Name: a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door NCTR / FDA.

Hoewel niet getoond in de video, werden ratten eerst gegeven een overdosis van 300 mg / kg pentobarbital, waardoor anesthesie in minder dan 3 minuten en vervolgens gedood door onthoofding. Hun hersenen waren daarna snel, maar zorgvuldig verwijderd uit de schedel en gekoeld in ijs-koude zoutoplossing gedurende 5 minuten. Het is belangrijk de hersenen afkoelen voor deze tijd voor het ontleden van de MAV zodat de MAV kan worden gescheiden van het oppervlak van de cortex (boven laag I). De hersenen werden dan geplaatst in de bodem van een glazen petrischaal rusten op ijs dat vol (1 cm diep) ijskoude zoutoplossing of 0,1 M natriumfosfaat-gebufferde zoutoplossing pH = 7,4. Alle dissectie gebeurt met de hersenen voor het grootste deel ondergedompeld in zoutoplossing. 1. Verwijdering van de Pijnappelklier <ol><li> Plaats de hersenen rugzijde (ten opzichte van de bodem van de petrischaal). De pijnappelklier is gelegen aan de meest caudale ventrale gebied tussen de twee hersenhelften gewoon rostraal thij cerebellum (pijnappelklier uitsparing), en net onder of aan het oppervlak van de hersenvliezen de colliculi. Verwijder de pijnappelklier eerste gebruik van twee kleine gebogen tip pincet. Het is roze van kleur, zoals de cortex, maar wordt vaak omgeven met resten van bloed en bloedvaten restpost uit de hersenen te verwijderen. </li></ol> 2. Verwijdering van de MAV <ol><li> Flip de hersenen dan &quot;ondersteboven&quot; en scheiden de vertebrale slagader, kleinere slagaders en hersenvliezen die de pons van de hersenvliezen en bloedvaten van de voorhersenen. Verwijdering van de voorhersenen MAV wordt dan gestart. Het is belangrijk om ventraal starten in de dissectie proces. De grote grote assen van de cirkel van Willis, midden cerebrale slagaders (MCA) en anterior slagaders zijn de sterkste en dienen als &quot;scaffolding&quot; waardoor de kleinere oppervlakkige arteriën en arteriolen van de pial membraan kan dan worden verwijderd uit de cortex en de rest van het hersenvlies. Zie toetsing door Scremin 7 voor merts visuele representaties en de details van de cerebrale oppervlak vaatstelsel. </li><li> Te beginnen met een van beide halfrond, gebruik maken van de kleine gebogen uiteinde een tang om de posterior communiceren slagader juist achter het interne carotis moment verbreken. Zo scheidt de meer anterior en posterior arteriële bomen van de voorhersenen. Doe hetzelfde voor de contralaterale hemisfeer. </li><li> Vastgrijpen van de MCA en de voorste slagader met de forceps, trek in een anterior-dorsaal zodat de MAV voor de ventrale voorste cortex (piriformis, olfactorische knobbel) omhoog over en rond de reukkanaal. Dit verwijdert een groot deel van de MAV die de anterieure cortex (cingulated en orbitale). </li><li> Draai de hersenen op 45 tot 90 ° hoek met de petrischaal. De laterale, meer anterieure regio&#39;s van de MAV rond de laterale corticale gebieden (granulaire insulaire, secundaire somatosensorische en auditieve cortex) kunnen worden bevrijd van de cortex door het vastgrijpen van de MCA en de bijbehorende Arters en zachtjes te trekken dorsaal langs de cortex. Indien nodig kunnen de uiteinden van de forceps worden gebruikt voor het optillen en de grote slagaders bevrijden van de cortex bij dissectie. </li><li> Verwijder nu de meer posterieure laterale regio&#39;s van de MAV. (Let op, het beste van een halfrond naar de andere tijdens dit oogstproces dat de MAV koud blijft en gehydrateerd. Ook wanneer weerstand in het bevrijden van de MAV van de cortex wordt aangetroffen op een halfrond schakelaar in de contralaterale hemisfeer tijdelijk en dan later terug te gaan naar de oorspronkelijke halfrond.) </li><li> Om de dorsale de MAV rondom de primaire somatosensorische cortex motor verwijderen en zet de hersenen rugzijde (ten opzichte van de bodem van de petrischaal). Eindelijk bevrijden van de MAV hersenen, met de uiteinden van de forceps langs de sagittale sinus. Dit gedeelte van de geoogste MAV tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. Vaakde MAV dat de meest posterieure / caudale gebieden van de cortex (entorhinale, visuele en auditieve cortex meest caudale) blijft aan de cortex. De verwijdering wordt later weergegeven in de video wanneer de MAV tussen de retrosplenial cortex en bovenop de colliculi worden ontleed. </li></ol> 3. Verwijdering van de Choroid Plexus <ol><li> Plaats de hersenen rugzijde en houd deze met de grotere forceps Druk de kleinere forceps beneden door de middellijn tussen de hemisferen en de uiteinden gebruik te prikken door de cortex en corpus callosum (≈ -3,3 mm van bregma) in de bovenkant van de middellijn van de hippocampus. </li><li> Gebruik de tang om de cortex weg te trekken met callosum van de dorsale hippocampus en septum, het blootstellen van het grootste deel van de laterale ventrikel. De choroidea plexus kunnen worden gelokaliseerd en geïdentificeerd door de golvende rode lijn afbakenen van de belangrijkste slagader die de lengte loopt. Gebruik de twee uiteinden van de forceps op de zijwanden van de derde ven wrikkentricle en vergroten op de meest caudale einde (≈ -4,3 mm van bregma 8). </li><li> Met behulp van de kleine tang, trek dit einde van het vaatvlies plexus gratis. Ga dan naar de zeer anterieure gebied tussen het septum en caudate / putamen (meest rostrale mate ≈ +1.6 mm van bregma) en met de tang te vergroten dit deel van het ventrikel en trek de choroidea plexus gratis. Voer dezelfde procedure uit op de contralaterale hemisfeer naar de tweede resterende choroidea plexus te verkrijgen. Ook dit weefsel kan tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. </li></ol> 4. Het verwijderen van de resterende MAV in de 3 e ventrikel bovenop de Thalamus en de Colliculi evenals die op de meer Caudal Regio&#39;s van de Cortex waaronder Retrosplenial, auditieve en visuele cortex <ol><li> Verwijder het gehele hippocampus van beide hersenhelften het blootstellen van de MAV in de thalamus en colliculi. De verwijdering vandit deel van de MAV veel minder moeilijk dan het verwijderen van MAV de cortex. </li><li> Trek dit deel van de MAV vrij door het grijpen van de grotere bloedvaten bovenop het voorste deel van de thalamus en zachtjes te trekken caudaal. Deze vasculatuur is verbonden met het netwerk supra collicular en afleveren van bloed aan de dorsale hippocampus en thalamus dorsale netwerk. Trek het weg caudaal en geleidelijk gratis de supracollicular netwerk tot het bereiken van de laatste delen van de caudale arteriële cirkel vaatstelsel. Op dit punt, moet meer zorg worden genomen om eventuele resterende achterste ventrale MAV te verwijderen op het oppervlak van de granulaire retrosplenial, primaire auditieve en visuele cortex. Zoals met de andere sectie van MAV voor de voorste meer delen van de cortex, kan dit weefsel tijdelijk worden bewaard in ijskoude zoutoplossing tot testen en analyse of ingevroren voor latere verwerking. Elke resterende achterste ventrale MAV geoogst met deze tweede MAV deel moet worden verwijderd eend aan de eerste ontleed MAV sectie betreffende de cortex als ze afzonderlijk worden geanalyseerd. </li></ol> 5. Representatieve resultaten Wanneer de dissectie correct wordt uitgevoerd, dient de resulterende MAV weefsels in twee intacte entiteiten gewicht ongeveer 35 tot 45 mg totaal. De aanvankelijk ontleed MAV rond het grootste deel van de cortex moet wegen ongeveer 25 mg en de MAV die de thalamus, moet colliculi en occipitale cortex wegen ongeveer 15 mg. Het moet rozig in kleur van de resterende bloed in het vaatstelsel. De bilaterale choroid plexus vergaard in twee intacte weefsel monsters met elk een gewicht van 1 tot 2 mg. Hoewel overtollige water wordt verwijderd uit de MAV vóór opslag of verwerking met tissuepapier zoals in lens reinigen van weefsel te voorkomen is het niet verstandig om overtollig water uit de gedissecteerde choroid plexus. Figuur 1 werd gegenereerd voor het vergelijken van expressie profil<html> es in drie regio&#39;s (striatum, pariëtale cortex en MAV) onder controle omstandigheden met behulp van Agilent-014879 Hele Rat Genome 4x44K 60mer oligonucleotide arrays (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA; NCBI GEO Toetreding # GPL7294, GSE23093 en GSE29733 die aanwezig zijn op de NCBI GEO repository). De twee plots in de figuur picturaal tonen de uitdrukking in 1) het striatum opzichte van de pariëtale cortex en 2) de MAV opzichte van de pariëtale cortex. Het is duidelijk dat het striatum en pariëtale cortex veel meer verwant aan elkaar dan de MAV. De gegevens vergelijken van de choroidea plexus met de MAV zal worden gepresenteerd in een toekomstige publicatie. Het is echter waarschijnlijk dat de expressieprofielen in de MAV en choroidea plexus meer verwant aan elkaar dan zij de striatum en pariëtale cortex. Figuur 2 toont de differentiële genexpressie reactie hyperthermie (EIH) versus Amph in vergelijking MAV te controleren en elkaar. content &quot;&gt; De genexpressie van meer dan 11.000 genen officiële NCBI gen symbolen MAV controledieren werd vergeleken met dat van het striatum en pariëtale cortex. dan 2000 van deze genen hebben een 2,5-voudige of meer verschillende expressie in de MAV Vergeleken met de twee neuronale-rijke weefsels en 550 genen hadden een 10 maal groter verschil in expressie. Iets meer dan 40% (253) van deze genen waren met een verminderde expressie van 10-voudig of meer MAV en had betrekking op neuronale functie. Er waren 343 genen met meer dan 10-voudig of meer expressie in vergelijking met MAV pariëtale cortex en striatum. Deze lijst van genen werd gebruikt als uitgangspunt waarmee genen bepalen met een zeer hoog verrijkt in de MAV. Table 1 worden de genen met meer dan 15-voudig expressie in vergelijking met MAV pariëtale cortex en striatum en categoriseert ze met betrekking tot de functie. Veel van deze genen gerelateerd aan het vasculaire systeem en / of het immuunsysteem. Deze tOORTEN genen worden verrijkt ongeveer 5 - tot 10 - voudig tot vanwege de toegenomen vasculatuur zelf en bloed daarin. Maar zelfs voor genen met bekende algemene vasculaire functies, een toename van meer dan 15-voudige verrijking in MAV geeft. Er waren ook aantal genen met grote veelvoudveranderingen die waren: 1) extracellulaire matrixeiwitten (niet specifiek betrekking op vasculatuur), 2) solute transporters en 3) lipide en retinoïnezuur metabolisme. Als goed, weinig groei en differentiatie gen of transcriptiefactoren gevonden. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figuur 1. Vergelijking van de genexpressie in MAV met pariëtale cortex en striatum. Volcano perceel het vergelijken van de genexpressie niveaus van de pariëtale cortex en striatum (boven plot) en de pariëtale cortex en MAV (onderste grafiek). De rode symbolen geven de genen die significant verschillend between regio&#39;s p &lt;0,05 en een 1,5-voudig of meer differentiële expressie regio. De zwarte symbolen vertegenwoordigen genen die niet wezenlijk verschillen tussen regio&#39;s (p&gt; 0,05) en minder dan 1,5-voudig verschil in expressie. De roze symbolen genen met minder dan 1,5-voudig verschil in expressie maar statistisch significant verschillend bij p &lt;0,05. De gele symbolen genen te identificeren die een 1,5-voudige of meer expressie hebben, maar deze verandering is niet statistisch significant bij p &lt;0,05. Afkortingen Amph amfetamine EIH milieu-geïnduceerde hyperthermie MAV meninges en bijbehorende cerebrale bloedvaten Norm normotherme controleert <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figuur 2. Effecten van hyperthermie en amfetamine op genexpressie in MAV. Volcano percelen te vergelijkengenexpressieniveaus in de MAV na zoutoplossing, EIH of Amph op 3 uur tijdstip. De rode symbolen geven de genen die geacht worden significant verschillend terwijl de zwarte stippen / cirkels genen die niet wezenlijk verschillen tussen regio&#39;s. Bijkomende statistische analyse werd gebruikt om te controleren welke uitdrukking verschillen tussen controle en behandeling in feite statistisch significant. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Brain Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symbolen </td><td fo:width="1.5in"> Weefselspecificiteit of gemeld Functie (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Anxa2 een, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, LepR, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Ccl19, CD74 een, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> CDH1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, eMP3, Gpc3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; opgeloste Homeostase </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Alx3, Cdkn1c, FOXC2, IGFBP2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, sFRP1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> &gt; 50-voudig </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td&gt; <td> Anxa1 een, Angpt2, C6 een, GJB2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, CD14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, FMOD, MGP, Nid2 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; opgeloste homeostase </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> BMP6, Casp12, DAB2 Folr1, Igf2, MSX1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> 30 tot 50-voudige </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf een, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, Vtn </td><td> Vasculatuur &amp; Heart </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Ada een, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Immuunsysteem </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adamtsl4, COL1A1, Crb3, Dpt, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Extracellulaire matrix en cel-cel verbindingen </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; opgeloste homeostase </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, Rbp1, RBP4 </td><td> Retinoïnezuur &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Ontwikkeling &amp; Transcriptie Verordening </td></tr><tr><td> 15 tot 30 voudig </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1R, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, Gnmt, Gprc5c, HSPB1, Klc3, Krt18, Krt19, MdK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, NET1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Onbekend &amp; Diversen </td></tr></tbody></table> * Genen in de tabel moeten beide meer dan 15-voudig bovenstaande formule in het striatum en in Parietal cortex en 5-voudig boven de achtergrond niveaus. De laagste van de twee ratio&#39;s (MAV / striatum of MAV / pariëtale cortex) voor elk gen werd gebruikt voor het groeperen. een Genen worden gevonden in endotheelcellen maar waarschijnlijk ook een belangrijke rol spelen bij het ​​bewerkstelligen immuunresponsen. Tabel 1. Genen met een 15-voudige of meer * verhoogde expressie in vergelijking met MAV striatum en pariëtale cortex.

<ol>
	<li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature.">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li><li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature,+striatum,+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure.">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li><li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology.">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li><li>Oldfield, B. J. M., Michael, J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 391 (1995).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li><li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions:+?+challenges+in+health+and+disease.">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li><li>Scremin, O. U., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 3 (1995).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1995).</li><li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion:+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity.">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+control+of+cerebral+circulation.">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, 25-33 (1985).</li><li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone.">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li><li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers.">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li><li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+Fluid+Transport:+a+Lymphatic+Perspective.">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li><li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate.">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li><li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans,+non-human+primates+and+other+mammalian+species.">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).</li><li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain.">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li><li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus.">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li><li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury.">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li><li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

We hebben niets te onthullen. Het werk dat hier gepresenteerde mag vertegenwoordigen niet noodzakelijk de standpunten van de Food and Drug Administration.

Technische aspecten van MAV en choroidea plexus dissectie Het is cruciaal tijdens de dissectie van de MAV om de hersenen &quot;ondergedompeld&quot; meestal in de normale zoutoplossing of natriumfosfaat-gebufferde zoutoplossing. Waardoor de MAV en cortex te ontwateren tijdens dissectie zal resulteren in de MAV hechten stevig aan corticale laag I. Dit zal de hoeveelheid corticale weefsel geoogst met de MAV en / of resulteren in het onvermogen om deze aanhangend MAV secties uit de cortex verhogen. Ook geduld is nodig tijdens dissectie. Nogmaals, als men kennis met weerstand in het verwijderen van de MAV van de cortex in een halfrond tijdens dissectie, overschakelen naar het andere halfrond en later terug te gaan naar de kant waar weerstand werd ondervonden. Deze methode vergt wel enige oefening om een ​​perfecte en vereist ongeveer 5 tot 15 &quot;praktijk&quot; dissecties voor een consistent uniform oogst van MAV weefsel wordt bereikt. De werkwijze begint de dissectie en removal van de MAV de arteriële cirkel aan de basis van de hersenen vergemakkelijkt het verwijderen van de hersenvliezen door de grotere vasculatuur support &quot;scaffolding.&quot; Veel van de oorspronkelijk in het bloed MAV vasculatuur Na opoffering worden uitgeworpen tijdens de dissectie en minder dan 5% van het RNA geoogst MAV moet bloed oorsprong. Het is mogelijk om bijna alle bloed te verwijderen te doorstromen het dier met 50 tot 70 ml zoutoplossing met histologische technieken, vóór onthoofding en de hersenen verwijderd. Het is echter veel moeilijker dan de MAV weefsels tijdens dissectie visualiseren. De drie meest waarschijnlijke &quot;vervuiling&quot; van het weefsel MAV de pijnappelklier, corticale laag I en resterende weefsel reukkwab weefsel maar het is ook mogelijk om hypofyse weefsel krijgen in het preparaat. Pineal verontreiniging in de MAV wordt gedetecteerd door de MAV met een ronde 1 tot 2 mm diameter bol dat gekleurd donkerrood. De primaire functievan de pijnappelklier wordt normaal beschouwd als volledig verschillend van de MAV. De primaire functie is het produceren van melatonine, dat aspecten van het circadiane ritme 9 regelt, en in lipoxygenation 10 van lipide precursoren. Hoewel het gen Lox, die lipoxygenase activiteit reguleert, werd gedacht dat in volwassenen voornamelijk in de pijnappelklier 10, onze resultaten aan dat het ook consistent aanwezig in grote hoeveelheden in MAV. Overblijvende corticale of reukkwab verontreiniging leidt tot roze baanvormig MAV weefsel met van 1 tot 2 mm dichtere weefsels die veel lichter van kleur ingesloten in. Dit kan worden gezien door &quot;zwevend&quot; de MAV op het oppervlak van de buffer, en vervolgens het zwaardere corticale weefsels of bol met de twee ontleden forceps. Bij verontreiniging van de MAV van corticale laag Ik weefsel, hypothalamus weefsel of de pijnappelklier aanwezig is, dan is een aantal genen zal een aanzienlijkcant hogere expressie dan wat gewoonlijk in een &quot;schone&quot; dissectie. Verontreiniging van de MAV met pijnappelklier leidt tot hogere expressie van arylalkylamine N-acetyltransferase (AANAT) die nodig is voor melatonine synthese. Helaas, als pijnappelklier vervuiling optreedt tijdens MAV dissectie worden de niveaus van Lox in MAV niet nauwkeurig kunnen worden bepaald. Verontreiniging van de MAV met corticale weefsel leidt tot hogere expressie van neuron-specifieke genen zoals hippocalcin (HPCA), parvalbumine (Pvalb) en / of neuronale pentraxin receptor (Nptxr). Verontreiniging van MAV met hypothalamus weefsel resulteert in de hogere expressie van groeihormoon 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). In het geval dat enige verontreiniging bestaat in de geoogste weefsels, de meeste van deze genen geïdentificeerd en niet in genexpressieanalyse. Dit is bijzonder belangrijk voor genen in de circulerende blood die nog aanwezig kunnen zijn in MAV of de choroidea plexus. Interpretting genexpressie gegevens van geoogst MAV en choroidea plexus De cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vasculatuur met de bijbehorende meninges (MAV) en de choroid plexus nodig zijn voor cerebrale bloedstroom en cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Het weefsel oogst is geschikt voor biochemische en fysiologische analyse en de MAV is en gevoelig voor schade door amfetamine en hyperthermie 1,2 door genexpressieanalyse. Deze resultaten zijn in overeenstemming is met wat ook bekend is over ernstige hyperthermie en blootstelling aan amfetaminen naar de hersenen vasculatuur in het algemeen 18,19,20. Menselijke klinische gegevens ondersteunen de overtuiging dat de subdurale vasculatuur is gevoelig voor schade door amfetamine en metamfetamine 21,22. Als goed, de grote en kleine cerebrale vasculatures includIng die in de pial laag van de hersenvliezen die worden geoogst in MAV zijn van potentieel hoog belang bij het ​​onderzoek concussive soorten hoofdletsel 23,24 25. De huidige genen expressie profiel verkregen van de MAV geeft aan dat de pial en eventueel de arachnoidea meningeale membranen kunnen een grotere rol spelen dan verwacht in het reguleren van CSF samenstelling. In de toekomst door middel van dissectiemicroscoop technieken is het mogelijk om verder scheiden de weefsels die de MAV zodat de pial en arachnoidea membranen kunnen worden gescheiden van de grotere arteriële vasculatuur huidige en mogelijk van elkaar. Dit resulteert in een betere interpretatie van de functie van elk van deze 3 componenten van de geoogste MAV.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens / apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> Normaal zoutoplossing (9 gram zout / 1 Liter H 2 O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> 0,1 M natriumfosfaat pH 7,4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissection buffer </td></tr><tr><td> Bone rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Schedel botverwijdering </td></tr><tr><td> Pincetten-gebogen tip (4 &quot;lang en 0,8 mm breed tip) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 of RS-5137 </td><td> Ontleden tang </td></tr><tr><td> Pincetten-rechte tip (5,5 &quot;lang) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 of RS-8104 </td><td> Thumb Dressing tang </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Deze video presentatie is gemaakt om een ​​methode van het oogsten van de twee belangrijkste hoogst vasculaire structuren laten zien, niet woonachtig zijn in de hersenen zelf, die ondersteuning voorhersenen functie. Zij zijn de cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vaatstelsel, samen met de bijbehorende hersenvliezen (MAV) en het vaatvlies plexus die nodig zijn voor cerebrale doorbloeding en de cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase. Geoogste weefsel is geschikt voor biochemische en fysiologische analyse en de MAV is en gevoelig voor schade door amfetamine en hyperthermie 1,2. Als goed, de grote en kleine cerebrale vasculatures geoogst in MAV zijn van potentieel hoog belang bij het onderzoek concussive soorten hoofdletsel. De MAV ontleed in deze presentatie uit de pial en enkele arachnoidea membraan (minder dura) van de meninges en de grote en kleine bloedvaten cerebrale oppervlak. De choroid plexus ontleed is de structuur dat zich in het lateral ventrikels zoals beschreven door Oldfield en McKinley 3,4,5,6. De methoden voor het verzamelen van deze twee weefsels vergemakkelijken ook het verzamelen van regionale corticale weefsel zonder meninges en grotere cerebrale vasculatuur oppervlak, en is compatibel met andere oogsten hersenweefsel zoals striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. De ontleding van de twee weefsels wordt 5 tot 10 min totaal. De genexpressie niveaus voor de MAV ontleed en choroidea plexus, zoals getoond en beschreven in deze presentatie is te vinden op GSE23093 (MAV) en GSE29733 (choroidea plexus) op de NCBI GEO repository. Deze gegevens zijn, en wordt, gebruikt om beter inzicht in de werking van de MAV en choroidea plexus en hoe neurotoxische gebeurtenissen zoals ernstige hyperthermie en Amph negatieve invloed hebben op hun functie.

Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Deze video presentatie toont een werkwijze voor het oogsten van de twee belangrijkste zeer vasculaire structuren die voorhersenen functie ondersteunen. Zij zijn de cerebrale oppervlak (oppervlakkige) vaatstelsel, samen met de bijbehorende hersenvliezen (MAV) en het vaatvlies plexus die nodig zijn voor cerebrale doorbloeding en de cerebrospinale vloeistof (CSF) homeostase.

Een visuele beschrijving van de dissectie van de Cerebral Surface vaatstelsel en de geassocieerde hersenvliezen en het Choroid Plexus van Rat Brain

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visual Evoked Potential Opname in een rat model van Experimentele Optic Nerve Demyelinisatie

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observatie van de Ciliaire Beweging van Choroid Plexus epitheelcellen<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Een eenvoudige één stap Dissection protocol voor Whole-mount voorbereiding van Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Sublimation of DAN Matrix for the Detection and Visualization of Gangliosides in Rat Brain Tissue for MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sublimatie van DAN Matrix voor de detectie en Visualisatie van gangliosiden in Rat Brain Tissue voor MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sample preparation is key for optimal detection and visualization of analytes in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Imaging Mass ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Synaptische plasticiteit opnemen in Acute Hippocampal plakjes onderhouden in een kleine volumes Recycling-, perfusie-, en onderdompeling-type kamer systeem

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

Live beeldvorming van primaire hersenschors cellen met behulp van een systeem van 2D cultuur

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Intra-arteriële levering van neurale stamcellen aan de Rat en Mouse Brain: Toepassing op cerebrale ischemie

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Het meten van post-beroerte cerebraal oedeem, infarctzone en bloed-hersenbarrière-afbraak in een enkele set knaagdierhersenmonsters

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Extractie en dissectie van het gedomesticeerde varkensbrein

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...