Name: tissue engineering of the intestine in a murine model
Uploaded: 2012-12-01T14:00:00
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Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, e Frédéric G. Sala sono supportati dal California Institute for Regenerative Medicine (CIRM), i numeri di concedere RN2-00946-1 (TCG) e TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer è una Società di Chirurgia dell&#39;Università Ethicon studioso. Yashuhiro Torashima è finanziato da un ospedale pediatrico Fellowship Los Angeles Saban Research Career Development Institute.

1. Organoid unità di preparazione <ol><li> Strumenti adeguati per la dissezione del mouse (forbici e pinze) devono essere sterilizzati in autoclave. </li><li> Umanamente eutanasia il mouse donatore secondo protocolli locali IACUC. Assicurarsi che l&#39;animale è morto prima di procedere. </li><li> Fare una incisione mediana per accedere alla cavità peritoneale. Lembi cutanei può essere riflessa come necessario per migliorare l&#39;esposizione. </li><li> Sventrare il piccolo intestino e dividerlo appena distalmente...

<ol>
	<li>Grikscheit, T. C., Siddique, A., Ochoa, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+small+intestine+improves+recovery+after+massive+small+bowel+resection.">Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection.</a> Ann. Surg. 240, 748-754 (2004).</li><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+bowel+syndrome:+epidemiology+and+etiology.">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Sem. Ped. Surg. 19, 3-9 (2010).</li><li>Evans, G. S., Flint, N., Somers, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+method+for+the+preparation+of+rat+intestinal+epithelial+cell+primary+cultures.">The development of a method for the preparation of rat intestinal epithelial cell primary cultures.</a> J. Cell Sci. 101, 219-231 (1992).</li><li>Sala, F. G., Matthews, J. A., Speer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicellular+approach+forms+a+significant+amount+of+tissue-engineered+small+intestine+in+the+mouse.">A multicellular approach forms a significant amount of tissue-engineered small intestine in the mouse.</a> Tiss. Eng. Part A. 17, 1841-1850 (2011).</li><li>Speer, A. L., Sala, F. G., Matthews, J. A., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+tissue-engineered+stomach+demonstrates+epithelial+differentiation.">Murine tissue-engineered stomach demonstrates epithelial differentiation.</a> J. Surg. Res. 171, 6-14 (2011).</li><li>Haxhija, E. Q., Yang, H., Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cell+proliferation+is+dependent+on+the+site+of+massive+small+bowel+resection.">Intestinal epithelial cell proliferation is dependent on the site of massive small bowel resection.</a> Pediatr. Surg. Int. 23, 379-390 (2007).</li><li>Zhao, L., Cheng, Z., Dhall, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+corrective+pullthrough+surgery+in+a+mouse+model+of+Hirschsprung's+disease.">A novel corrective pullthrough surgery in a mouse model of Hirschsprung's disease.</a> J. Pediatr. Surg. 44, 759-766 (2009).</li><li>Petrosyan, M., Guner, Y. S., Williams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+regarding+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis.">Current concepts regarding the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Ped. Surg. Int. 25, 309-318 (2009).</li><li>Shew, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+concerns+in+malrotation+and+midgut+volvulus.">Surgical concerns in malrotation and midgut volvulus.</a> Ped. Radiol. 39, S167-S171 (2009).</li><li>Sampietro, G. M., Corsi, F., Maconi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+study+of+long-term+results+and+prognostic+factors+after+conservative+surgery+for+small+bowel+Crohn's+disease.">Prospective study of long-term results and prognostic factors after conservative surgery for small bowel Crohn's disease.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, 183-191 (2009).</li><li>Klempnauer, J., Grothues, F., Bektas, H., Pichlmayr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+results+after+surgery+for+acute+mesenteric+ischemia.">Long-term results after surgery for acute mesenteric ischemia.</a> Surgery. , 121-239 (1997).</li><li>Fitzgibbons, S. C., Jones, B. A., Hull, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+biopsy-proven+parenteral+nutrition-associated+liver+fibrosis+and+biochemical+cholestasis+in+children+with+short+bowel+syndrome.">Relationship between biopsy-proven parenteral nutrition-associated liver fibrosis and biochemical cholestasis in children with short bowel syndrome.</a> J. Ped. Surg. 45, 95-99 (2010).</li><li>Spencer, A. U., Kovacevich, D., McKinney-Barnett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+short+bowel+syndrome:+the+cost+of+comprehensive+care.">Pediatric short bowel syndrome: the cost of comprehensive care.</a> Am. J. Clin. Nutr. 88, 1552-1559 (2008).</li><li>Kato, T., Tzakis, A. G., Selvaggi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+and+multivisceral+transplantation+in+children.">Intestinal and multivisceral transplantation in children.</a> Ann. Surg. 243, 756-766 (2006).</li><li>Reyes, J., Bueno, J., Kocoshis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+intestinal+transplantation+in+children.">Current status of intestinal transplantation in children.</a> J. Ped. Surg. 33, 243-254 (1998).</li></ol>

Vi presentiamo un protocollo per la produzione di tessuti ingegnerizzati intestino nel topo utilizzando un unità-on-scaffold approccio organoid. Le fasi più critiche sono quelle della preparazione organoid unità. Bisogna fare attenzione a pulire in modo adeguato e meccanicamente elaborare il tessuto, ma la stessa cura deve essere presa per non overdigest o overtriturate le unità organoid dopo la digestione viene eseguita (passo 1.11). Se questo è fatto, le unità organoid può essere ridotto a singole cellule, che ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 114170-112 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiotico-antimicotica 100X </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td> Dispasi </td><td> Gibco </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenasi tipo 1 </td><td> Worthington </td><td> LS004194 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM glucosio Alta 1X </td><td> Gibco </td><td> 11995-065 </td><td></td></tr><tr><td> Di calore FBS inattivato </td><td> Invitrogen </td><td> 16140-071 </td><td></td></tr><tr><td> Biofelt 100% PGA </td><td> Concordia Medical </td><td> FELT01-1005 </td><td> Per la preparazione del polimero, come in rif.4 </td></tr><tr><td> Poli-L-lattico </td><td> Durect </td><td> B6002-1 </td><td> Per la preparazione del polimero, come in rif. 4 </td></tr><tr><td> Collagene di tipo I, coda di topo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3867-1VL </td><td> Per la preparazione del polimero, come in rif. 4 </td></tr><tr><td> Ketoprofene 100 mg / ml </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td> 71-cheto-100-50 </td><td></td></tr><tr><td> LabDiet 5001 roditore chow </td><td> LabDiet </td><td> 5001 </td><td></td></tr><tr><td> Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP </td><td> Hi-Tech Pharmacal </td><td> 50383-824-16 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurano, USP </td><td> Phoenix Pharmaceuticals </td><td> 57319-507-06 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue engineering of the intestine in a murine model

Dell&#39;ingegneria tissutale piccolo intestino (TESI) è stato utilizzato con successo per salvare i ratti Lewis dopo massiccia resezione dell&#39;intestino tenue, con conseguente ritorno al peso pre-operatorie entro 40 giorni. 1 negli esseri umani, massiccia resezione del piccolo intestino può causare sindrome da intestino corto, un malassorbimento funzionale stato che conferisce una significativa morbidità, mortalità e costi sanitari tra cui la dipendenza nutrizione parenterale, insufficienza epatica e cirrosi, e la necessità di trapianti di organi multiviscerale. 2 In questo lavoro si descrivono e documentano il nostro protocollo per la creazione di tessuti ingegnerizzati intestino in un modello murino con una unità multicellulare organoid-on-scaffold approccio. Unità Organoid sono aggregati multicellulari derivanti dall&#39;intestino che contengono elementi sia delle mucose e mesenchimali, 3 il rapporto tra che conserva l&#39;intestinale nicchia delle cellule staminali. 4 Nella ricerca in corso e future, la transizione della nostra tecnica nelladel mouse consentirà di indagine dei processi che intervengono durante la formazione TESI utilizzando gli strumenti disponibili transgeniche in questa specie. 5 La disponibilità di ceppi di topi immunocompromessi inoltre ci permette di applicare la tecnica di tessuto intestinale umano e ottimizzare la formazione di TESI umana come xenotrapianto del mouse prima della sua transizione verso gli esseri umani. Il nostro metodo utilizza le buone prassi di fabbricazione (GMP) reagenti e materiali che sono già stati approvati per l&#39;uso in pazienti umani, e offre quindi un vantaggio significativo rispetto agli approcci che si basano su tessuti animali decellularizzato. L&#39;obiettivo finale di questo metodo è la sua traduzione per gli esseri umani come una strategia di medicina rigenerativa terapeutico per la sindrome dell&#39;intestino corto.

La figura 1 mostra uno schema generale per il protocollo qui documentato. Il risultato finale di questo protocollo è una struttura sferica del globo o tissutale intestino murino con un lume, mucosa, sottomucosa, muscolare e circostante. Figura 2A mostra un globo tipico rispetto ad un polimero di partenza patibolo. Figura 2B mostra lo stesso costrutto bruscamente bivalved di rivelare le sue lumen. Figura 3 illustra un ematossilina / eosina-stained paraf...

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Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Questo articolo e il video di accompagnamento presentare il nostro protocollo per la generazione di tessuto ingegnerizzato intestino nel topo, utilizzando un organoid unità-on-scaffold approccio.

L&#39;ingegneria dei tessuti del colon in un modello murino

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Research

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