Name: patch clamp recordings in inner ear hair cells isolated from zebrafish
Uploaded: 2012-10-17T13:00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish at JoVE.com

بتمويل من NSF (0854551).

<ol>
	<li>Lewis, R. S., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-+and+ion-dependent+conductances+in+solitary+vertebrate+hair+cells.">Voltage- and ion-dependent conductances in solitary vertebrate hair cells.</a> Nature. 304, 538-5341 (1983).</li><li>Art, J. J., Fettiplace, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+of+membrane+properties+in+hair+cells+isolated+from+the+turtle+cochlea.">Variation of membrane properties in hair cells isolated from the turtle cochlea.</a> J. Physiol. 385, 207-242 (1987).</li><li>Sugihara, I., Furukawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+functional+aspects+of+two+different+types+of+hair+cells+in+the+goldfish+sacculus.">Morphological and functional aspects of two different types of hair cells in the goldfish sacculus.</a> J. Neurophysiol. 62, 1330-1343 (1989).</li><li>Lee, S., Briklin, O., Hiel, H., Fuchs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+inactivation+of+calcium+channels+in+cochlear+hair+cells+of+the+chicken.">Calcium-dependent inactivation of calcium channels in cochlear hair cells of the chicken.</a> J. Physiol. 583, 909-922 (2007).</li><li>Horn, R., Marty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscarinic+activation+of+ionic+currents+measured+by+a+new+whole-cell+recording+method.">Muscarinic activation of ionic currents measured by a new whole-cell recording method.</a> J. Gen. Physiol. 92, 145-159 (1988).</li><li>Rae, J. R., Cooper, K., Gates, P., Watsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+access+perforated+patch+recordings+using+amphotericin+B.">Low access perforated patch recordings using amphotericin B.</a> J. Neurosci. Meth. 37, 15-26 (1991).</li><li>Lumpkin, E. A., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Ca2++entry+through+mechanosensitive+channels+localizes+the+site+of+mechanoelectrical+transduction+in+hair+cells.">Detection of Ca2+ entry through mechanosensitive channels localizes the site of mechanoelectrical transduction in hair cells.</a> Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 92, 10297-10301 (1995).</li><li>Liang, J., Burgess, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gross+and+fine+dissection+of+inner+ear+sensory+epithelia+in+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Gross and fine dissection of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish (Danio rerio).</a> J. Vis Exp. 27, e1211 (2009).</li><li>Hudspeth, A. J., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+analysis+of+voltage-+and+ion-dependent+conductances+in+saccular+hair+cells+of+the+bull-frog,+Rana+catesbeiana.">Kinetic analysis of voltage- and ion-dependent conductances in saccular hair cells of the bull-frog, Rana catesbeiana.</a> J. Physiol. 400, 237-274 (1988).</li><li>Hudspeth, A. J., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+electrical+resonance+and+frequency+tuning+in+saccular+hair+cells+of+the+bull-frog,+Rana+catesbeiana.">A model for electrical resonance and frequency tuning in saccular hair cells of the bull-frog, Rana catesbeiana.</a> J. Physiol. 400, 275-297 (1988).</li><li>Parsons, T. D., Lenzi, D., Almer, W., Roberts, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-triggered+exocytosis+in+an+isolated+presynaptic+cell:+capacitance+measurements+in+saccular+hair+cells.">Calcium-triggered exocytosis in an isolated presynaptic cell: capacitance measurements in saccular hair cells.</a> Neuron. 13, 875-883 (1994).</li><li>Kim, M. -. H., Vickers, E., von Gersdorff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch-clamp+capacitance+measurements+and+Ca2++imaging+at+single+nerve+terminals+in+retinal+slices.">Patch-clamp capacitance measurements and Ca2+ imaging at single nerve terminals in retinal slices.</a> J. Vis Exp. 59, e3345 (2012).</li><li>Housley, G. D., Ashmore, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+the+action+of+acetylcholine+on+isolated+outer+hair+cells+of+the+guinea+pig+cochlea.">Direct measurement of the action of acetylcholine on isolated outer hair cells of the guinea pig cochlea.</a> Proc. R. Soc. Lond. B. 244, 161-167 (1991).</li><li>Nicolson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+hearing+and+balance+in+zebrafish.">The genetics of hearing and balance in zebrafish.</a> Ann. Rev. Genetics. 39, 9-22 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تشريح دقيق للأجهزة والعلاج لطيف نهاية الخلايا أمر بالغ الأهمية لنجاح العزلة صحية، سليمة وخلايا الشعر بالموقع الناحية الفسيولوجية. والانضمام إلى النصائح التالية ضمان النجاح: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فمن الأسهل للحصول على الخلايا السليمة من الأسماك الصغيرة (2-2.5 سم في الطول). أكبر الأسماك والعديد من قطرات الدهون التي تصور أكثر غامضة أثناء عملية التشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب توخي الحذر عند إزالة otoliths، الذي علا في خلايا الشعر. تجنب لمس الخلايا عند الاستيلاء على otoliths بالملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم الحصول على أفضل النتائج عندما يتم رفع وبقع قبيبات قبالة كما صفائح وخلايا ظهارة من triturated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نجد استخدام الشعر الكلب ليسحن الخلايا لتكون متفوقة على غيرها من الطرق، بما في ذلك استخدام الرموش الإنسان 7 التي ليست مدبب كما وأقل مرونة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال التصحيح تحامل، وتطبيق الضغط الايجابي لرانه الكهربائي لأنها تمر من خلال واجهة الهواء / الحل هو المهم للحفاظ على تلميح نظيفة. الافراج عن الضغط الايجابي لتمكين الخلية إلى &quot;القفز&quot; على القطب مهم أيضا. هذا الأسلوب مسح وحدة تخزين صغيرة من الأمفوتريسين المحتوية على الحل بعيدا عن الحافة، مما يزيد من احتمال تشكيل ختم gigaohm مع الخلية. في تجاربنا نحن نستخدم تقنية تسجيل التصحيح ثقب بدلا من تكوين خلية كاملة التقليدية بسبب هشاشة الخلايا. محاولة &quot;الذهاب خلية كاملة&quot; كثيرا ما يؤدي إلى فقدان ختم gigaohm. </li></ol> إن أسلوب الموصوفة هنا تسفر مئات من الخلايا شعر صحي لكل حيوان. لا يمكن أن يؤديها تقنية في درجة حرارة الغرفة ويتطلب أي معدات خاصة بعد تشريح المجهر. وكان تقرير سابق إن الرب في وصف تشريح الأذن الداخلية في الزرد باستخدام نهج بطني 8. هؤلاء المؤلفين تبين dissection من كله، بارافورمالدهيد الثابتة أجهزة الأذن الداخلية. نحن نشجع القارئ لمشاهدة هذا الفيديو للمقارنة بين الطرق التي نستخدمها. ميزة واحدة من الأساليب المقدمة هنا هو الحصول على الخلايا الحية المفيدة للتحقيقات الفسيولوجية. إلى جانب استخدامها في تجارب المشبك التصحيح لدراسة قنوات الجهد بوابات (كما هو موضح هنا) ويمكن تمديد استخدام هذه الخلايا لدراسة الرنين الخلية 9،10، ورصد إطلاق الناقل العصبي من خلال جعل القياسات السعة 11،12 والتحقيق تعديل العمليات العصبية الناجمة عن تفعيل قنوات بوابات يجند 13 وكذلك الاستفادة من ثروة من المعلومات التي يمكن استخلاصها من استخدام المسوخ التي تؤثر على كل من السمع والتوازن 14.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> حل اسم </td><td> وصفة </td></tr><tr><td> (أ) NZR (عادي اسماك الزرد رينغر) (مم) </td><td> 116 كلوريد الصوديوم، 2 بوكل، 2 CaCl 2، 3 الجلوكوز، 5 نا +-HEPES، ودرجة الحموضة 7.35. </td></tr><tr><td> (ب) NZR + Tricaine </td><td> NZR + 0.02٪ 3-أمينوبنزويك حمض السلفونات اثيل استر الميثان (سيغما A5040). </td></tr><tr><td> (ج) BSA + NZR </td><td> NZR + 0.4٪ الأبقار مصل الزلال (سيغما A2153). </td></tr><tr><td> (د) لوكاس (منخفضة الكالسيوم الحل + 2) (مم) </td><td> 100 كلوريد الصوديوم، 2 بوكل، 0.05 CaCl 2، 0،05 MgCl 2، 3 الجلوكوز، 30 نا +-HEPES، ودرجة الحموضة 7.35. </td></tr><tr><td> (ه) لوكاس + غراء </td><td> لوكاس + 0.05٪ L-السيستين (سيغما C1276) + غراء 0.2٪ (سيغما P3375). </td></tr><tr><td> (و) K +-الداخلية حل (مم) </td><td> 52 K 2 SO 4،38 بوكل، 1 K +-EGTA، 5 K +-HEPES، ودرجة الحموضة 7.3. </td></tr></tbody></table> الجدول 1. حلول.

patch clamp recordings in inner ear hair cells isolated from zebrafish

وقد وصفت التحليلات المشبك التصحيح من القنوات الجهد مسور في الخلايا الحسية الشعر معزولة عن مجموعة متنوعة من الأنواع سابقا 1-4 لكن هذا الفيديو يمثل أول تطبيق لتلك التقنيات إلى خلايا الشعر من الزرد. نحن هنا يبرهن على وجود طريقة لعزل صحي، وخلايا الشعر سليمة من جميع الأجهزة في نهاية الأذن الداخلية: كيس، والحوقلة، والقنوات الهلالية utricle. علاوة على ذلك، علينا أن نبرهن على التنوع في حجم خلية الشعر والصرف وإعطاء مثال لهذا النوع من التسجيلات المشبك التصحيح التي يمكن الحصول عليها. ميزة استخدام هذا النظام النموذجي الزرد على الآخرين نابع من توافر المسوخ الزرد أن تؤثر على كل من السمع والتوازن. في تركيبة مع استخدام خطوط المعدلة وراثيا وغيرها من التقنيات التي تستخدم التحليل الجيني والتلاعب، وعزل الخلايا الكهربية وطرق عرض هنا ينبغي تسهيل مزيد من التبصر في خلايا الشعر أدوار عيكمن في الوساطة هذه الطرائق الحسية.

Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish at JoVE.com

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish (Video) | JoVE

والغرض من هذا الفيديو هو إظهار إجراءات الحصول على صحي، وخلايا الشعر سليمة من الأجهزة الأذن الداخلية من الزرد الكبار ومن ثم استخدامها للدراسات المشبك التصحيح تهدف إلى تحديد خواص الفيزيائية الحيوية من القنوات الجهد بوابات بهم.

تسجيلات المشبك التصحيح في الأذن الداخلية خلايا الشعر المعزولة من اسماك الزرد

Patch  clamp analyses of the voltage-gated channels in sensory hair cells isolated  from a variety of species have been described previously1-4 but this  ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation (Video) | JoVE

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا العصبية في الشبكية ماوس إعداد غامق تكييفها شريحة

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish (Video) | JoVE

المقترنة تسجيلات المشبك من تصحيح للسيارات ، والخلايا العصبية في العضلات الهيكلية الهدف اسماك الزرد

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle.  ...

Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse (Video) | JoVE

بعد المشبكي التسجيلات في وارد الاتصال الانشعابيات القوقعة خلايا الشعر الداخلية : رصد النسخة عديد الحويصلات في الشريط المشبك

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry (Video) | JoVE

عزل LacZ - معربا عن خلايا من أنسجة الأذن الداخلية باستخدام الماوس التدفق الخلوي

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Gene Transfer to the Developing Mouse Inner Ear by In Vivo Electroporation

Gene Transfer to the Developing Mouse Inner Ear by In Vivo Electroporation (Video) | JoVE

نقل الجينات إلى الأذن الداخلية عن طريق تطوير ماوس<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; Electroporation

The mammalian inner ear has 6 distinct sensory epithelia: 3 cristae in the ampullae of the semicircular canals; maculae in the utricle and saccule; and ...

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents (Video) | JoVE

عزل الخلايا العصبية الحسية من<em&gt; Aplysia californica</em&gt; للحصول على التسجيلات المشبك التصحيح من التيارات الجلوتاميرجي

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable  history as a model of nervous system function, with particular significance in  studies ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells (Video) | JoVE

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا الجنينية الزرد ماوتنر

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons (Video) | JoVE

خلية كاملة تسجيلات التصحيح، المشبك من Morphologically- وحددت Neurochemically-الحصين Interneurons

GABAergic inhibitory interneurons play a central role within neuronal circuits of the brain. Interneurons comprise a small subset of the neuronal ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings (Video) | JoVE

الكهربية والمورفولوجية توصيف العصبية الحادة رقائق في الدماغ عن طريق شرائح الموثوقة التصحيح، المشبك التسجيلات

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices

Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices (Video) | JoVE

تسجيلات خلية كاملة التصحيح، المشبك في الدماغ شرائح

Whole-cell patch-clamp recording is an electrophysiological technique that allows the study of the&#160;electrical properties of a substantial part of the ...