centrifugar a 1260 se xg durante 10...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

La transferencia pasiva de anticuerpos en animales de experimentación es un enfoque importante para demostrar su patogenicidad 7, -12. Los modelos animales obtenidos a través de este método, además de ser la evidencia indirecta de la autoinmunidad 13, permitir la investigación de la fase eferente de los mecanismos patogénicos. El modelo de transferencia pasiva de anticuerpos inducidos por granulocitos dependiente de la formación de ampollas en la piel epidermólisis bullosa adquirida (EBA) f...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> antígeno recombinante </td><td></td><td></td><td> La codificación de los plásmidos de las formas recombinantes de colágeno VII murino están disponibles en el autor correspondiente. </td></tr><tr><td> suero inmune de conejo </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> Tuvimos conejos Nueva Zelanda Blanco inmunizados con 200 g de antígeno, 3 veces a intervalos de 2 semanas. Para ello se han utilizado los servicios de Eurogentec SA, Bélgica. </td></tr><tr><td> Proteína G agarosa </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Ratones Balb / c </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> Compuesto OCT, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> Octubre, la temperatura óptima de corte </td></tr><tr><td> Criomolde estándar </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 mm × 20 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Criomolde intermedio </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm x 15 mm x 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link-Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> Histología procesamiento y cassettes incrustación </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co. KG </td><td> 71492000 </td><td> tatuajes pasta </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. Becker &amp; Co GmbH </td><td></td><td> tatuajes dispositivo </td></tr><tr><td> La heparina </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7692.1 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehído 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co. </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> El clorhidrato de ketamina </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xilazina clorhidrato </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> PBS estéril </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> cámara digital </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Jeringuilla accionada por unidad de filtro de 0,45 micras </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Caliper </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (distribuidor) </td></tr><tr><td> enfermedad hoja de puntuación </td><td></td><td></td><td> ejemplo enclosed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Fenómenos autoinmunes se producen en individuos sanos, pero cuando la auto-tolerancia falla, la respuesta autoinmune puede dar lugar a una patología específica. Según Witebsky los postulados, uno de los criterios en el diagnóstico de una enfermedad autoinmune como es la reproducción de la enfermedad en animales de experimentación por la transferencia pasiva de anticuerpos. Para la epidermólisis bullosa adquirida (EBA), un prototipo de órganos específicos enfermedad autoinmune de la piel y membranas mucosas, varios modelos experimentales se establecieron recientemente. En el modelo animal descrito en el presente trabajo, se purificaron los anticuerpos IgG contra un tramo de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colágeno VII se inyecta repetidamente a ratones que reproducen el fenotipo de formación de ampollas, así como funciones de la histo-e inmunopatológicos característicos a humanos EBA 1. El estallido de la enfermedad generalizada se ve generalmente 5-6 días después de la primera inyección y la extensión de la enfermedad se correlaciona con la dosis administrada de la collagen VII-IgG específica. El daño tisular (formación de ampollas) en la EBA experimental depende del reclutamiento y activación de granulocitos de tejido unidas a autoanticuerpos 2, -4. Por lo tanto, este modelo permite la disección de la vía inflamatoria dependiente de granulocitos implicados en el daño tisular autoinmune, como el modelo reproduce sólo las células T independiente de la fase eferente de la respuesta autoinmune. Además, su valor es subrayada por un número de estudios que demuestran el potencial de inducción de blister de autoanticuerpos in vivo e investigando el mecanismo de la formación de ampollas en EBA 1,3, -6. Por último, este modelo facilitará en gran medida el desarrollo de nuevas terapias antiinflamatorias en enfermedades inducidas por el autoanticuerpo. En general, el modelo de transferencia pasiva de los animales EBA es un modelo de la enfermedad accesible e instructivo y ayudará a los investigadores a analizar no sólo la patogenia EBA pero para responder fundamental biológica y clínicamentepreguntas esenciales autoinmunidad.

La transferencia pasiva de anticuerpos específicos de antígenos resultado de una enfermedad por completo soplado en ratones, se asemejan a los niveles clínicos, histológicos e inmunopatológicos la EBA humana. Las ampollas, costras y alopecia, erosiones desarrollar en las orejas, el hocico, patas, piernas, espalda y alrededor de los ojos de los ratones. Los primeros signos clínicos de la enfermedad es muy probable que aparezcan en los oídos y / o área de la cabeza. La deposición de IgG específica de conejo, rat...

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Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

En el modelo animal descrito en el presente trabajo, se purificaron los anticuerpos IgG contra un tramo de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colágeno VII se inyecta repetidamente a ratones que reproducen el fenotipo de formación de ampollas, así como características de la histo-e inmunopatológicos característicos a humanos epidermólisis bullosa adquirida (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulocitos dependiente de autoanticuerpos inducidos por ampollas en la piel

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

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Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

La leishmaniasis cutánea en la piel dorsal de los hámsteres: un modelo útil para la selección de fármacos antileishmania

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

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Imagen del VIH-1 sobre inducida sinapsis virológica y señalización en la bicapa lipídica sintéticas

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El trasplante de la cola de la piel para el Estudio alogénico de células T CD4 respuestas en ratones

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Aislamiento de leucocitos infiltrantes de ratón Piel Usando enzimática Digest y Separación de degradado

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Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

El aislamiento de las células mieloides de ratón de la piel y el drenaje de ganglios linfáticos Siguiendo intradérmica La inmunización con viva atenuada<em&gt; Plasmodium</emLos esporozoitos&gt;

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

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Vasodilatación de los vasos aislados y el aislamiento de la matriz extracelular de la piel-apretado ratones

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Murine Full-thickness Skin Transplantation

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Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

Desarrollo de un sistema de entrega de ADN económico por &quot;Acufection&quot; y su aplicación a la investigación de la piel

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