Name: tissue engineering of the intestine in a murine model
Uploaded: 2012-12-01T14:00:00
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Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, y Frédéric G. Sala son apoyados por el Instituto de Medicina Regenerativa de California (CIRM), números de concesión RN2-00946-1 (TCG) y TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer es una Sociedad de Cirujanos de la Universidad de Ethicon erudito. Yashuhiro Torashima es financiado por un Hospital de Niños de Los Angeles Fellowship Saban Research Institute de Desarrollo Profesional.

1. Unidades de Preparación organoide <ol><li> Instrumentos apropiados para la disección del ratón (tijeras y pinzas) debe ser esterilizado por autoclave. </li><li> Humanamente sacrificar al ratón donante de acuerdo con los protocolos locales IACUC. Asegúrese de que el animal está muerto antes de continuar. </li><li> Hacer una incisión de línea media para tener acceso a la cavidad peritoneal. Los colgajos de piel se puede reflejar como sea necesario para mejorar la exposición. </li><li> Eviscerar el intestino ...

<ol>
	<li>Grikscheit, T. C., Siddique, A., Ochoa, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+small+intestine+improves+recovery+after+massive+small+bowel+resection.">Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection.</a> Ann. Surg. 240, 748-754 (2004).</li><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+bowel+syndrome:+epidemiology+and+etiology.">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Sem. Ped. Surg. 19, 3-9 (2010).</li><li>Evans, G. S., Flint, N., Somers, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+method+for+the+preparation+of+rat+intestinal+epithelial+cell+primary+cultures.">The development of a method for the preparation of rat intestinal epithelial cell primary cultures.</a> J. Cell Sci. 101, 219-231 (1992).</li><li>Sala, F. G., Matthews, J. A., Speer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicellular+approach+forms+a+significant+amount+of+tissue-engineered+small+intestine+in+the+mouse.">A multicellular approach forms a significant amount of tissue-engineered small intestine in the mouse.</a> Tiss. Eng. Part A. 17, 1841-1850 (2011).</li><li>Speer, A. L., Sala, F. G., Matthews, J. A., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+tissue-engineered+stomach+demonstrates+epithelial+differentiation.">Murine tissue-engineered stomach demonstrates epithelial differentiation.</a> J. Surg. Res. 171, 6-14 (2011).</li><li>Haxhija, E. Q., Yang, H., Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cell+proliferation+is+dependent+on+the+site+of+massive+small+bowel+resection.">Intestinal epithelial cell proliferation is dependent on the site of massive small bowel resection.</a> Pediatr. Surg. Int. 23, 379-390 (2007).</li><li>Zhao, L., Cheng, Z., Dhall, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+corrective+pullthrough+surgery+in+a+mouse+model+of+Hirschsprung's+disease.">A novel corrective pullthrough surgery in a mouse model of Hirschsprung's disease.</a> J. Pediatr. Surg. 44, 759-766 (2009).</li><li>Petrosyan, M., Guner, Y. S., Williams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+regarding+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis.">Current concepts regarding the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Ped. Surg. Int. 25, 309-318 (2009).</li><li>Shew, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+concerns+in+malrotation+and+midgut+volvulus.">Surgical concerns in malrotation and midgut volvulus.</a> Ped. Radiol. 39, S167-S171 (2009).</li><li>Sampietro, G. M., Corsi, F., Maconi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+study+of+long-term+results+and+prognostic+factors+after+conservative+surgery+for+small+bowel+Crohn's+disease.">Prospective study of long-term results and prognostic factors after conservative surgery for small bowel Crohn's disease.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, 183-191 (2009).</li><li>Klempnauer, J., Grothues, F., Bektas, H., Pichlmayr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+results+after+surgery+for+acute+mesenteric+ischemia.">Long-term results after surgery for acute mesenteric ischemia.</a> Surgery. , 121-239 (1997).</li><li>Fitzgibbons, S. C., Jones, B. A., Hull, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+biopsy-proven+parenteral+nutrition-associated+liver+fibrosis+and+biochemical+cholestasis+in+children+with+short+bowel+syndrome.">Relationship between biopsy-proven parenteral nutrition-associated liver fibrosis and biochemical cholestasis in children with short bowel syndrome.</a> J. Ped. Surg. 45, 95-99 (2010).</li><li>Spencer, A. U., Kovacevich, D., McKinney-Barnett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+short+bowel+syndrome:+the+cost+of+comprehensive+care.">Pediatric short bowel syndrome: the cost of comprehensive care.</a> Am. J. Clin. Nutr. 88, 1552-1559 (2008).</li><li>Kato, T., Tzakis, A. G., Selvaggi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+and+multivisceral+transplantation+in+children.">Intestinal and multivisceral transplantation in children.</a> Ann. Surg. 243, 756-766 (2006).</li><li>Reyes, J., Bueno, J., Kocoshis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+intestinal+transplantation+in+children.">Current status of intestinal transplantation in children.</a> J. Ped. Surg. 33, 243-254 (1998).</li></ol>

Se presenta un protocolo para la producción de tejido de ingeniería en el intestino del ratón utilizando un organoide unidades-on-andamio enfoque. Los pasos más importantes son los de la preparación de unidades organoide. Se debe tener cuidado de limpiar adecuadamente y procesar mecánicamente el tejido, pero el mismo cuidado debe ser tomado para no overdigest o overtriturate las unidades de organoides después de la digestión se lleva a cabo (paso 1,11). Si se hace esto, las unidades de organoides se puede reduci...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 114170-112 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiótico-antimicótico 100X </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td> Dispasa </td><td> Gibco </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Colagenasa de tipo 1 </td><td> Worthington </td><td> LS004194 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM alto en glucosa 1X </td><td> Gibco </td><td> 11995-065 </td><td></td></tr><tr><td> FBS inactivado por calor </td><td> Invitrogen </td><td> 16140-071 </td><td></td></tr><tr><td> Biofelt 100% PGA </td><td> Médico Concordia </td><td> FELT01-1005 </td><td> Para la preparación del polímero como en la ref.4 </td></tr><tr><td> Poli-L-láctico </td><td> Durect </td><td> B6002-1 </td><td> Para la preparación del polímero como en la ref. 4 </td></tr><tr><td> El colágeno tipo I, cola de rata </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3867-1VL </td><td> Para la preparación del polímero como en la ref. 4 </td></tr><tr><td> Ketoprofeno 100 mg / ml </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td> 71-KETOI-100-50 </td><td></td></tr><tr><td> LabDiet 5001 comida para roedores </td><td> LabDiet </td><td> 5001 </td><td></td></tr><tr><td> Septra 200 mg / 40 mg por 5 ml, USP </td><td> Hi-Tech Pharmacal </td><td> 50383-824-16 </td><td></td></tr><tr><td> USP isoflurano, </td><td> Phoenix Pharmaceuticals </td><td> 57319-507-06 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue engineering of the intestine in a murine model

De tejido de ingeniería intestino delgado (TESI) ha sido utilizado con éxito para rescatar a ratas Lewis después de la resección masiva del intestino delgado, resultando en retorno a pesos preoperatorios en 40 días. 1 En los seres humanos, resección masiva del intestino delgado puede resultar en el síndrome del intestino corto, una malabsorción funcional Estado que confiere una significativa morbilidad, mortalidad y costes sanitarios, incluyendo la dependencia de nutrición parenteral, la insuficiencia hepática y cirrosis, y la necesidad de un trasplante de órganos multivisceral. 2 En este trabajo se describen y documentan nuestro protocolo para la creación de tejido modificado intestino en un modelo de ratón con un organoide multicelular unidades-on-andamio enfoque. Unidades de organoides son agregados multicelulares derivados del intestino que contienen elementos tanto de la mucosa y mesenquimales, 3 la relación entre el que conserva el nicho de células madre intestinal. 4 En la investigación en curso y futuros, la transición de nuestra técnica en laratón permitirá la investigación de los procesos que intervienen durante la formación de TESI mediante la utilización de las herramientas transgénicas disponibles en esta especie. 5 La disponibilidad de las cepas de ratón inmunocomprometidos también nos permitirá aplicar la técnica de tejido intestinal humano y optimizar la formación de TESI humana como un de ratón con xenoinjerto antes de su transición a los seres humanos. Nuestro método utiliza buenas prácticas de fabricación (GMP) reactivos y materiales que ya han sido aprobados para su uso en pacientes humanos, y por lo tanto ofrece una ventaja significativa sobre los enfoques que se basan en los tejidos animales descelularizados. El objetivo final de este método es su traducción a los seres humanos como una estrategia de medicina regenerativa terapéutico para el síndrome de intestino corto.

La Figura 1 muestra un esquema general para el protocolo documentado aquí. El resultado final de este protocolo es una estructura de globo esférico o de tejido de ingeniería intestino murino con un lumen, mucosa, submucosa, y rodea muscularis. Figura 2A muestra un globo típico en comparación con un polímero de partida andamio. Figura 2B muestra el mismo constructo bruscamente bivalvo para revelar su lumen. Figura 3 demuestra un hematoxilina / eosi...

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Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Este artículo y el vídeo de acompañamiento presentar nuestro protocolo para la generación de tejido de ingeniería intestino en el ratón, utilizando un organoide unidades-on-andamio enfoque.

Ingeniería de tejidos del intestino en un modelo murino

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

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