Name: preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping
Uploaded: 2012-10-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video at JoVE.com

התיאור הבא הוא לא ספציפי לmotoneuron אחד. ניתן להשתמש בו עם כל עצב. בדוגמה זו, אנו משתמשים טיסת motoneuron 5 (MN5) שinnervates שני הסיבים של שריר dorsalmost depressor אגף dorsolongitudinal (DLM). כדי לזהות ולדמיין MN5 אנו משתמשים במערכת UAS/GAL4 להביע GFP בתאי עצב אחראי הטיסה (וכמה נוירונים אחרים). <p class="jove_title" style...

<ol>
	<li>Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Tempel, B. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+genomic+and+complementary+DNA+from+Shaker,+a+putative+potassium+channel+gene+from+Drosophila.">Cloning of genomic and complementary DNA from Shaker, a putative potassium channel gene from Drosophila.</a> Science. 237, 749-753 (1987).</li><li>Tempel, B. L., Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+a+probable+potassium+channel+component+encoded+at+Shaker+locus+of+Drosophila.">Sequence of a probable potassium channel component encoded at Shaker locus of Drosophila.</a> Science. 237, 770-775 (1987).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Cell+Recordings+from+Brain+of+Adult+Drosophila.">Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (6), e248 (2007).</li><li>Gu, H., Jiang, S. A., Campusano, J. M., Iniguez, J., Su, H., Hoang, A. A., Lavian, M., Sun, X., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2-type+calcium+channels+encoded+by+cac+regulate+AP-independent+neurotransmitter+release+at+cholinergic+synapses+in+adult+Drosophila+brain.">Cav2-type calcium channels encoded by cac regulate AP-independent neurotransmitter release at cholinergic synapses in adult Drosophila brain.</a> J. Neurophysiol. 101, 42-53 (2009).</li><li>Baines, R. A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+development+of+central+neurons+in+the+Drosophila+embryo.">Electrophysiological development of central neurons in the Drosophila embryo.</a> J. Neurosci. 18, 4673-4683 (1998).</li><li>Lin, W. H., Wright, D. E., Muraro, N. I., Baines, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+splicing+in+the+voltage-gated+sodium+channel+DmNav+regulates+activation,+inactivation,+and+persistent+current.">Alternative splicing in the voltage-gated sodium channel DmNav regulates activation, inactivation, and persistent current.</a> J. Neurophysiol. 102, 1994-2006 (2009).</li><li>Worrell, J. W., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+voltage-dependent+Ca2++currents+in+identified+Drosophila+motoneurons+in+situ.">Characterization of voltage-dependent Ca2+ currents in identified Drosophila motoneurons in situ.</a> J. Neurophysiol. 100, 868-878 (2008).</li><li>Srinivasan, S., Lance, K., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmental+differences+in+firing+properties+and+potassium+currents+in+Drosophila+larval+motoneurons.">Segmental differences in firing properties and potassium currents in Drosophila larval motoneurons.</a> J. Neurophysiol. , (2011).</li><li>Choi, J. C., Park, D., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+and+morphological+characterization+of+identified+motor+neurons+in+the+Drosophila+third+instar+larva+central+nervous+system.">Electrophysiological and morphological characterization of identified motor neurons in the Drosophila third instar larva central nervous system.</a> J. Neurophysiol. 91, 2353-2365 (2004).</li><li>Pulver, S. R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spike+integration+and+cellular+memory+in+a+rhythmic+network+from+Na+/K++pump+current+dynamics.">Spike integration and cellular memory in a rhythmic network from Na+/K+ pump current dynamics.</a> Nat. Neurosci. 13, 53-59 (2010).</li><li>Fayyazuddin, A., Zaheer, M. A., Hiesinger, P. R., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nicotinic+acetylcholine+receptor+Dalpha7+is+required+for+an+escape+behavior+in+Drosophila.">The nicotinic acetylcholine receptor Dalpha7 is required for an escape behavior in Drosophila.</a> PLoS Biol. 4, e63 (2006).</li><li>Duch, C., Vonhoff, F., Ryglewski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+elongation+and+dendritic+branching+are+affected+separately+by+different+forms+of+intrinsic+motoneuron+excitability.">Dendrite elongation and dendritic branching are affected separately by different forms of intrinsic motoneuron excitability.</a> J. Neurophysiol. 100, 2525-2536 (2008).</li><li>Ryglewski, S., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaker+and+Shal+mediate+transient+calcium-independent+potassium+current+in+a+Drosophila+flight+motoneuron.">Shaker and Shal mediate transient calcium-independent potassium current in a Drosophila flight motoneuron.</a> J. Neurophysiol. 102, 3673-3688 (2009).</li><li>Ryglewski, S., Lance, K., Levine, R. B., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2+Channels+Mediate+LVA+and+HVA+Calcium+Currents+in+Drosophila+Motoneurons.">Cav2 Channels Mediate LVA and HVA Calcium Currents in Drosophila Motoneurons.</a> J. Physiol. , (2011).</li><li>Ikeda, K., Koenig, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+identification+of+the+motor+neurons+innervating+the+dorsal+longitudinal+flight+muscle+of+Drosophila+melanogaster.">Morphological identification of the motor neurons innervating the dorsal longitudinal flight muscle of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 1273, 436-444 (1988).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Mount+Preparation+of+the+Adult+Drosophila+Ventral+Nerve+Cord+for+Giant+Fiber+Dye+Injection.">Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection.</a> J. Vis. Exp. (52), e3080 (2011).</li></ol>

כשמדמיינים את התאים עם חלבוני ניאון כמו GFP, חשוב לא מעל לחשוף את ההכנה ליותר מדי אור. זה עלול לגרום לניזק תמונה. אנו משתמשים בנורות 100W HBO קצרות קשת כספית לתאורה, ואנחנו משתמשים גם בצפיפות ניטראלית (ND) של 0.8 (מסנני ND Chroma 0.3 ו -0.5). כדי להיות מסוגל לשפוט על איכות הראות הטובה הנ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> סוכן / פריט </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> פרוטאז הסוג XIV </td><td> סיגמה אולדריץ ארה&quot;ב </td><td> P5147 </td></tr><tr><td> מחט זריקה גמישה Microfil </td><td> עולם מכשירי דיוק ארה&quot;ב </td><td> MF28G-5 </td></tr><tr><td> ורוסיליקט זכוכית נימים, 1.5 מ&quot;מ OD, איד 1.0 מ&quot;מ, ללא נימה </td><td> עולם מכשירי דיוק ארה&quot;ב </td><td> PG52151-4 </td></tr><tr><td> DiI </td><td> Invitrogen ארה&quot;ב </td><td> D3899 </td></tr><tr><td> Sylgard אלסטומר קיט 184 (Dow Corning) </td><td> <a href="http://www.ellsworth.com" target="_blank">www.ellsworth.com</a> </td><td> 184 SIL Elast KIT </td></tr><tr><td> מסנן ND סט (unmounted) </td><td> Chroma </td><td> סדרת 22000b </td></tr><tr><td> בעל אלקטרודה 1-HL-U </td><td> מוהתקני lecular </td><td> 1-HL-U </td></tr></tbody></table>

preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping

זמני דור קצרים וטכניקות גנטיות שטחיות להפוך זבוב דרוזופילה melanogaster מודל גנטי מצוין במחקר מדעי המוח יסודי. תעלות יונים הן בסיס לכל ההתנהגות שכן הם לתווך רגישות עצבית. הערוץ הראשון המתח מגודר היון המשובט היה ערוץ תסיסנית המתח המגודר אשלגן אכר 1,2. לקראת הבנת תפקידו של תעלות יונים ורגישות הממברנה לתפקוד מערכת עצבים כדאי לשלב כלים גנטיים רבים עצמה זמינות בדרוזופילה בהקלטות עם מהדק תיקון באתרו. במשך שנים רבות הקלטות כאלה כבר הקשו על ידי הגודל הקטן של מערכת העצבים המרכזיים תסיסנית. יתר על כן, נדן חזק עשוי גליה וקולגן היווה מכשולים לגישת פיפטה תיקון לנוירונים מרכזיים. הסרת מעטה זו היא תנאי הכרחי להקלטות מהדקות תיקון מכל תא עצב במערכת עצבים מרכזיים תסיסנית הבוגרת. בשנים האחרונותמדענים הצליחו לבצע בהקלטות מהדקות תיקון באתרו מתא העצב במוח הבוגר 3,4 וחוט עצב גחון של עוברי 5,6, זחל 7,8,9,10, ומבוגר תסיסנית 11,12,13,14. יציב גיגה חותם הוא התנאי העיקרי לתיקון טוב ותלוי במגע נקי של פיפטה התיקון עם קרום התא, כדי למנוע דליפת זרמים. לכן, לכל תא בהקלטות מהדקות תיקון באתרו מתאי עצב בוגרים תסיסנית יש לנקות ביסודיות. בשלב הראשון, את נדן ganglionic יש להתייחס enzymatically ומכאני הוסר כדי להפוך את תאי היעד נגישים. בשלב השני, קרום התא חייב להיות מלוטש כך שאין שכבה של גליה, קולגן או חומר אחר עלולה להפריע היווצרות גיגה חותם. מאמר זה מתאר כיצד להכין נוירון המרכזי זיהה את כבל תסיסנית גחון העצב, טיסת 5 motoneuron (MN5 15), לסומטי השלם גהקלטות מהדקות תיקון טו. זיהוי ונראות של נוירון מושג על ידי ביטוי ממוקד של ה-GFP בMN5. אנחנו לא שואפים להסביר את טכניקת מהדק התיקון עצמו.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video at JoVE.com

Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping Video (Video) | JoVE

בתיקון אתר הקלטות מהדקות משמשות לאפיון אלקטרו של הנוירונים במעגלים ללא פגע. בדרוזופילה הגנטית מודל התיקון Clamping קשה בגלל מערכת העצבים המרכזיים היא קטנה ומוקף בנדן איתן. מאמר זה מתאר את ההליך כדי להסיר את הנדן ונקי נוירונים להקלטות מהדקות תיקון לאחר מכן.

הכנה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; נוירונים מרכזיים עבור<em&gt; באתר</em&gt; התיקון clamping

Short generation times and facile genetic techniques make the fruit fly Drosophila melanogaster an excellent genetic model in fundamental neuroscience ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons (Video) | JoVE 

לייזר Microdissection לכידה של תסיסנית נוירונים היקפיים

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation (Video) | JoVE 

הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת Dark המותאמות פרוסה

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster Video (Video) | JoVE

תיוג של תאים בודדים במערכת העצבים המרכזית של<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila Video (Video) | JoVE

פרדיגמה פגיעה לחקור תיקון של מערכת עצבים מרכזי ב<em&gt; דרוזופילה</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna Video (Video) | JoVE

הר immunolabeling השלם של חוש הריח קולטן נוירונים<em&gt; דרוזופילה</em&gt; אנטנה

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons Video (Video) | JoVE

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices Video (Video) | JoVE

יישום אוטומטי של תמונה מודרך תיקון מהדק לחקר נוירונים של פרוסות המוח

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons Video (Video) | JoVE

ההכנות ופרוטוקולים עבור כל תא, תיקון קלאמפ הקלטה של נוירונים Tectal צפרדע רפואית זריזה

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons Video (Video) | JoVE

הכנה של חוט השדרה חריפה פרוסות תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטה בנוירונים הסובסטנציה Gelatinosa

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain Video (Video) | JoVE

גירוי וניתוח נוירוגנזה למבוגרים במוח המרכזי של דרוזופילה

The molecular and cellular mechanisms underlying neurogenesis in response to disease or injury are not well understood. However, understanding these ...