Name: engineering skeletal muscle tissues from murine myoblast progenitor cells and application of electrical stimulation
Uploaded: 2013-03-19T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות לYabin וו עבור culturing הרקמות המוצגות באיור 2, התמונה צולמה על ידי ברט ואן Overbeeke. העבודה נתמכת כלכלית על ידי SenterNovem, המענק 42022 ISO.

1. תרבות של תאי Murine היצמדות מוליד או C2C12 תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בודד תאים בהתאם לפרוטוקול שפורסם תחילה על ידי שפר ועמיתיו 10, ומאוחר יותר בעיבוד של קולינס ואח&#39;. בונן 11 ואח&#39; 12. ולאחסן אותם בחנקן נוזלי. זה דורש ?...

<ol>
	<li>Langelaan, M. L. P., Boonen, K. J. M., Polak, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meet+the+new+meat:+tissue+engineered+skeletal+muscle.">Meet the new meat: tissue engineered skeletal muscle.</a> Trends Food Sci. Tech. 21 (2), 59-66 (2010).</li><li>Shansky, J., Chromiak, J., Tatto, M., Vandenburgh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+tissue+engineering+skeletal+muscle+organoids+in+vitro.">A simplified method for tissue engineering skeletal muscle organoids in vitro.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Animal. 33 (9), 659-661 (1997).</li><li>Vandenburgh, H., Del Tatto, M., Shansky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+skeletal+muscle+organoids+for+reversible+gene+therapy.">Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).</li><li>Yaffe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retention+of+differentiation+potentialities+during+prolonged+cultivation+of+myogenic+cells.">Retention of differentiation potentialities during prolonged cultivation of myogenic cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 61 (2), 477-483 (1968).</li><li>Rando, T. A., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+myoblast+purification,+characterization,+and+transplantation+for+cell-mediated+gene+therapy.">Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy.</a> J. Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).</li><li>Koning, M., Werker, P. M. N., vander Schaft, D. W. J., Bank, R. A., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-1+and+MicroRNA-206+Improve+Differentiation+Potential+of+Human+Satellite+Cells:+A+Novel+Approach+for+Tissue+Engineering+of+Skeletal+Muscle.">MicroRNA-1 and MicroRNA-206 Improve Differentiation Potential of Human Satellite Cells: A Novel Approach for Tissue Engineering of Skeletal Muscle.</a> Tissue Eng. Part A. , (2011).</li><li>Darabi, R., Pan, W., Bosnakovski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+myogenic+engraftment+from+mouse+iPS+cells.">Functional myogenic engraftment from mouse iPS cells.</a> Stem Cell Rev. 7 (4), 948-957 (2011).</li><li>Langelaan, M. L. P., Boonen, K. J. M., Rosaria-Chak, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+maturation+by+electrical+stimulation:+Differences+in+response+between+C2C12+and+primary+muscle+progenitor+cells.">Advanced maturation by electrical stimulation: Differences in response between C2C12 and primary muscle progenitor cells.</a> J. Tissue Eng. Regen. Med. 5 (7), 529-539 (2011).</li><li>van der Schaft, D., van Spreeuwel, A. C., van Assen, H. C., Baaijens, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanoregulation+of+vascularization+in+aligned+tissue+engineered+muscle;+a+role+for+VEGF.">Mechanoregulation of vascularization in aligned tissue engineered muscle; a role for VEGF.</a> Tissue Eng. Part A. , (2011).</li><li>Shefer, G., Wleklinski-Lee, M., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+satellite+cells+can+spontaneously+enter+an+alternative+mesenchymal+pathway.">Skeletal muscle satellite cells can spontaneously enter an alternative mesenchymal pathway.</a> J. Cell. Sci. 117 (Pt. 22), 5393-5404 (2004).</li><li>Collins, C. A., Olsen, I., Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+function,+self-renewal,+and+behavioral+heterogeneity+of+cells+from+the+adult+muscle+satellite+cell+niche.">Stem cell function, self-renewal, and behavioral heterogeneity of cells from the adult muscle satellite cell niche.</a> Cell. 122 (2), 289-301 (2005).</li><li>Boonen, K. J. M., Rosaria-Chak, K. Y., Baaijens, F. P. T., van der Schaft, D. W. J., Post, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+environmental+cues+from+the+satellite+cell+niche:+optimizing+proliferation+and+differentiation.">Essential environmental cues from the satellite cell niche: optimizing proliferation and differentiation.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 296 (6), C1338-C1345 (2009).</li><li>Li, Y., Pan, H., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+Stem+Cells+from+Soft+Musculoskeletal+Tissues.">Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues.</a> J. Vis. Exp. (41), e2011 (2010).</li><li>Boonen, K. J. M., Langelaan, M. L. P., Polak, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+combined+mechanical+stimulation+protocol:+Value+for+skeletal+muscle+tissue+engineering.">Effects of a combined mechanical stimulation protocol: Value for skeletal muscle tissue engineering.</a> J. Biomech. 43 (8), 1514-1521 (2010).</li><li>Gawlitta, D., Boonen, K. J. M., Oomens, C. W. J., Baaijens, F. P. T., Bouten, C. V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+serum-free+culture+conditions+on+skeletal+muscle+differentiation+in+a+tissue-engineered+model.">The influence of serum-free culture conditions on skeletal muscle differentiation in a tissue-engineered model.</a> Tissue Eng. Part A. 14 (1), 161-171 (2008).</li><li>Koning, M., van Luijn, M., van der Schaft, D. W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+formation+and+engraftment+In+vivo+is+independent+of+preconditioning+In+vitro+with+HUVEC.">Human skeletal muscle formation and engraftment In vivo is independent of preconditioning In vitro with HUVEC.</a> , (2013).</li><li>Levenberg, S., Rouwkema, J., Macdonald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+vascularized+skeletal+muscle+tissue.">Engineering vascularized skeletal muscle tissue.</a> Nat. Biotechnol. 23 (7), 879-884 (2005).</li><li>Koffler, J., Kaufman-Francis, K., Yulia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+vascular+organization+enhances+functional+integration+of+engineered+skeletal+muscle+grafts.">Improved vascular organization enhances functional integration of engineered skeletal muscle grafts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (36), 14789-14794 (2011).</li></ol>

הנדסת רקמות שריר יש פוטנציאל גדול לשימוש כמודל מחלה, לסריקת תרופות וברפואת רגנרטיבית לייצור בשר. עם זאת, הדרישות ליישומים אלה משתנות. אנחנו בחרנו לעבוד עם שילוב של קולגן וmatrigel, כי קולגן מאפשר יישור תאים וכי תאי אב ההיצמדות דורשים נוכחות של חלבונים שמקורם בממברנה מרתף...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> גורם Matrigel צמיחה מופחתת </td><td> Beckton ודיקינסון </td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM (רמת סוכר גבוה) * </td><td> Gibco </td><td> 42430 </td><td></td></tr><tr><td> המתקדם DMEM </td><td> Gibco </td><td> 12491 </td><td></td></tr><tr><td> סוס סרום </td><td> Gibco </td><td> 65050-122 </td><td></td></tr><tr><td> סרום שור עוברי </td><td> גריינר </td><td> 758075 </td><td></td></tr><tr><td> 0.45-0.22 מיקרומטר מזרק מסנן * </td><td> Whatmann (לייכר וScheull) </td><td> 10462100 </td><td></td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Gibco </td><td> 25030024 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> Gibco </td><td> 10378016 </td><td></td></tr><tr><td> Amphotericin </td><td> Gibco </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> פלסטיק תרבות </td><td> גריינר </td><td></td><td> כולל צלוחיות תרבות וטפטפות </td></tr><tr><td> תמצית עובר אפרוח </td><td> ארצות הברית ביולוגית </td><td> C3999 </td><td></td></tr><tr><td> פסטר פיפטה * </td><td> Hilgenberg </td><td></td><td> פסטר pipettes, עם התכווצות, עם כותנת L, פתוח טיפ: 230 מ&quot;מ בקוטר קצה 0,9 - 1,1 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> פסטר פיפטה * </td><td> Hilgenberg </td><td></td><td> פסטר pipettes, עם התכווצות, עם כותנת L, פתוח טיפ: 230 מ&quot;מ בקוטר קצה 1,4 - 1,6 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> פסטר פיפטה </td><td> VWR </td><td> 612-1702 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase סוגי* </td><td> סיגמא </td><td> C0130-16 </td><td></td></tr><tr><td> מסננת תא מיקרומטר 40 * </td><td> BD פלקון </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> מחט 19G </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> אלסטומר </td><td> Dow Corning תאגיד </td><td> 3097358-1004 </td><td> Silastic MDX 4-4210 # </td></tr><tr><td> אשפרה סוכן </td><td> Dow Corning תאגיד </td><td></td><td> Silastic MDX 4-4210 # </td></tr><tr><td> סקוטש </td><td> חנות רגילה </td><td></td><td> אתה יכול לקנות את זה בחנות רגילה, יש להשתמש בצד הרך בלבד </td></tr><tr><td> קולגן סוג I, זנב חולדה </td><td> BD Biosciences </td><td> 3544236 </td><td></td></tr><tr><td> הפייסר תרבות EP-C-Pace </td><td> Ionoptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מנות התרבות 6-כן לגירוי חשמלי </td><td> Beckton דיקינסון-פלקון </td><td> BD פלקון # 353846 </td><td></td></tr><tr><td> אלקטרודות צלחת תרבות C-Dish </td><td> Ionoptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * דרוש לבידוד של תאים (נקודה 1.1) # יחד בערכה 1 </td></tr></tbody></table>

engineering skeletal muscle tissues from murine myoblast progenitor cells and application of electrical stimulation

רקמות שריר מהונדס יכולות לשמש למספר מטרות שונות, הכוללת את הייצור של רקמות לשימוש כמודל מחלה במבחנה, למשל ללמוד כיבי לחץ, ולרפואת רגנרטיבית כחלופת בשר 1. מבני השרירים הראשונים שדווחו 3D נעשו לפני שנים רבות וחלוץ בתחום הם Vandenburgh ועמיתי 2,3. שיפורים שנעשה בהנדסת רקמת שריר הם לא רק תוצאה מהעלייה העצומה בידע של גורמים ביוכימיים, תאי גזע ותאי אב, אבל הם במבוססים בעיקר על תובנה שנרכשו על ידי חוקרים כי גורמים פיסיים משחקים תפקיד חיוני בשליטה על התנהגות תא ו רקמת פיתוח. שריר מהונדס מדינה-of-the-art בונה כיום מורכב ממבנים הידרוג תא מאוכלסים. במעבדה שלנו אלה בדרך כלל מורכבים מתאי Murine היצמדות progenitor, מבודדים מרירי גפיים אחוריים Murine או קו תא היצמדות עכברי C2C12, mixed בתערובת של קולגן / Matrigel ומצופה בין שתי נקודתי עיגון, מחק את רצועות השריר. תאים אחרים עשויים להיחשב גם כן, שורות תאים חלופיות כגון כגון L6 myoblasts חולדה 4, תאי שריר הילוד נגזרים progenitor 5, תאים שמקורם ברקמות שריר בוגרים ממינים אחרים, כגון אדם או 6 תאי גזע pluripotent מושרים אפילו (תאי iPS) 7 . contractility הסלולרי גורם ליישור של התאים לאורך הציר הארוך של מבנה 8,9 וההתמיינות של תאי אב השריר לאחר כשבוע של התרבות. יתר על כן, היישום של גירוי חשמלי יכול לשפר את התהליך של התמיינות במידה מסוימת 8. בגלל גודלו המוגבל (8 X 2 X 0.5 מ&quot;מ) רקמה המלאה ניתן לנתח באמצעות מיקרוסקופיה confocal לפקח כדאיות למשל, בידול ויישור תא. בהתאם ליישום הספציפי בדרישות לעבודות ההנדסהרקמת שריר אדומה תשתנה; שימוש דוגמה לרפואת רגנרטיבית דורש גמלון גודל רקמות וכלי הדם, ואילו לשמש כחלופת תרגום בשר למינים אחרים הוא הכרחי.

המוצר הסופי יהיה בונת שריר, שהוזכרה באיור 3. גודל הרקמה יהיה כ 8 מ&quot;מ ארוך, 2 מ&quot;מימ רוחב ו 0.5 מ&quot;מ עובי. גירוי חשמלי במהלך הבידול יהיה לשנות את הביטוי של שרשרת הכבדה isoforms השרירן, אך אינו משפר את תהליך הבידול מאוד כמו הנגרם על ידי מדיום ההתמיינות 8, אבל גירוי חש...

Watch this Scientific Journal Video about Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation at JoVE.com

Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation

רקמת שריר מהונדסת יש פוטנציאל גדול ברפואת רגנרטיבית, כמודל מחלה וגם כמקור חלופי לבשר. כאן אנו מתארים ההנדסיים של מבנה שרירים, במקרה זה מתאי עכבר והיצמדות לאב, והגירוי על ידי פולסים חשמליים.

רקמות שריר שלד הנדסה מתאי Murine היצמדות מולידו ויישום של גירוי חשמלי

Engineered muscle tissues can be used for several different purposes, which include the production of tissues for use as a disease model in vitro, e.g. to ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Micro-tissues using Modules of Collagen Gel Containing Cells

ייצור של מיקרו-רקמות באמצעות מודולים של קולגן ג&#39;ל התאים המכילים

This protocol describes the fabrication of a type of micro-tissues called modules.  The module approach generates uniform, scalable and vascularized ...

Engineering Fibrin-based Tissue Constructs from Myofibroblasts and Application of Constraints and Strain to Induce Cell and Collagen Reorganization

בונה הנדסת רקמות מבוססת הפיברין מmyofibroblasts ויישום של אילוצים ומתח כדי לגרום לתא וקולגן ארגון (בעניין)

Collagen content and organization in developing collagenous tissues can be influenced by local tissue strains and tissue constraint. Tissue engineers aim ...

Electrospun Fibrous Scaffolds of Poly(glycerol-dodecanedioate) for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

Electrospun Fibrous Scaffolds of Polyglycerol-dodecanedioate for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

Electrospun סיבי פיגומים של פולי (גליצרול-dodecanedioate) להנדסה עצבית רקמות מתאי גזע עובריים בעכבר

For tissue engineering applications, the preparation of biodegradable and biocompatible scaffolds is the most desirable but challenging task. &#160;Among ...

Measurement of Maximum Isometric Force Generated by Permeabilized Skeletal Muscle Fibers

מדידה המרבית איזומטרי הכוח שנוצרה על ידי סיבי שריר שלד permeabilized

Analysis of the contractile properties of chemically skinned, or permeabilized, skeletal muscle fibers offers a powerful means by which to assess muscle ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

הנדסה תלת מימדי רקמות אפיתל Embedded בתוך מטריקס

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Cardiac Muscle-cell Based Actuator and Self-stabilizing Biorobot - PART 1

תא שריר לב מבוסס מפעיל ומייצב עצמי ביורובוט - חלק 1

Biological machines often referred to as biorobots, are living cell- or tissue-based devices that are powered solely by the contractile activity of living ...

Cardiac Muscle Cell-based Actuator and Self-stabilizing Biorobot - Part 2

שריר הלב מבוססי תא מפעיל ומייצב עצמי ביורובוט - חלק 2

In recent years, hybrid devices that consist of a living cell or tissue component integrated with a synthetic mechanical backbone have been developed. ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Vascularized Microfluidic Bioprinting עבור הנדסת רקמות, Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

שתי שיטות Decellularization של רקמות הצמח ליישומים הנדסת רקמות

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Simultaneous Electrical and Mechanical Stimulation to Enhance Cells' Cardiomyogenic Potential

גירויים חשמליים ומכניים בו זמנית כדי לשפר את פוטנציאל Cardiomyogenic של תאים

Cardiovascular diseases are the leading cause of death in developed countries. Consequently, the demand for effective cardiac cell therapies has motivated ...