Name: preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping
Uploaded: 2012-10-15T13:00:00
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다음 설명은 하나 motoneuron에 대한 특정하지 않습니다. 그것은 모든 신경 세포와 함께 사용할 수 있습니다. 이 예제에서, 우리는 dorsolongitudinal 날개 억압자 근육 (DLM)의 두 dorsalmost 섬유를 innervates 비행 motoneuron 5 (MN5)을 사용합니다. 우리가 비행 motoneurons (그리고 다른 몇 뉴런)에 GFP를 표현 할 수있는 UAS/GAL4 시스템을 사용 MN5를 파악하고 시각화합니다. 1. 성인 Drosophila의 절?...

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	<li>Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Tempel, B. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+genomic+and+complementary+DNA+from+Shaker,+a+putative+potassium+channel+gene+from+Drosophila.">Cloning of genomic and complementary DNA from Shaker, a putative potassium channel gene from Drosophila.</a> Science. 237, 749-753 (1987).</li><li>Tempel, B. L., Papazian, D. M., Schwarz, T. L., Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+a+probable+potassium+channel+component+encoded+at+Shaker+locus+of+Drosophila.">Sequence of a probable potassium channel component encoded at Shaker locus of Drosophila.</a> Science. 237, 770-775 (1987).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Cell+Recordings+from+Brain+of+Adult+Drosophila.">Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (6), e248 (2007).</li><li>Gu, H., Jiang, S. A., Campusano, J. M., Iniguez, J., Su, H., Hoang, A. A., Lavian, M., Sun, X., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2-type+calcium+channels+encoded+by+cac+regulate+AP-independent+neurotransmitter+release+at+cholinergic+synapses+in+adult+Drosophila+brain.">Cav2-type calcium channels encoded by cac regulate AP-independent neurotransmitter release at cholinergic synapses in adult Drosophila brain.</a> J. Neurophysiol. 101, 42-53 (2009).</li><li>Baines, R. A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+development+of+central+neurons+in+the+Drosophila+embryo.">Electrophysiological development of central neurons in the Drosophila embryo.</a> J. Neurosci. 18, 4673-4683 (1998).</li><li>Lin, W. H., Wright, D. E., Muraro, N. I., Baines, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+splicing+in+the+voltage-gated+sodium+channel+DmNav+regulates+activation,+inactivation,+and+persistent+current.">Alternative splicing in the voltage-gated sodium channel DmNav regulates activation, inactivation, and persistent current.</a> J. Neurophysiol. 102, 1994-2006 (2009).</li><li>Worrell, J. W., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+voltage-dependent+Ca2++currents+in+identified+Drosophila+motoneurons+in+situ.">Characterization of voltage-dependent Ca2+ currents in identified Drosophila motoneurons in situ.</a> J. Neurophysiol. 100, 868-878 (2008).</li><li>Srinivasan, S., Lance, K., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmental+differences+in+firing+properties+and+potassium+currents+in+Drosophila+larval+motoneurons.">Segmental differences in firing properties and potassium currents in Drosophila larval motoneurons.</a> J. Neurophysiol. , (2011).</li><li>Choi, J. C., Park, D., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+and+morphological+characterization+of+identified+motor+neurons+in+the+Drosophila+third+instar+larva+central+nervous+system.">Electrophysiological and morphological characterization of identified motor neurons in the Drosophila third instar larva central nervous system.</a> J. Neurophysiol. 91, 2353-2365 (2004).</li><li>Pulver, S. R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spike+integration+and+cellular+memory+in+a+rhythmic+network+from+Na+/K++pump+current+dynamics.">Spike integration and cellular memory in a rhythmic network from Na+/K+ pump current dynamics.</a> Nat. Neurosci. 13, 53-59 (2010).</li><li>Fayyazuddin, A., Zaheer, M. A., Hiesinger, P. R., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nicotinic+acetylcholine+receptor+Dalpha7+is+required+for+an+escape+behavior+in+Drosophila.">The nicotinic acetylcholine receptor Dalpha7 is required for an escape behavior in Drosophila.</a> PLoS Biol. 4, e63 (2006).</li><li>Duch, C., Vonhoff, F., Ryglewski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+elongation+and+dendritic+branching+are+affected+separately+by+different+forms+of+intrinsic+motoneuron+excitability.">Dendrite elongation and dendritic branching are affected separately by different forms of intrinsic motoneuron excitability.</a> J. Neurophysiol. 100, 2525-2536 (2008).</li><li>Ryglewski, S., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaker+and+Shal+mediate+transient+calcium-independent+potassium+current+in+a+Drosophila+flight+motoneuron.">Shaker and Shal mediate transient calcium-independent potassium current in a Drosophila flight motoneuron.</a> J. Neurophysiol. 102, 3673-3688 (2009).</li><li>Ryglewski, S., Lance, K., Levine, R. B., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cav2+Channels+Mediate+LVA+and+HVA+Calcium+Currents+in+Drosophila+Motoneurons.">Cav2 Channels Mediate LVA and HVA Calcium Currents in Drosophila Motoneurons.</a> J. Physiol. , (2011).</li><li>Ikeda, K., Koenig, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+identification+of+the+motor+neurons+innervating+the+dorsal+longitudinal+flight+muscle+of+Drosophila+melanogaster.">Morphological identification of the motor neurons innervating the dorsal longitudinal flight muscle of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 1273, 436-444 (1988).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Mount+Preparation+of+the+Adult+Drosophila+Ventral+Nerve+Cord+for+Giant+Fiber+Dye+Injection.">Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection.</a> J. Vis. Exp. (52), e3080 (2011).</li></ol>

GFP 같은 형광 단백질과 세포를 시각화 할 때, 너무 많은 빛에 준비를 과잉 노출하지 않는 것이 중요합니다. 이 사진 손상 될 수 있습니다. 우리는 조명을위한 100W HBO 짧은 아크 수은 전구를 사용하며, 우리는 또한 0.8 (채도 ND 필터 0.3과 0.5)의 중간 밀도 (ND)을 ​​사용합니다. 청소 좋은 가시성의 품질을 판단 할 수 있도록하는 것은 매우 중요합니다. 따라서, ND 필터는 여러 번에 20 s의 짧은 기간 동?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 에이전트 / 항목 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 단백 분해 효소 타입 XIV </td><td> 시그마 알드리치 USA </td><td> P5147 </td></tr><tr><td> Microfil 유연한 주입 바늘 </td><td> 세계 정밀 계측기 USA </td><td> MF28G-5 </td></tr><tr><td> 붕규산 유리 모세 혈관, OD 1.5 mm, ID 1.0 mm, 아니 필라멘트 </td><td> 세계 정밀 계측기 USA </td><td> PG52151-4 </td></tr><tr><td> DiI </td><td> Invitrogen USA </td><td> D3899 </td></tr><tr><td> Sylgard 엘라스토머 키트 184 (다우 코닝) </td><td> <a href="http://www.ellsworth.com" target="_blank">www.ellsworth.com</a> </td><td> 184 SIL ELAST KIT </td></tr><tr><td> ND 필터 세트 (언 마운트) </td><td> 크로마 </td><td> 22000b 시리즈 </td></tr><tr><td> 전극 홀더 1-HL-U </td><td> 모lecular 장치 </td><td> 1-HL-U </td></tr></tbody></table>

preparation of drosophila central neurons for in situ patch clamping

짧은 세대 시간 및 손쉬운 유전자 기술은 과일 파리 Drosophila melanogaster 기초 신경 과학 연구의 훌륭한 유전자 모델을 확인합니다. 그들은 neuronal 흥분을 중재 이후 이온 채널은 모든 행동의 기초입니다. 복제 제 1 전압 개폐 이온 채널은 Drosophila 전압 개폐 칼륨 채널 쉐이커 1,2했다. 신경계 기능에 대한 이온 채널과 막 흥분의 역할을 이해하는 방향으로는 현장 패치 클램프 녹음에서와 Drosophila에서 강력한 유전 도구를 사용할 수 결합 할 때 유용합니다. 수년 동안 이러한 녹음은 Drosophila의 CNS의 작은 크기에 방해되었습니다. 또한, glia 및 콜라겐으로 만든 강력한 집은 중앙 뉴런에 패치 피펫 액세스에 대한 장애물을 형성. 이 집의 제거는 성인 Drosophila의 CNS에서 뉴런의 패치 클램프 녹음에 필요한 전제 조건이다. 최근 몇 년과학자들은 성인 뇌 3,4 및 배아 5,6, 애벌레의 7,8,9,10, 그리고 성인 Drosophila 11,12,13,14의 복부 신경 코드를 뉴런에서 현장 패치 클램프 녹음에서 수행 할 수있었습니다. 안정적인 기가 - 씰은 좋은 패치의 주요 전제 조건이며, 누설 전류를 방지하기 위해 세포막과 패치 피펫의 깨끗한 접촉에 따라 달라집니다. 따라서 성인 Drosophila의 뉴런에서 현장 패치 클램프 녹음에서 전체 셀 철저하게 세척해야합니다. 첫 번째 단계에서, ganglionic 집은 효소 처리 할 수​​ 있으며 기계적으로 대상 셀에 액세스 할 수 있도록하기 위해 제거. 두 번째 단계에서, 세포막은 glia, 콜라겐 또는 기타 자료의 어떤 항목은 기가 - 씰 형성을 방해하지 수 있도록 연마되어야한다. 이 문서는 체세포의 전체 C의 Drosophila 복부 신경 코드, 비행 motoneuron 5 (MN5 15)에서 확인 중앙 신경 세포를 준비하는 방법에 대해 설명합니다예쁜 패치 클램프 녹음. 신경 세포의 식별 및 가시성이 MN5에서 GFP의 대상 표현에 의해 달성된다. 우리는 패치 클램프 기술 자체를 설명하는 것을 목표로하지 않습니다.

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Preparation of Drosophila Central Neurons for in situ Patch Clamping (Video) | JoVE 

현장 패치에 클램프 녹음은 그대로 회로의 뉴런의 electrophysiological 특성에 사용됩니다. CNS는 작고 강력한 피복에 둘러싸여 있기 때문에 Drosophila 유전자 모델 패치를 고정으로 어렵습니다. 이 문서는 이후의 패치 클램프 녹음의 집과 깨끗한 뉴런을 제거 할 수있는 절차에 대해 설명합니다.

의 작성<em&gt; Drosophila</em에 대한&gt; 중부 뉴런<em&gt; 현장에서</em&gt; 패치 클램핑

Short generation times and facile genetic techniques make the fruit fly Drosophila melanogaster an excellent genetic model in fundamental neuroscience ...

Research

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