Name: granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering
Uploaded: 2012-10-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

Författarna bekräftar stöd av bidrag från Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 och BIOS från den medicinska fakulteten vid Freiburg University (till CS).

1. Beredning av Patogena Antikropp Obs: Rening och koncentrering av antikropparna skall utföras på samma dag, som antikroppar är inte förvaras i 0,1 M glycin pH 2,5-3 (elueringsbuffert) över natten (ON). Affinitetsrening av IgG: använd 25 ml immun kaninserum: <ol><li> Tina kaninserum PÅ vid 4 ° C, blanda det 1:1 med 1 x PBS (rinnande buffert) och centrifugera den vid 1260 xg under 10 minuter vid 20 ° C. Eventuellt kan ett filtreringssteg med filterpapp...

<ol>
	<li>Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+dermal-epidermal+separation+in+mice+by+passive+transfer+of+antibodies+specific+to+type+VII+collagen.">Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen.</a> J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).</li><li>Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Flii+gene+increases+dermal-epidermal+blistering+in+an+autoimmune+ColVII+mouse+model+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 225, 401-413 (2011).</li><li>Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K&#946;+plays+a+critical+role+in+neutrophil+activation+by+immune+complexes.">PI3K&#946; plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes.</a> Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).</li><li>Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+is+required+for+neutrophil-dependent+autoantibody-induced+tissue+damage.">NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage.</a> J. Pathol. 212, 56-65 (2007).</li><li>Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alternative+pathway+of+complement+activation+is+critical+for+blister+induction+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).</li><li>Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Fc+receptor+deficiency+protects+from+tissue+injury+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).</li><li>Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+responses+induce+humorally+mediated+injury+in+experimental+anti-glomerular+basement+membrane+glomerulonephritis.">Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).</li><li>Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthritis+provoked+by+linked+T+and+B+cell+recognition+of+a+glycolytic+enzyme.">Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme.</a> Science. 286, 1732-1735 (1999).</li><li>Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., W&#246;lfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flavonoid+luteolin+inhibits+Fc&#947;-dependent+respiratory+burst+in+granulocytes,+but+not+skin+blistering+in+a+new+model+of+pemphigoid+in+adult+mice.">The flavonoid luteolin inhibits Fc&#947;-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice.</a> PLoS One. 7, e31066 (2012).</li><li>Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+passive+transfer+model+of+the+organ-specific+autoimmune+disease,+bullous+pemphigoid,+using+antibodies+generated+against+the+hemidesmosomal+antigen,+BP180.">A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180.</a> J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).</li><li>Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pemphigus+in+neonatal+mice+by+passive+transfer+of+IgG+from+patients+with+the+disease.">Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease.</a> N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).</li><li>Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myasthenia+gravis:+passive+transfer+from+man+to+mouse.">Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse.</a> Science. 190, 397-399 (1975).</li><li>Rose, N. R., Bona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+criteria+for+autoimmune+diseases+(Witebsky's+postulates+revisited.">Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited.</a> Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).</li><li>Sitaru, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita.</a> Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).</li><li>Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Br&#246;cker, E. B., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+type+VII+collagen+mediate+Fcgamma-dependent+neutrophil+activation+and+induce+dermal-epidermal+separation+in+cryosections+of+human+skin.">Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin.</a> Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).</li><li>Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+human+pemphigoid+autoantibodies+do+not+trigger+disease+by+the+passive+transfer+into+mice.">Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice.</a> Immunol. Lett. , (2012).</li><li>Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-induced+intestinal+inflammation+and+weight+loss+in+experimental+epidermolysis+bullosa+acquisita.">Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita.</a> J. Pathol. 224, 234-244 (2011).</li></ol>

Den passiv överföring av autoantikroppar i försöksdjur är en stor strategi för att demonstrera sin patogenitet 7, -12. Djurmodeller erhållits genom denna metod, förutom att vara den indirekta bevis för autoimmunitet 13, tillåter undersökning av den efferenta fasen av patogena mekanismen. Den passiva överföringen modell antikroppsinducerad granulocyt-beroende hudblåsor av epidermolysis bullosa acquisita (EBA) användes för att dissekera mekanismerna för vävnadsskada vid autoimmuna d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> rekombinant antigen </td><td></td><td></td><td> Plasmiderna kodar för de rekombinanta former av murin kollagen VII är tillgängliga från motsvarande författare. </td></tr><tr><td> immunt kaninserum </td><td> <a href="http://www.eurogentec.com/" target="_blank">www.eurogentec.com</a> </td><td></td><td> Vi hade New Zealand vita kaniner immuniserade med 200 | ig av antigen, 3 gånger med 2 veckors intervall. För detta ändamål har vi anlitat Eurogentec SA, Belgien. </td></tr><tr><td> Protein G-agaros </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11243233001 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / c-möss </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> Oktober förening, Tissue-Tek </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4583 </td><td> Oktober, optimal skärtemperaturen </td></tr><tr><td> Cryomold standard </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4557 </td><td> 25 mm × 20 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Cryomold mellanliggande </td><td> Sakura Finetek </td><td> 4566 </td><td> 15 mm × 15 mm × 5 mm </td></tr><tr><td> Uni-Link-Einbettkassette </td><td> R. Langenbrinck </td><td> 09-0503 </td><td> Histologi bearbetning och kassetter inbäddning </td></tr><tr><td> Spezial-Tatowierfarbe Schwarz </td><td> H. Hauptnerund &amp; Richard Herberholz GmbH &amp; Co KG </td><td> 71492000 </td><td> tatuering pasta </td></tr><tr><td> Tatowierzange TZ1 </td><td> EBECO E. Becker &amp; Co GmbH </td><td></td><td> tatuering enhet </td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co </td><td> 7692,1 </td><td></td></tr><tr><td> Formaldehyd 37% </td><td> Carl Roth GmbH &amp; Co </td><td> 7386 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaminhydroklorid </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> K2753-1G </td><td></td></tr><tr><td> Xylazinhydroklorid </td><td> Sigma-Aldrich Chemie GmbH </td><td> X1251-1G </td><td></td></tr><tr><td> steril PBS </td><td> Biochrom </td><td> L182-50 </td><td></td></tr><tr><td> digitalkamera </td><td> Nikon </td><td> Coolpix 5400 </td><td></td></tr><tr><td> Spruta driven filterenheten 0,45 um </td><td> Millipore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Bromsok </td><td> Mitutoyo 7309 </td><td> 1667338 </td><td> Farnell (distributör) </td></tr><tr><td> sjukdom scoring ark </td><td></td><td></td><td> exempel enclosed </td></tr></tbody></table>

granulocyte-dependent autoantibody-induced skin blistering

Autoimmuna fenomen förekommer hos friska individer, men när självtolerans misslyckas kan det autoimmuna svaret resultera i särskilda patologi. Enligt Witebsky s postulat, ett av kriterierna för att diagnostisera en sjukdom som autoimmun är reproduktion av sjukdomen i försöksdjur genom passiv överföring av autoantikroppar. För epidermolysis bullosa acquisita (EBA), en prototyp organspecifik autoimmun sjukdom av hud och slemhinnor, har flera experimentella modeller nyligen etablerade. I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant EBA 1. Fullt utvecklad utbredd sjukdom ses vanligen 5-6 dagar efter den första injektionen och omfattningen av sjukdomen korrelerar med dosen av den administrerade collagen VII-specifikt IgG. Den vävnadsskada (blåsbildning) i den experimentella EBA beroende på rekrytering och aktivering av granulocyter av vävnadsinrättningar bundna autoantikroppar 2, -4. Därför medger denna modell för dissektion av granulocyt-beroende inflammatorisk väg involverad i autoimmuna vävnadsskada, som modell återger endast den T-cell-oberoende fasen av efferenta autoimmunt svar. Dessutom är dess värde understryks av ett antal studier som visar blister-inducerande potentialen av autoantikroppar in vivo och undersöka mekanismen för blåsbildning i EBA 1,3, -6. Slutligen kommer denna modell kunna underlätta utvecklingen av nya anti-inflammatoriska terapier i autoantikropp-inducerade sjukdomar. Totalt sett är passiv överföring djurmodell av EBA en tillgänglig och lärorik sjukdomar modell och kommer att hjälpa forskare att analysera inte bara EBA patogenes utan att svara grundläggande biologiskt och klinisktväsentliga autoimmunitet frågor.

Den passiv överföring av antigenspecifika antikroppar resulterar i en fullt utvecklad sjukdom i möss, som liknar vid kliniska, histologiska och immunopatologiska nivå den mänskliga EBA. Blåsor, skorpor, erosioner och alopeci utvecklas på öronen, nos, tassar, ben, rygg och runt ögon mössen. De första kliniska tecknen på sjukdomen kommer med största sannolikhet att visas på öronen och / eller huvud område. Deponering av specifik kanin-IgG och mus komplement C3 detekteras genom direkt Om det vid dermal epid...

Watch this Scientific Journal Video about Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering at JoVE.com

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup&gt; 1</sup&gt;.

Granulocyt-beroende autoantikroppar-inducerad hudblåsor

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Kutan leishmaniasis i rygghuden för Hamsters: en användbar modell för screening av Antileishmanial Drugs

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Avbildning av HIV-1 kuvert-inducerad Virologiskt Synapse och signalering av syntetiska lipiddubbelskikt

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation av Tail Hud att Studera Allogen CD4 T-cellsvar hos möss

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymfocytisolering från human hud för fenotypisk analys och<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Preparation of Single-cell Suspensions for Cytofluorimetric Analysis from Different Mouse Skin Regions

Framställning av encelliga suspensioner för Cytofluorimetric analys från olika mushud Regioner

The skin is a barrier organ that interacts with the external environment. Being continuously exposed to potential microbial invasion, the dermis and ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolering av infiltrerande leukocyter från mus Skin Använda Enzymatisk Digest och Gradient Separation

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid cellisolering från mushud och dränerande lymfkörteln Efter Intradermal immunisering med levande försvagade<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoiter

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

Vasodilatation av isolerade fartyg och isolering av den extracellulära matrisen av Tight-skin Möss

The interferon regulatory factor 5 (IRF5) is crucial for cells to determine if they respond in a pro-inflammatory or anti-inflammatory fashion. IRF5's ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murin full tjocklek hudtransplantation

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

Utveckling av en ekonomisk DNA Delivery System av &quot;Acufection&quot; och dess tillämpning på Skin Research

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...