Name: preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping
Uploaded: 2012-10-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video at JoVE.com

الوصف التالي ليست خاصة لأحد العصبون الحركي. ويمكن استخدامه مع أي الخلايا العصبية. في هذا المثال، فإننا نستخدم الطيران العصبون الحركي 5 (MN5) أن يعصب الألياف 2 dorsalmost من عضلة خافضة الجناح dorsolongitudinal (DLM). لتحديد وتصور MN5 نستخدم نظام UAS/GAL4 للتعبير عن GFP في رحلة العصبونات الحركي?...

<ol>
	<li>Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Tempel, B. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+genomic+and+complementary+DNA+from+Shaker,+a+putative+potassium+channel+gene+from+Drosophila.">Cloning of genomic and complementary DNA from Shaker, a putative potassium channel gene from Drosophila.</a> Science. 237, 749-753 (1987).</li><li>Tempel, B. L., Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+a+probable+potassium+channel+component+encoded+at+Shaker+locus+of+Drosophila.">Sequence of a probable potassium channel component encoded at Shaker locus of Drosophila.</a> Science. 237, 770-775 (1987).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Cell+Recordings+from+Brain+of+Adult+Drosophila.">Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (6), e248 (2007).</li><li>Gu, H., Jiang, S. A., Campusano, J. M., Iniguez, J., Su, H., Hoang, A. A., Lavian, M., Sun, X., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2-type+calcium+channels+encoded+by+cac+regulate+AP-independent+neurotransmitter+release+at+cholinergic+synapses+in+adult+Drosophila+brain.">Cav2-type calcium channels encoded by cac regulate AP-independent neurotransmitter release at cholinergic synapses in adult Drosophila brain.</a> J. Neurophysiol. 101, 42-53 (2009).</li><li>Baines, R. A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+development+of+central+neurons+in+the+Drosophila+embryo.">Electrophysiological development of central neurons in the Drosophila embryo.</a> J. Neurosci. 18, 4673-4683 (1998).</li><li>Lin, W. H., Wright, D. E., Muraro, N. I., Baines, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+splicing+in+the+voltage-gated+sodium+channel+DmNav+regulates+activation,+inactivation,+and+persistent+current.">Alternative splicing in the voltage-gated sodium channel DmNav regulates activation, inactivation, and persistent current.</a> J. Neurophysiol. 102, 1994-2006 (2009).</li><li>Worrell, J. W., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+voltage-dependent+Ca2++currents+in+identified+Drosophila+motoneurons+in+situ.">Characterization of voltage-dependent Ca2+ currents in identified Drosophila motoneurons in situ.</a> J. Neurophysiol. 100, 868-878 (2008).</li><li>Srinivasan, S., Lance, K., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmental+differences+in+firing+properties+and+potassium+currents+in+Drosophila+larval+motoneurons.">Segmental differences in firing properties and potassium currents in Drosophila larval motoneurons.</a> J. Neurophysiol. , (2011).</li><li>Choi, J. C., Park, D., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+and+morphological+characterization+of+identified+motor+neurons+in+the+Drosophila+third+instar+larva+central+nervous+system.">Electrophysiological and morphological characterization of identified motor neurons in the Drosophila third instar larva central nervous system.</a> J. Neurophysiol. 91, 2353-2365 (2004).</li><li>Pulver, S. R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spike+integration+and+cellular+memory+in+a+rhythmic+network+from+Na+/K++pump+current+dynamics.">Spike integration and cellular memory in a rhythmic network from Na+/K+ pump current dynamics.</a> Nat. Neurosci. 13, 53-59 (2010).</li><li>Fayyazuddin, A., Zaheer, M. A., Hiesinger, P. R., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nicotinic+acetylcholine+receptor+Dalpha7+is+required+for+an+escape+behavior+in+Drosophila.">The nicotinic acetylcholine receptor Dalpha7 is required for an escape behavior in Drosophila.</a> PLoS Biol. 4, e63 (2006).</li><li>Duch, C., Vonhoff, F., Ryglewski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+elongation+and+dendritic+branching+are+affected+separately+by+different+forms+of+intrinsic+motoneuron+excitability.">Dendrite elongation and dendritic branching are affected separately by different forms of intrinsic motoneuron excitability.</a> J. Neurophysiol. 100, 2525-2536 (2008).</li><li>Ryglewski, S., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaker+and+Shal+mediate+transient+calcium-independent+potassium+current+in+a+Drosophila+flight+motoneuron.">Shaker and Shal mediate transient calcium-independent potassium current in a Drosophila flight motoneuron.</a> J. Neurophysiol. 102, 3673-3688 (2009).</li><li>Ryglewski, S., Lance, K., Levine, R. B., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2+Channels+Mediate+LVA+and+HVA+Calcium+Currents+in+Drosophila+Motoneurons.">Cav2 Channels Mediate LVA and HVA Calcium Currents in Drosophila Motoneurons.</a> J. Physiol. , (2011).</li><li>Ikeda, K., Koenig, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+identification+of+the+motor+neurons+innervating+the+dorsal+longitudinal+flight+muscle+of+Drosophila+melanogaster.">Morphological identification of the motor neurons innervating the dorsal longitudinal flight muscle of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 1273, 436-444 (1988).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Mount+Preparation+of+the+Adult+Drosophila+Ventral+Nerve+Cord+for+Giant+Fiber+Dye+Injection.">Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection.</a> J. Vis. Exp. (52), e3080 (2011).</li></ol>

عندما تصور الخلايا مع البروتينات الفلورية مثل GFP، من المهم عدم الإفراط في تعريض إعداد للضوء أكثر من اللازم. وهذا قد يؤدي إلى تلف الصورة. نستخدم 100W HBO الزئبق قوس قصيرة المصابيح لإضاءة، ونحن أيضا استخدام الكثافة المحايدة (ND) 0.8 (الفلاتر ND صفاء 0.3 و 0.5). لتكون قادرة على الحكم...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> وكيل / البند </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> البروتيني نوع XIV </td><td> سيغما الدريتش USA </td><td> P5147 </td></tr><tr><td> Microfil إبرة حقن مرنة </td><td> العالم آلات دقيقة USA </td><td> MF28G-5 </td></tr><tr><td> البورسليكات الزجاج الشعيرات الدموية، التطوير التنظيمي 1.5 مم، 1.0 ملم معرف، ليس شعيرة </td><td> العالم آلات دقيقة USA </td><td> PG52151-4 </td></tr><tr><td> مبادرة ديزرتك الصناعية </td><td> إينفيتروجن USA </td><td> D3899 </td></tr><tr><td> Sylgard كيت إلاستومر 184 (داو كورنينج) </td><td> <a href="http://www.ellsworth.com" target="_blank">www.ellsworth.com</a> </td><td> 184 SIL المرانة KIT </td></tr><tr><td> ND مرشح مجموعة (صاعد) </td><td> صفاء </td><td> 22000b سلسلة </td></tr><tr><td> حامل قطب كهربائي 1-HL-U </td><td> موlecular الأجهزة </td><td> 1-HL-U </td></tr></tbody></table>

preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping

أوقات قصيرة الجيل والتقنيات الوراثية السهل جعل ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا نموذجا ممتازا في مجال البحوث الجينية علم الأعصاب الأساسية. القنوات الأيونية هي أساس كل سلوك لأنها توسط استثارة الخلايا العصبية. كان أول قناة أيون الجهد بوابات المستنسخة الجهد ذبابة الفاكهة قناة البوتاسيوم بوابات شاكر 1،2. نحو فهم دور القنوات الأيونية واستثارة الغشاء وظيفة الجهاز العصبي من المفيد الجمع بين أدوات الجينية القوية المتاحة في ذبابة الفاكهة في الموقع مع التسجيلات المشبك التصحيح. لسنوات عديدة وتعطلت هذه التسجيلات من صغر حجم الجهاز العصبي المركزي ذبابة الفاكهة. وعلاوة على ذلك، يشكل غمد قوية مصنوعة من الكولاجين والخلايا الدبقية العقبات للوصول إلى الخلايا العصبية ماصة التصحيح المركزية. إزالة هذا الغلاف هو شرط مسبق ضروري للتسجيلات المشبك التصحيح من أي الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي ذبابة الفاكهة الكبار. في السنوات الأخيرةكان العلماء قادرين على إجراء التسجيلات في الموقع المشبك التصحيح من الخلايا العصبية في الدماغ البالغ 3،4 بطني والحبل العصبي الجنيني 5،6، 7،8،9،10 اليرقات، وذبابة الفاكهة الكبار 11،12،13،14. A مستقر جيجا ختم هو الشرط المسبق الأساسي لتصحيح جيد ويعتمد على الاتصال نظيفة للماصة التصحيح مع غشاء الخلية لتجنب تسرب التيارات. لذلك، يجب أن لخلية كاملة في الموقع التسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا العصبية ذبابة الفاكهة الكبار تنظيفها جيدا. في الخطوة الأولى، وغمد العقدية لابد من معالجة إنزيمي وإزالة ميكانيكيا لجعل الخلايا المستهدفة للوصول. في الخطوة الثانية، غشاء الخلية لابد من مصقول بحيث لا طبقة من المواد الدبقية، والكولاجين أو غيرها قد تخل جيجا ختم التشكيل. توضح هذه المقالة كيفية إعداد الخلايا العصبية التي تم تحديدها في العصب المركزي ذبابة الفاكهة الحبل البطني، والعصبون الحركي رحلة 5 (MN5 15)، لج جسدية كاملةتسجيلات الذراع التصحيح المشبك. ويتحقق تحديد وتسليط الضوء على الخلايا العصبية المستهدفة من التعبير GFP في MN5 من. نحن لا نهدف إلى شرح تقنية المشبك التصحيح نفسه.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video at JoVE.com

Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video (Video) | JoVE

في التصحيح الموقع وتستخدم لتوصيف المشبك التسجيلات الكهربية للخلايا العصبية في الدوائر سليمة. في ذبابة الفاكهة الوراثية نموذج التصحيح تحامل صعب لأن CNS صغيرة ومحاطة غمد قوية. توضح هذه المقالة الإجراء لإزالة الخلايا العصبية وغمد نظيفة لاحقة التسجيلات المشبك التصحيح.

إعداد<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا العصبية المركزي لل<em&gt; في الموقع</em&gt; تصحيح لقط

Short generation times and facile genetic techniques make the fruit fly Drosophila melanogaster an excellent genetic model in fundamental neuroscience ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons (Video) | JoVE 

القبض على الليزر Microdissection ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية المحيطية

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation (Video) | JoVE 

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا العصبية في الشبكية ماوس إعداد غامق تكييفها شريحة

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster Video (Video) | JoVE

وضع العلامات واحدة من الخلايا في الجهاز العصبي المركزي<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila Video (Video) | JoVE

والنموذج الإصابات المعنية بالتحقيق في وسط الجهاز العصبي في إصلاح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna Video (Video) | JoVE

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الهوائي

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons Video (Video) | JoVE

الزرد<em&gt; في الموقع</em&gt; الحبل الشوكي التحضير للتسجيلات الكهربية من العمود الفقري الحسية والحركية العصبية

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices Video (Video) | JoVE

تطبيق الآلي صورة موجهة المشبك التصحيح لدراسة الخلايا العصبية في شرائح الدماغ

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons Video (Video) | JoVE

الأعمال التحضيرية وبروتوكولات "كل خلية التصحيح المشبك تسجيل" ليفيس النمو تيكتال الخلايا العصبية

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons Video (Video) | JoVE

إعداد شرائح الحبل الشوكي الحاد لتسجيل كامل الخلية التصحيح-المشبك في الخلايا العصبية جيلاتينوسا الدماغ

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain Video (Video) | JoVE

تحفيز وتحليل تكوين الأعصاب للبالغين في الدماغ المركزي Drosophila

The molecular and cellular mechanisms underlying neurogenesis in response to disease or injury are not well understood. However, understanding these ...