Name: a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af NCTR / FDA.

Selvom det ikke fremgår af videoen blev rotterne først givet en overdosis på 300 mg / kg pentobarbital, hvilket resulterer i anæstesi på mindre end 3 min og derefter dræbt ved halshugning. Deres hjerner blev derefter hurtigt, men forsigtigt fjernet fra kraniet og afkølet i iskoldt normalt saltvand i 5 minutter. Det er vigtigt at lade hjernen cool for dette tidsrum før dissekering af MAV således at MAV kan adskilles fra overfladen af ​​cortex (toppen af ​​laget I). Hjernen blev derefter anbragt i bunden af ​​et glas petriskål hvilende på is, der var fuld (1 cm dybt) i iskoldt normalt saltvand eller 0,1 M natriumphosphat-pufret saltopløsning pH = 7,4. Alle dissektion sker med hjernen for det meste nedsænket i saltvand. 1. Fjernelse af pinealkirtlen <ol><li> Anbring hjernen dorsale side opad (i forhold til bunden af ​​petriskålen). Pinealkirtlen er placeret på den mest kaudale ventrale region mellem de to halvkugler lige rostral til tHan cerebellum (pineal fordybning), og er lige under eller på overfladen af ​​meninges over colliculi. Fjern pinealkirtlen først med to små bøjet spids pincet. Det er lyserød farve som cortex, men er ofte omgivet i resterne af blod og vaskulatur residual fra hjerne fjernelse. </li></ol> 2. Fjernelse af MAV <ol><li> Vend hjernen over &quot;på hovedet&quot; og adskille den vertebrale arterie, mindre arterier og meninges dækker pons fra meninges og vaskulatur i forhjernen. Fjernelse af forhjernen MAV startes derefter. Det er vigtigt at starte ventralt i dissektion processen. De store hovedfærdselsårer af kredsen af Willis, midterste cerebrale arterier (MCA) og forreste arterier er de stærkeste og tjene som &quot;stillads&quot;, hvorved de mindre overfladiske arterier og arterioler i pial Membranen kan derefter fjernes fra cortex med resten af ​​meninges. Se gennemgang af Scremin 7 for mmalm visuelle gengivelser og detaljer ved den cerebrale overflade vaskulaturen. </li><li> Begyndende med enten halvkugle, de små bøjet spids pincet bruge til at bryde den posteriore kommunikere arterie bare posterior til den interne carotis tidspunkt. Således adskiller mere anteriore og posteriore arterielle træer i forhjernen. Gentage den samme proces for den kontralaterale halvdel. </li><li> Gribning af MCA og den forreste arterie med pincet, træk forsigtigt i en anterior-dorsal retning, således at MAV dækker den ventrale anteriore cortex (piriform, olfaktoriske tuberkel) vippes over og omkring den olfaktoriske tarmkanalen. Dette fjerner meget af MAV dækker den forreste cortex (cingulated og orbital). </li><li> Drej hjernen på 45 til 90 ° vinkel til petriskålen. De laterale, mere anterior regioner i MAV omgiver de laterale corticale regioner (granulatform øsamfund, sekundær somatosensoriske og auditive cortex) kan frigøres fra cortex ved at tage fat i MCA og tilhørende specieserne og forsigtigt trække dorsalt langs cortex. Hvis det er nødvendigt, kan enderne af pincetten bruges til at løfte og frigøre de store arterier fra cortex under dissektion. </li><li> Nu fjerne de mere posteriore laterale regioner i MAV. (Bemærk, er det bedst at skifte fra en halvkugle til den anden under denne høst for at sikre, at MAV forbliver koldt og hydreret. Også, hvis modstand i befri MAV fra cortex er stødt på en halvkugle skifte til den kontralaterale halvdel midlertidigt og derefter gå tilbage til den oprindelige halvkugle senere.) </li><li> For at fjerne de dorsale områder af MAV omgiver den primære somatosensoriske og motor cortex vende brain dorsale side opad (i forhold til bunden af ​​petriskålen). For endelig at frigøre MAV fra hjerne, anvendes enderne af pincetten langs sagital sinus. Denne del af høstede MAV kan enten holdes midlertidigt i iskoldt saltvand, indtil afprøvning og analyse eller fryses til senere forarbejdning. OfteMAV dækker de posteriore / caudal områder af cortex (entorhinal, visuel og mest caudale auditive cortex) forbliver fastgjort til cortex. Dens fjernelse er vist senere i videoen, når MAV mellem retrosplenial cortex og overliggende colliculi dissekeres. </li></ol> 3. Fjernelse af plexus chorioideus <ol><li> Placer hjernen dorsale side op og holde på plads med de større pincet Skub de mindre pincet ned gennem midterlinjen mellem halvkugler og derefter bruge enderne til at punktere gennem cortex og corpus callosum (≈ -3,3 mm fra bregma) ind i toppen af midterlinjen af ​​hippocampus. </li><li> Bruge tangen til at trække cortex med callosum væk fra den dorsale hippocampus og septum, udsætter det meste af den laterale ventrikel. Plexus chorioideus kan lokaliseres og identificeres ved rød bølget afgrænser hovedarterie, der løber dens længde. Bruge de to ender af tangen at lirke sidevægge den tredje ventricle og forstørre det på det mest kaudale ende (≈ -4,3 mm fra bregma 8). </li><li> Ved hjælp af de små pincet, denne ende af plexus chorioideus free træk. Så gå til den meget forreste område mellem septum og caudatus / putamen (mest rostrale udstrækning, ≈ 1,6 mm fra Bregma) og med tangen udvide denne del af ventriklen og træk plexus chorioideus gratis. Udfør den samme procedure på den kontralaterale halvdel til opnåelse af den anden resterende choroid plexus. Igen væv kan enten holdes midlertidigt i iskoldt saltvand, indtil afprøvning og analyse eller fryses til senere forarbejdning. </li></ol> 4. Fjernelse af de resterende MAV i 3 rd ventrikel Liggende over Thalamus og Colliculi såvel som på de mere caudale områder af cortex, herunder Retrosplenial, auditiv og visuel Cortex <ol><li> Fjerne hele hippocampus fra begge halvkugler udsætter MAV over thalamus og colliculi. Fjernelsen afdenne del af MAV er langt mindre vanskelig end fjernelse af MAV over cortex. </li><li> Trække denne del af MAV fri ved at gribe større kar ligger over den forreste del af thalamus og forsigtigt trække kaudalt. Denne vaskulaturen er tilsluttet supra collicular netværket og leverer blod til den dorsale hippocampus og dorsal thalamus netværk. Træk det væk caudalt og gradvist fri af supracollicular nettet, indtil den når de sidste dele af den caudale arteriel cirkel vaskulatur. På dette tidspunkt skal mere omhu for at fjerne eventuelle posterior ventral MAV på overfladen af ​​den granulære retrosplenial, primære akustiske og visuelle cortex. Som med den anden del af MAV dækker mere forreste dele af cortex, kan dette væv enten opbevares midlertidigt i iskoldt saltvand, indtil afprøvning og analyse eller fryses til senere forarbejdning. Et eventuelt resterende posterior ventrale MAV høstes med denne anden MAV sektion bør fjernes end tilsat til den første dissekeret MAV sektion dækker cortex, hvis de skal analyseres separat. </li></ol> 5. Repræsentative resultater Når dissektion udføres korrekt, bør de resulterende MAV væv være i to intakte enheder vejer omkring 35 til 45 mg total. Den oprindeligt dissekeret MAV omgiver det meste af cortex bør veje omkring 25 mg og MAV dækker thalamus, bør colliculi og occipital cortex vejer omkring 15 mg. Det bør være let lyserød i farve fra det resterende blod i karrene. Den bilaterale choroid plexus høstet, i to intakte vævsprøver med hver vejede 1-2 mg. Skønt overskydende vand kan fjernes fra MAV før oplagring eller behandling ved hjælp af silkepapir som den, der anvendes i linser, for at undgå vævstab er det ikke en god idé at fjerne overskydende vand fra det dissekerede choroid plexus. Figur 1 blev genereret for sammenligne udtryk profil<html> es i tre regioner (striatum, parietal cortex og MAV) under kontrol under anvendelse af Agilent-014.879 Hele Rat Genome 4x44K 60mer oligonucleotid arrays (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA; NCBI GEO tiltrædelse # GPL7294, GSE23093 og GSE29733 der er til stede ved NCBI GEO repository). De to plots i figuren billedligt viser ekspression i 1) striatum sammenlignet med den parietale cortex og 2) MAV forhold til den parietale cortex. Det er klart, striatum og parietale cortex er meget nært beslægtet med hinanden end MAV. De data, der sammenligner chorioideus plexus med MAV vil blive præsenteret i en kommende publikation. Det er imidlertid sandsynligt, at udtrykket profiler i MAV og choroid plexus er tættere beslægtede med hinanden end de er til striatum og parietale cortex. Figur 2 viser differentiel genekspression respons på hypertermi (EIH) versus AMPH i MAV sammenlignet at kontrollere og hinanden. indhold &quot;&gt; Gen ekspression af mere end 11.000 gener med officielle NCBI gen symboler i MAV af kontroldyr blev sammenlignet med dem registreret i striatum og parietale cortex. Over 2000 af disse gener havde en 2,5 gang eller mere afvigende ekspression i MAV sammenlignet med de to neuronal-rige væv, og 550 gener havde en 10 gange større forskel i ekspression. lidt mere end 40% (253) af disse var gener med en reduceret ekspression af 10 gange eller mere i MAV og vedrørte neuronal funktion. Der var 343 gener med over en 10 ganges eller større ekspression i MAV sammenlignet med parietale cortex og striatum. Denne liste af gener, blev anvendt som et udgangspunkt, som til at bestemme gener med en meget høj berigelse i MAV. Table 1 indeholder gener med mere end 15 gange ekspression i MAV sammenlignet med parietale cortex og striatum og kategoriserer dem med hensyn til funktion. Mange af disse gener blev forbundet med det vaskulære system og / eller immunsystemet. Disse types af gener bør beriges omkring 5 - til 10 - fold til grund af den øgede vaskulatur selv og blod til stede i det. Men selv for gener med kendte almindelige vaskulære funktioner, en stigning på over 15-fold indikerer berigelse i MAV. Der var også antal gener med meget store fold ændringer af en, 1) ekstracellulære matrixproteiner (ikke specifikt vedrører vaskulatur), 2) opløst stof transportører og 3) lipid og retinsyre metabolisme. Samt, få vækst og differentiering gen eller transkriptionsfaktorer fundet. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figur 1. Sammenligning af genekspression i MAV med Parietal cortex og striatum. Volcano plot sammenligning af genekspressionsniveauer i parietale cortex og striatum (øverste afbildning) og den parietale cortex og MAV (nederste afbildning). De røde symboler betegner de gener, der er meget forskellige betweda regioner ved p &lt;0,05 og har en 1,5 gang eller mere differentiel ekspression mellem regionerne. De sorte symboler repræsenterer gener, som ikke afviger væsentligt mellem regioner (p&gt; 0,05) og er mindre end 1,5 gange afviger i ekspression. De lyserøde symboler angiver gener med mindre end en 1,5-fold forskel i ekspression, men statistisk signifikant forskellige ved p &lt;0,05. De gule symboler identificere gener, der har en 1,5 gang eller mere ekspression, men denne ændring ikke er statistisk signifikant ved p &lt;0,05. Forkortelser AMPH amfetamin EIH miljømæssigt-induceret hypertermi MAV meninges og tilhørende cerebrale vaskulatur Norm normothermic kontrollerer <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figur 2. Virkninger af hypertermi og amfetamin på genekspression i MAV. Volcano plots sammenlignergenekspressionsniveauer i MAV efter saltvand, EIH eller AMPH ved 3 timers tidspunktet. De røde symboler angiver de gener, der vurderes at være væsentligt anderledes, mens de sorte prikker / cirkler repræsenterer gener, som ikke afviger væsentligt mellem regionerne. Yderligere statistiske analyse blev anvendt til at verificere, hvilke ekspression forskelle mellem kontrol-og behandlinger var i virkeligheden statistisk signifikant. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Brain Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symboler </td><td fo:width="1.5in"> Vævsspecificitet eller indberettet Funktion (er) </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Anxa2 a, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vaskulatur &amp; Heart </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Ccl19, CD74 a, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Adh1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> CDH1, Col3a1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, Gpc3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Ekstracellulær matrix og celle-celle junctions </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR </td><td> Ion &amp; opløst stof Homeostasis </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Alx3, Cdkn1c, Foxc2, IGFBP2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Udvikling &amp; Transcription forordning </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Ukendt &amp; Diverse </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td&gt; <td> Anxa1 a, Angpt2, C6 a, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vaskulatur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, CD14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, FMOD, MGP, Nid2 </td><td> Ekstracellulær matrix og celle-celle junctions </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; opløst stof homeostase </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> BMP6, Casp12, DAB2, Folr1, IGF2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Udvikling &amp; Transcription forordning </td></tr><tr><td> 30 til 50 gange </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Ukendt &amp; Diverse </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf a, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, VTN </td><td> Vaskulatur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Adamtsl4, COL1A1, Crb3, DPT, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, FN1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, Timp3 </td><td> Ekstracellulær matrix og celle-celle junctions </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; opløst stof homeostase </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Udvikling &amp; Transcription forordning </td></tr><tr><td> 15 til 30 gange </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1R, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Ukendt &amp; Diverse </td></tr></tbody></table> * Gener, der indgår i tabellen, skal være både mere end 15-fold ovenstående udtryk i striatum og parietal cortex og 5-fold over baggrunden niveauer. Den nederste af de to forhold (MAV / striatum eller MAV / parietal cortex) for hvert gen er anvendt til gruppering. en Gener findes i endotelceller, men sandsynligvis også spille en vigtig rolle ved mediering af immunresponser. Tabel 1. Gener med en 15-fold * eller mere forøget ekspression i MAV forhold til striatum og parietale cortex.

<ol>
	<li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature.">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li><li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature,+striatum,+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure.">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li><li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology.">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li><li>Oldfield, B. J. M., Michael, J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 391 (1995).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li><li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions:+?+challenges+in+health+and+disease.">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li><li>Scremin, O. U., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 3 (1995).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1995).</li><li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion:+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity.">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+control+of+cerebral+circulation.">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, 25-33 (1985).</li><li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone.">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li><li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers.">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li><li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+Fluid+Transport:+a+Lymphatic+Perspective.">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li><li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate.">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li><li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans,+non-human+primates+and+other+mammalian+species.">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).</li><li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain.">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li><li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus.">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li><li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury.">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li><li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

Vi har intet at afsløre. Det arbejde, der præsenteres her ikke nødvendigvis repræsentere Food and Drug Administration.

Tekniske aspekter af MAV og choroid plexus dissektion Det er kritisk under dissektion af MAV at hjernen &quot;nedsænket&quot; meste af tiden i normalt saltvand eller natrium-phosphatpufret saltopløsning. Tillader MAV og cortex at dehydrere under dissektion vil resultere i MAV klæber tæt til kortikale lag I. Dette vil øge mængden af ​​cortexvæv høstet med MAV og / eller resulterer i manglende evne til at fjerne disse vedhængende MAV sektioner fra cortex. Også, tålmodighed er nødvendig under dissektion. Igen, hvis man møder en vis modstand i fjerne MAV fra cortex i den ene halvkugle under dissektion, skifte til den anden halvkugle og gå tilbage senere til den side, hvor modstanden var stødt på. Denne metode tager nogle praksis at perfekt og kræver omkring 5 til 15 &quot;praksis&quot; dissektioner før en konsekvent ensartet høst af MAV væv opnås. Metoden til at starte dissektion og removal af MAV ved det arterielle cirkel i bunden af ​​hjernen letter fjernelsen af ​​meninges ved at bruge større vaskulaturen support &quot;stillads&quot;. En stor del af blodet oprindeligt i MAV vaskulatur efter aflivning skal udstødes under dissektion, og mindre end 5% af RNA høstet fra MAV bør være af blod oprindelse. Det er muligt at fjerne næsten alt det blod ved perfusion af dyret med 50 til 70 ml saltvand under anvendelse af histologiske teknikker, før halshugning og hjernen fjernes. Det er imidlertid så meget vanskeligere at visualisere de MAV væv under dissektion. De tre mest sandsynlige kilder til &quot;kontaminering&quot; af MAV væv er pinealkirtlen, kortikale lag I væv og resterende lugtekolben væv, men det er også muligt at få hypofysen væv i præparatet. Pineal kontaminering i MAV detekteres af MAV indeholder en rund 1-2 mm i diameter kugle, der er farvet mørk rød. Den primære funktionaf pinealkirtlen anses normalt for at være helt forskellig fra MAV. Den primære funktion er at producere melatonin, som regulerer aspekter af den cirkadiske rytme 9, og i lipoxygenation 10 i lipid-prækursorer. Selvom gen Lox, som regulerer lipoxygenaseaktivitet, blev anset for at være til stede hos voksne primært i pinealkirtlen 10, vores resultater viser, at det også er konstant til stede på signifikante niveauer i MAV. Resterende corticale eller lugtekolben kontaminering resulterer i rosa banelignende MAV væv med omkring 1 til 2 mm tættere væv, der er meget blegere i farven indeholdt deri. Dette kan afsløres ved &quot;flydende&quot; MAV på overfladen af ​​bufferen, og derefter fjerne de tungere corticale eller pære væv anvendelse af de to dissekere pincet. Hvis forurening af MAV fra kortikale lag I væv, hypothalamisk væv eller pinealkirtlen er til stede, derefter adskillige gener vil have en betysentligt større ekspression end hvad der er normalt til stede i en &quot;ren&quot; dissektion. Forurening af MAV med pinealkirtlen vil resultere i højere ekspression af arylalkylamin-N-acetyltransferase (AANAT), som er nødvendig for melatonin syntese. Desværre, hvis pineal kontaminering forekommer under MAV dissektion, vil niveauerne af Lox i MAV ikke kunne bestemmes nøjagtigt. Forurening af MAV med cortexvæv vil resultere i højere ekspression af neuron-specifikke gener, såsom hippocalcin (Hpca), parvalbumin (Pvalb) og / eller neuronal pentraxin receptor (Nptxr). Forurening af MAV med hypothalamus væv vil resultere i højere ekspression af væksthormon 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). I tilfælde af at en vis kontaminering eksisterer i de indsamlede væv, kan de fleste af disse gener, identificeres og ikke anvendes i genekspressionsanalyse. Dette er særlig vigtigt for gener, der findes i cirkulerende blood der stadig kan være til stede i MAV eller choroid plexus. Interpretting genekspression data fra høstet MAV og choroid plexus Cerebral overflade (overfladiske) vaskulatur med tilhørende meninges (MAV) og plexus chorioideus er nødvendige for cerebral blodstrøm og cerebrospinalvæske (CSF) homeostase 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Vævet høst er egnet til biokemiske og fysiologiske analyser, og MAV har vist sig at være følsomme over for skade produceret af amfetamin og hypertermi 1,2 gennem genekspressionsanalyse. Disse resultater står i forhold til, hvad der også er kendt om alvorlig hypertermi og eksponering for amfetaminer til hjernen vaskulatur i almindelighed 18,19,20. Humane kliniske data understøtter troen på, at subduralt vaskulatur er følsom over for skader af amfetamin og metamfetamin 21,22. Samt, herun de store og små cerebrale vasculaturesING dem i pial lag af meninges, der er høstet i MAV har potentielt stor interesse, når de efterforsker Concussive typer af hovedtraume 23,24 25. Den nuværende genekspression profil gav fra MAV viser, at pial og eventuelt araknoid meningeal membraner kan spille en større rolle end forventet i reguleringen CSF sammensætning. I fremtiden, ved anvendelse af dissektionsmikroskop teknikker kan det være muligt yderligere at separere væv, som omfatter MAV således at pial og arachnoid membraner kan adskilles fra den større arterielle vaskulatur til stede og muligvis fra hinanden. Dette vil give et bedre fortolkning af funktionen af ​​hver af disse tre komponenter af det høstede MAV.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens / udstyr </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valgfrit) </td></tr><tr><td> Normalt saltvand (9 g saltvand / 1 liter H2O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> 0,1 M natriumphosphat pH 7,4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> Bone Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Skull fjernelse af knogle </td></tr><tr><td> Tang-bøjet spids (4 &quot;lang og 0,8 mm bred spids) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 eller RS-5137 </td><td> Dissekere pincet </td></tr><tr><td> Tang-lige spids (5,5 &quot;lang) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 eller RS-8104 </td><td> Thumb Dressing pincet </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Denne video præsentation blev skabt for at vise en metode til at høste de to vigtigste yderst vaskulære strukturer, der ikke har bopæl i hjernen egentlig, der understøtter forhjerne funktion. De er den cerebrale overflade (overfladiske) vaskulatur med tilhørende meninges (MAV) og choroid plexus, som er nødvendige for cerebral blodstrøm og cerebrospinalvæske (CSF) homøostase. Den høstede væv er egnet til biokemiske og fysiologiske analyser, og MAV har vist sig at være følsomme over for skade produceret af amfetamin og hypertermi 1,2. Samt, er de store og små cerebrale vasculatures høstet i MAV potentielt høje renter, når de efterforsker Concussive typer af hovedtraume. MAV dissekeret i denne præsentation består af pial og nogle af arachnoid membran (mindre dura) i hjernehinden og de store og små cerebral overflade vaskulatur. Plexus chorioideus dissekeret er strukturen, som findes i lateral hjertekamrene som beskrevet af Oldfield og McKinley 3,4,5,6. De anvendte metoder til høstning disse to væv også lette høsten af ​​regionale cortexvæv uden meninges og cerebral større overflade vaskulatur, og er forenelig med høst andre hjernevæv såsom striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. dissektion af de to væv tager 5-10 min total. Genekspressionen niveauer for dissekeret MAV og choroid plexus, som vist og beskrevet i denne præsentation kan findes på GSE23093 (MAV) og GSE29733 (choroid plexus) på NCBI GEO repository. Disse data har været, og bliver, bruges til at hjælpe yderligere at forstå funktionen af ​​MAV og choroid plexus, og hvordan neurotoksiske begivenheder såsom svær hypertermi og AMPH påvirker deres funktion.

Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Denne video præsentation viser en metode til at høste de to vigtigste yderst vaskulære strukturer, der understøtter forhjerne funktion. De er den cerebrale overflade (overfladiske) vaskulatur med tilhørende meninges (MAV) og choroid plexus, som er nødvendige for cerebral blodstrøm og cerebrospinalvæske (CSF) homøostase.

En visuel beskrivelse af dissektion af cerebral Surface vaskulatur og associerede meninges og choroid plexus fra rottehjerne

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visuelt fremkaldt Potentiel optagelse i en rotte model for Eksperimentel Optic Nerve Demyelinisering

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation af den ciliære Bevægelse af plexus chorioideus epitelceller<em&gt; Ex vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En simpel en-trin Dissektion Protokol for Whole-mount Forberedelse af Voksen<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Sublimation of DAN Matrix for the Detection and Visualization of Gangliosides in Rat Brain Tissue for MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sublimation af DAN Matrix til påvisning og Visualisering af Gangliosider i Rat Brain Tissue for MALDI Imaging massespektrometri

Sample preparation is key for optimal detection and visualization of analytes in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Imaging Mass ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Optagelse synaptisk plasticitet i akut hippocampus skiver vedligeholdes i en lille-volumen genanvendelse - Perfusion- og neddykning-type kammer System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

Live Imaging af primære hjernebarken celler ved hjælp af en 2D kultur

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Intra-arteriel levering af neurale stamceller til rotte og mus hjernen: Ansøgning om cerebral iskæmi

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Måling af Post-Stroke Cerebral Ødem, Infarct Zone og Blod-Brain Barrier Opdeling i et enkelt sæt gnaver Hjerne Prøver

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Udvinding og dissektion af den tamme svinehjerne

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...