Name: a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av NCTR / FDA.

Selv om det ikke er vist i videoen, ble rotter først gitt en overdose av 300 mg / kg av pentobarbital, som resulterer i anestesi i mindre enn 3 minutter, og deretter drept ved halshugging. Deres hjerner ble deretter raskt men forsiktig fjernet fra skallen og kjølt i iskald normal saltoppløsning i 5 min. Det er viktig å la hjernen avkjøles i denne tidsperiode før dissekere MAV slik at MAV kan skilles fra overflaten av cortex (toppen av lag I). Hjernen ble deretter plassert i bunnen av en glass petriskål hviler på is som var full (1 cm dypt) iskald normal saltoppløsning eller 0,1 M natriumfosfat-bufret saltvann pH = 7,4. All disseksjonen gjort med hjernen for det meste neddykket i saltvann. 1. Fjerning av Pinealkjertelen <ol><li> Plasser hjernen ryggsiden opp (i forhold til bunnen av petriskålen). Pinealkjertelen ligger på den mest caudal ventrale regionen mellom de to halvkuler bare rostral til than cerebellum (pineal fordypningen), og er like nedenfor eller ved overflaten av hjernehinnene over colliculi. Fjern pinealkjertelen først med to små bøyd spiss tang. Det er rosa i fargen som cortex, men er ofte omgitt i restene av blod og blodkar gjenværende fra hjernen fjerning. </li></ol> 2. Fjerning av MAV <ol><li> Vend hjernen over &quot;opp ned&quot; og skille ryggvirvel arterien, mindre arterier og hjernehinnene dekker pons fra hjernehinnene og blodårer i forebrain. Fjerning av forhjernen MAV Deretter startes. Det er viktig å starte ventrally i disseksjon prosessen. De store store arterier av sirkelen av Willis, midt cerebrale arterier (MCA) og fremre arterier er den sterkeste og tjene som &quot;stillas&quot; der de mindre overfladiske blodårer og arterioler i pial membranen kan deretter fjernes fra cortex med resten av hjernehinnene. Se gjennomgang av Scremin 7 for mmalm visuelle representasjoner og detaljer om cerebral overflaten blodkar. </li><li> Starter med enten halvkule, bruker de små bøyd spiss tang å bryte bakre kommunisere arterie bare posterior til den interne carotis tidspunktet. Således, skille mer fremre og bakre arterielle trærne forebrain. Gjenta den samme prosessen for kontralateral halvkule. </li><li> Gripende MCA og fremre arterien med pinsett, trekk forsiktig i en anterior-dorsal retning slik at MAV dekker ventrale anterior cortex (piriform, olfactory tuberkel) løftes over og rundt olfactory tarmkanalen. Dette fjerner mye av MAV dekker fremre cortex (cingulated og orbital). </li><li> Vri hjernen i en 45 til 90 ° vinkel i forhold til petriskål. Laterale, mer fremre deler av MAV rundt den laterale kortikale regioner (granulat insular, sekundære somatosensoriske og auditiv cortex) kan frigjøres fra cortex ved å gripe MCA og tilhørende Artertallet og forsiktig trekke dorsally langs cortex. Om nødvendig, kan endene av pinsettangens brukes til å løfte og frigjøre store arteries fra cortex under disseksjonen. </li><li> Nå fjerne de mer posteriore laterale deler av MAV. (Merk, er det best å bytte fra en halvkule til den andre i løpet av denne høsting prosessen for å sikre at MAV forblir kaldt og hydrert. Også, hvis motstand i frigjøre MAV fra cortex påtreffes på en halvkule bryteren til kontralaterale halvkule midlertidig og deretter gå tilbake til den opprinnelige halvkule senere.) </li><li> For å fjerne de dorsale deler av MAV rundt primær somatosensoriske og motor cortex slå hjernen ryggsiden opp (i forhold til bunnen av petriskålen). Å endelig frigjøre MAV fra hjernen, bruker endene av pinsettangens langs sagital sinus. Denne delen av innhøstede MAV kan enten holdes midlertidig i iskald saltløsning inntil testing og analyse eller frosset for senere prosessering. OfteMAV dekker de bakre / Caudal regioner i cortex (entorhinal, visuell og mest caudal auditive cortices) forblir festet til hjernebarken. Dens fjerning vises senere i videoen når MAV mellom retrosplenial cortex og overliggende colliculi er dissekert. </li></ol> 3. Fjerning av årehinnen plexus <ol><li> Plasser hjernen dorsal side opp og holdes på plass med de større tang Skyv mindre tang ned gjennom midtlinjen mellom halvkuler og deretter bruke endene til å punktere gjennom cortex og corpus callosum (≈ -3,3 mm fra bregma) inn i toppen av midtlinjen av hippocampus. </li><li> Bruk pinsett til å trekke med cortex callosum unna fra dorsal hippocampus og septum, utsette det meste av laterale ventrikkel. Årehinnen plexus kan lokaliseres og identifiseres av bølgete rød linje demarcating den store arterien som går sin lengde. Bruk de to endene av pinsettangens å lirke laterale vegger av tredje Ventricle og forstørre det på det mest caudal enden (≈ -4,3 mm fra bregma 8). </li><li> Bruke de små tang, trekker denne enden av årehinnen plexus gratis. Deretter går du til veldig fremre området mellom septum og caudate / putamen (mest rostral grad ≈ 1,6 mm fra bregma) og med pinsett forstørre denne delen av ventrikkel og trekk årehinnen plexus gratis. Utfør den samme prosedyren på motsatt halvkule å få andre gjenværende årehinnen plexus. Igjen dette vevet kan enten holdes midlertidig i iskald saltløsning inntil testing og analyse eller frosset for senere prosessering. </li></ol> 4. Fjerning av Gjenstående MAV i 3. ventrikkel overliggende Thalamus og Colliculi samt at på de mer Caudal regioner i Cortex inkludert Retrosplenial, auditiv og visuell Cortex <ol><li> Fjerne hele hippocampus fra begge halvkuler avslører MAV over thalamus og colliculi. Fjerningen avdenne delen av MAV er mye mindre vanskelig enn fjerning av MAV over cortex. </li><li> Trekk denne delen av MAV gratis ved å ta tak i større blodkar overliggende den fremre delen av thalamus og forsiktig trekke kaudalt. Denne vaskulatur er koblet til supra collicular nettverket og leverer blod til dorsal hippocampus og dorsal thalamus nettverk. Trekk den bort caudally og gradvis frigjør supracollicular nettverket inntil nå de siste delene av Caudal arteriell sirkel blodkar. På dette punktet, må mer omsorg tas for å fjerne eventuell gjenværende posterior ventral MAV på overflaten av den granulære retrosplenial, primær auditive og visuelle cortices. Som med den andre delen av MAV dekker mer fremre delene av hjernebarken, kan denne vev enten holdt midlertidig i iskald saltløsning inntil testing og analyse eller frosset for senere prosessering. Eventuelle gjenværende posterior ventral MAV høstet med denne andre MAV delen bør fjernes end tilsatt til første dissekerte MAV seksjonen dekker cortex hvis de skal bli analysert separat. </li></ol> 5. Representant Resultater Når disseksjonen utført korrekt, bør de resulterende MAV vev være i to intakte enheter veier omtrent 35 til 45 mg totalt. Den opprinnelig dissekert MAV rundt det meste av cortex bør veie ca 25 mg og MAV dekker thalamus, bør colliculi og occipital cortex veier ca 15 mg. Det bør være litt rosa i farge fra blodrester i blodkar. Den bilaterale choroid plexus slaktet bør være i to intakte vevsprøver med hver veide 1-2 mg. Selv overflødig vann kan fjernes fra MAV før lagring eller bearbeidelse ved hjelp av silkepapir som den som brukes i linserensing, for å unngå vevstap det ikke er en god idé å fjerne overflødig vann fra dissekerte choroid plexus. Figur 1 ble generert for sammenligne uttrykk profil<html> es i tre regioner (striatum, parietal cortex og MAV) under kontroll forhold med Agilent-014879 Hele Rat Genome 4x44K 60mer oligonukleotid arrays (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA, NCBI GEO Tiltredelse # GPL7294, GSE23093 og GSE29733 som er til stede på NCBI GEO depotet). De to flater i figuren billedlig viser uttrykket i 1) striatum sammenlignet parietal cortex og 2) MAV sammenlignet parietal cortex. Det er klart at striatum og parietal cortex er mye nærmere relatert til hverandre enn MAV. Dataene som sammenligner årehinnen plexus med MAV vil bli presentert i en fremtidig utgivelse. Det er imidlertid sannsynlig at uttrykket profilene i MAV og årehinnen plexus er mer nært knyttet til hverandre enn de er til striatum og parietal cortex. Figur 2 viser differensial genuttrykk svar på hypertermi (EIH) versus Amph i MAV sammenlignet å kontrollere og hverandre. innhold &quot;&gt; Genet uttrykk for mer enn 11.000 gener med offisielle NCBI genet symboler i MAV av kontroll dyr ble sammenlignet med de som er registrert i striatum og parietal cortex. Over 2000 av disse genene hadde en 2,5 ganger eller mer ulik uttrykk i MAV forhold til de to neuronal-rik vev, og 550 gener hadde en 10-ganger større forskjell i uttrykket. Litt mer enn 40% (253) av disse var gener med en redusert ekspresjon av 10-ganger eller mer i MAV og ble relatert til neuronal funksjon. Det var 343 gener med over en 10-ganger eller større uttrykk MAV sammenlignet parietale cortex og striatum. Denne listen av gener ble brukt som et utgangspunkt som å fastslå gener med en meget høy anrikning MAV. Tabell 1 viser de gener med større enn 15 ganger uttrykk MAV sammenlignet parietale cortex og striatum og kategoriserer dem med hensyn til funksjon. Mange av disse genene var relatert til det vaskulære system, og / eller immunsystem. Disse types av gener bør anrikes ca 5 - til 10 - ganger til på grunn av den økte vaskulatur selv og blod tilstede i den. Men selv for gener med kjente generelle vaskulære funksjoner, en økning over 15-fold indikerer oppformering i MAV. Det var også antall gener med svært stor fold forandringer som var: 1) ekstracellulære matriksproteiner (ikke spesifikt relatert til vaskulatur), 2) oppløst stoff transportører og 3) lipid og retinsyre metabolisme. Også, få vekst og differensiering gen eller transkripsjonsfaktorer ble funnet. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figur 1. Sammenligning av Gene Expression i MAV med parietal cortex og striatum. Volcano tomten sammenligne genuttrykk nivåer av parietal cortex og striatum (øverst tomten) og parietal cortex og MAV (nederst plott). De røde symbolene angir de genene som er vesentlig forskjellig betweno regioner på p &lt;0,05 og har en 1,5 ganger eller større differensial uttrykk mellom regionene. De sorte symboler representerer gener som ikke signifikant forskjellig mellom regioner (p&gt; 0,05) og er mindre enn 1,5 ganger ulik i uttrykket. De rosa symboler indikerer gener med mindre enn en 1,5-ganger forskjell i uttrykket, men statistisk signifikant forskjellig ved p &lt;0,05. De gule symboler identifisere gener som har en 1,5 ganger eller større uttrykk, men denne endringen er ikke statistisk signifikant på p &lt;0,05. Forkortelser Amfibie amfetamin EIH miljømessig-indusert hypertermi MAV hjernehinnene og tilhørende hjernens blodforsyning Norm normothermic styrer <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figur 2. Effektene av hypertermi og amfetamin på genuttrykk i MAV. Volcano tomter sammenlignegenuttrykk nivåer i MAV etter saltvann, EIH eller amfibie på 3 timers tidspunktet. De røde symbolene angir genene som anses å være vesentlig annerledes mens de sorte prikkene / sirkler representerer gener som ikke vesentlig forskjellig mellom regionene. Ytterligere statistisk analyse ble brukt for å verifisere hvilke uttrykk forskjeller mellom kontroll og behandlinger var faktisk statistisk signifikant. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Brain Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symboler </td><td fo:width="1.5in"> Tissue Spesifisitet eller rapportert funksjon (er) </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Anxa2 a, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vasculature &amp; Heart </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Ccl19, CD74 a, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Adh1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, Gpc3, Nupr1, Omd, Slamf9 Pcolce, Tmem27, Tspan8 </td><td> Ekstracellulær matriks og celle-celle kryss </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR </td><td> Ion &amp; stoff Homeostasis </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Alx3, Cdkn1c, Foxc2, IGFBP2 Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Utvikling og Transkripsjon forordning </td></tr><tr><td> &gt; 50 ganger </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Ukjent &amp; Diverse </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td&gt; <td> Anxa1 a, Angpt2, C6 a, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vasculature &amp; Heart </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Casp12, Ccl2, Ccr1, CD14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, Mgp, Nid2 </td><td> Ekstracellulær matriks og celle-celle kryss </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; stoff homeostase </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Bmp6, Casp12, DAB2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Utvikling og Transkripsjon forordning </td></tr><tr><td> 30-50 ganger </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Ukjent &amp; Diverse </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf a, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, VTN </td><td> Vasculature &amp; Heart </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, Cd68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-Db1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Immune System </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Adamtsl4, Col1a1, Crb3, Dpt, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, Timp3 </td><td> Ekstracellulær matriks og celle-celle kryss </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; stoff homeostase </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 </td><td> Retinsyre &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Utvikling og Transkripsjon forordning </td></tr><tr><td> 15-30 ganger </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Ukjent &amp; Diverse </td></tr></tbody></table> * Gener i tabellen må være både mer enn 15 ganger over uttrykk i striatum og parietal cortex og 5-ganger over bakgrunnsnivåene. Den nederste av de to gir (MAV / striatum eller MAV / parietal cortex) for hvert gen ble anvendt for gruppering. en gener finnes i endotelceller, men også sannsynlig spille en viktig rolle som formidler immunresponser. Tabell 1. Gener med en 15-fold * eller mer økt uttrykk i MAV forhold til striatum og parietal cortex.

<ol>
	<li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature.">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li><li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature,+striatum,+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure.">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li><li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology.">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li><li>Oldfield, B. J. M., Michael, J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 391 (1995).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li><li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions:+?+challenges+in+health+and+disease.">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li><li>Scremin, O. U., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 3 (1995).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1995).</li><li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion:+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity.">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+control+of+cerebral+circulation.">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, 25-33 (1985).</li><li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone.">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li><li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers.">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li><li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+Fluid+Transport:+a+Lymphatic+Perspective.">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li><li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate.">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li><li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans,+non-human+primates+and+other+mammalian+species.">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).</li><li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain.">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li><li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus.">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li><li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury.">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li><li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

Vi har ingenting å avsløre. Arbeidet som presenteres her er ikke nødvendigvis representerer synspunktene til Food and Drug Administration.

Tekniske aspekter ved MAV og årehinnen plexus disseksjon Det er kritisk under disseksjon av MAV å ha hjernen &quot;nedsenket&quot; mesteparten av tiden i den vanlig saltoppløsning eller natriumfosfat-bufret saltvann. Slik at MAV og cortex å dehydrere under disseksjon vil resultere i MAV følger tett til kortikale lag I. Dette vil øke mengden av kortikale vev høstet med MAV og / eller resultat i manglende evne til å fjerne disse fulgte MAV seksjoner fra hjernebarken. Dessuten er tålmodighet nødvendig under disseksjon. Igjen, hvis man møter noe motstand i å fjerne MAV fra cortex i en halvkule under disseksjon, bytt til den andre halvkule og gå tilbake senere til side hvor motstanden ble påtruffet. Denne metoden tar litt praksis for å perfeksjonere og krever ca 5 til 15 &quot;praksis&quot; disseksjoner før en konsekvent enhetlig høsting av MAV vev er oppnådd. Metoden for å starte disseksjon og removal av MAV ved arteriell sirkelen ved foten av hjernen forenkler fjerning av hjernehinnene ved hjelp større vaskulaturen som støtte &quot;stillas&quot;. Mye av blodet opprinnelig MAV vaskulaturen etter avliving bør bli slynget under disseksjon, og mindre enn 5% av RNA høstet fra MAV bør være av blod opprinnelse. Det er mulig å fjerne nesten alle blodet ved perfusing dyret med 50 til 70 ml saltoppløsning, ved hjelp histologiske teknikker, før halshogging og hjernen fjernes. Imidlertid er det da mye mer vanskelig å visualisere MAV vev under disseksjonen. De tre mest sannsynlige kilder &quot;forurensning&quot; av de MAV vev er pinealkjertelen, kortikale lag jeg vev og gjenværende luktelappen vev, men det er også mulig å få hypofysen vev i preparatet. Pineal forurensning i MAV oppdages av MAV inneholder en runde 1 til 2 mm diameter sfære som er farget mørk rød. Den primære funksjonenav pinealkjertelen normalt antas å være helt forskjellig fra MAV. Hovedfunksjonen er å produsere melatonin, som regulerer aspekter av døgnrytmen 9, og i 10 av lipoxygenation lipid forløpere. Selv om genet Lox, som regulerer lipoksygenase aktivitet ble antatt å være tilstede i voksne primært i pinealkjertelen 10, våre resultater tyder på at det også er til stede på konsekvent signifikante nivåer i MAV. Residual kortikale eller luktelappen kontaminering resultater i rosa web-lignende MAV vev ha noen 1-2 mm denser vev som er mye blekere i fargen omsluttet i den. Dette kan bli oppdaget av &quot;flytende&quot; MAV på overflaten av bufferen, og deretter fjerne de tyngre kortikale eller pære vev med de to dissecting pinsett. Hvis forurensning av MAV fra kortikale lag jeg vev, hypothalamus vev eller pinealkjertelen er til stede, deretter flere gener vil ha en vesentligdelig større uttrykk enn det som er normalt finnes i en &quot;ren&quot; disseksjon. Forurensning av MAV med pinealkjertelen vil resultere i høyere ekspresjon av arylalkylamine N-acetyltransferase (Aanat) som er nødvendig for melatonin syntese. Dessverre, hvis pineal kontaminering oppstår under MAV disseksjon, vil nivåene av Lox i MAV ikke kunne bestemmes nøyaktig. Forurensning av MAV med kortikale vev vil resultere i høyere uttrykk av neuron-spesifikke gener som hippocalcin (Hpca), parvalbumin (Pvalb) og / eller neuronal pentraxin reseptor (Nptxr). Forurensning av MAV med hypothalamus vev vil resultere i høyere uttrykk av veksthormon 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). I tilfelle at noen forurensning eksisterer i de høstede vev, kan de fleste av disse gener bli identifisert og ikke brukt i genekspresjonsanalyse. Dette er spesielt viktig for gener som er tilstede i den sirkulerende blood som fremdeles kan være til stede i MAV eller årehinnen plexus. Interpretting genekspresjonsdata fra slaktet MAV og årehinnen plexus Cerebral overflate (overflatisk) vaskulatur sammen med tilhørende meninges (MAV) og choroid plexus er nødvendig for cerebral blodstrøm og cerebrospinal væske (CSF) homeostase 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Vevet innhøstingen er egnet for biokjemiske og fysiologiske analyse, og MAV har vist seg å være følsomme for skade produsert av amfetamin og hypertermi 1,2 gjennom genekspresjonsanalyse. Disse resultatene er i samsvar med det som er også kjent om alvorlig hypertermi og eksponering for amfetamin til hjernen vaskulaturen generelt 18,19,20. Kliniske data støtter troen på at subdural blodkar er følsom for skade ved amfetamin og metamfetamin 21,22. I tillegg inklu de store og små cerebrale vasculaturesing de i pial lag av hjernehinnene som høstes i MAV er av potensielt høye renter når undersøke concussive typer hodeskader 23,24 25. Den nåværende genuttrykk profil ga fra MAV indikerer at pial og muligens de araknoide meningeal membraner kan spille en større rolle enn forventet i å regulere CSF sammensetning. I fremtiden, gjennom bruk av disseksjonsmikroskop teknikker, kan det være mulig å ytterligere separere vev omfattende MAV slik at pial og araknoide membraner kan separeres fra større arterielle blodkar stede og eventuelt fra hverandre. Dette vil muliggjøre en bedre forståelse av funksjonen av hver av disse tre komponentene av høstet MAV.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navnet på reagens / utstyr </td><td> Selskapet </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valgfritt) </td></tr><tr><td> Normal saltvann (9 gram saltvann / 1 liter H 2 O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Disseksjon buffer </td></tr><tr><td> 0,1 M natriumfosfat pH 7,4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Disseksjon buffer </td></tr><tr><td> Bone Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Skalleben fjerning </td></tr><tr><td> Tang-bøyd spiss (4 &quot;lang &amp; 0,8 mm bred tips) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 eller RS-5137 </td><td> Dissecting tang </td></tr><tr><td> Tang-rett tips (5,5 &quot;lang) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 eller RS-8104 </td><td> Tommel Dressing tang </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Denne videoen presentasjonen ble opprettet for å vise en metode for å høste av de to viktigste svært vaskulære strukturer, ikke bosatt i hjernen riktig, som støtter forebrain funksjonen. De er cerebral overflate (overfladisk) blodkar sammen med tilhørende hjernehinnene (MAV) og årehinnen plexus som er nødvendige for cerebral blodstrøm og cerebrospinalvæsken (CSF) homeostase. Vevet høstes er egnet for biokjemiske og fysiologiske analyse, og MAV har vist seg å være følsomme for skade produsert av amfetamin og hypertermi 1,2. I tillegg de store og små cerebrale vasculatures høstet i MAV er av potensielt høye renter når undersøke concussive typer hodeskade. MAV dissekert i denne presentasjonen består av pial og noen av araknoide membranen (mindre dura) i hjernehinnene og dur og moll cerebral overflate blodkar. Årehinnen plexus dissekert er strukturen som ligger i lateral ventriklene som beskrevet av Oldfield og McKinley 3,4,5,6. Metodene som benyttes for høsting disse to vev også lette høsting av regionale kortikale vev blottet for hjernehinnene og større cerebral overflate vaskulaturen, og er kompatibel med høsting andre hjernen vev som striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. disseksjon av de to vev tar 5-10 min totalt. Genuttrykket nivåer for dissekert MAV og årehinnen plexus, som vist og beskrevet i denne presentasjonen finner du på GSE23093 (MAV) og GSE29733 (årehinnen plexus) på NCBI GEO depotet. Denne informasjonen har vært, og blir, brukes til å hjelpe videre forstå funksjonen av MAV og årehinnen plexus og hvordan nevrotoksisk hendelser som alvorlig hypertermi og Amph påvirke deres funksjon.

Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Denne videopresentasjonen viser en fremgangsmåte for å høste de to viktigste svært vaskulære strukturer som støtter forhjerne funksjonen. De er cerebral overflate (overfladisk) blodkar sammen med tilhørende hjernehinnene (MAV) og årehinnen plexus som er nødvendige for cerebral blodstrøm og cerebrospinalvæsken (CSF) homeostase.

A Visual Beskrivelse av Dissection av Cerebral Surface blodkar og Associated hjernehinnene og årehinnen plexus fra Rat Brain

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visuell fremkalt potensial Opptak i en rottemodell of Experimental Optic Nerve Demyelinisering

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observasjon av Ciliary Bevegelse av Choroid Plexus Epitelceller<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel ett-trinns Dissection Protokoll for Whole-mount Utarbeidelse av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Sublimation of DAN Matrix for the Detection and Visualization of Gangliosides in Rat Brain Tissue for MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sublimering av DAN Matrix for søking og visualisering av gangliosider i Rat hjernevev for MALDI Imaging massespektrometri

Sample preparation is key for optimal detection and visualization of analytes in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Imaging Mass ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Innspillingen synaptiske plastisitet i akutt hippocampus skiver vedlikeholdes i en liten volum resirkulering-, perfusjon og neddykking-type kammer System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

Live bildebehandling av primære hjernebarken celler ved hjelp av en 2D kultur-systemet

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Intraarteriell levering av nevrale stamceller til rotte- og mushjernen: Søknad om cerebral iskemi

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Måling av post-stroke cerebralt ødem, infarktsone og blod-hjernebarrieresammenbrudd i ett enkelt sett med gnagerhjerneprøver

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Ekstraksjon og disseksjon av den tamme grishjernen

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...