Name: a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

Detta arbete har finansierats av NCTR / FDA.

Även om det inte visas i videon, råttor först gett en överdos av 300 mg / kg av pentobarbital, vilket resulterar i anestesi på mindre än 3 minuter, och därefter dödas genom halshuggning. Deras hjärnor var sedan snabbt men försiktigt bort från skallen och kyldes i iskall normal saltlösning under 5 min. Det är viktigt att låta hjärnan svalna för denna tid före dissekera MAV så att MAV kan separeras från ytan av cortex (toppen av skiktet I). Hjärnan placerades därefter i botten av en glas Petriskål vilar på is som var full (1 cm djup) av iskall normal koksaltlösning eller 0,1 M natriumfosfat-buffrad saltlösning pH = 7,4. All dissektion sker med hjärnan för det mesta nedsänkt i saltlösning. 1. Avlägsnande av tallkottkörteln <ol><li> Placera hjärnan ryggsidan uppåt (i förhållande till botten av petriskålen). Tallkottkörteln är belägen på den mest kaudala ventrala regionen mellan de två halvkloten bara rostralt till than lillhjärnan (tallkottkörteln fördjupning) och är strax under eller på ytan av meningerna över colliculi. Ta tallkottkörteln först använda två små pincett böjd spets. Det är rosa färg som cortex men ofta omgiven av resterna av blod och blodkärl rest från hjärnan bort. </li></ol> 2. Avlägsnande av MAV <ol><li> Vänd hjärnan över &quot;upp och ner&quot; och separera ryggraden artär, mindre artärer och meningerna täcker pons från hjärnhinnorna och kärlsystem framhjärnan. Avlägsnande av framhjärnan MAV startas därefter. Det är viktigt att börja ventralt i dissektion processen. De stora stora trafikleder av kretsen av Willis, mellersta cerebrala artärer (MCA) och främre artärer är den starkaste och fungerar som &quot;byggnadsställning&quot;, genom vilken de mindre ytliga artärer och arterioler i pial membran kan sedan avlägsnas från hjärnbarken med återstoden av meningerna. Se recension av Scremin 7 för mmalm visuella representationer och uppgifter om cerebrala ytan kärlsystemet. </li><li> Från och med antingen halvklotet, använd små pincett böjd spets för att avskilja den bakre kommunicerande artären bara posteriort om carotis interna situation. Således skiljer de mer främre och bakre arteriella träd framhjärnan. Upprepa samma process för den kontralaterala hemisfären. </li><li> Gripa MCA och den främre artären med tången, dra försiktigt i en anterior-dorsala riktning så att MAV täcker den ventrala främre cortex (piriform, olfaktorisk tuberkel) lyfts över och runt det olfaktoriska området. Detta tar bort mycket av MAV täcker främre kortex (cingulerade och orbital). </li><li> Vrid hjärnan i 45 till 90 ° vinkel mot petriskål. De laterala, mer främre regioner i MAV kring de laterala kortikala regionerna (granulat öar, sekundär somatosensoriska och hörselbarken) kan befrias från hjärnbarken genom att ta tag MCA och tillhörande Artertalet och försiktigt dra dorsalt längs cortex. Om nödvändigt, kan ändarna av tången användas för att lyfta och frigöra de stora artärerna från cortex under dissektion. </li><li> Nu bort mer bakre laterala regioner i Mav. (Obs, är det bäst att byta från en halvklotet till den andra under denna skörd för att säkerställa att den MAV förblir kall och släckt. Även om motstånd frigöra MAV från cortex påträffas på en halvklotet byta till den kontralaterala hemisfären tillfälligt och sedan gå tillbaka till den ursprungliga halvklotet senare.) </li><li> För att ta bort de mest dorsala regioner MAV omger den primära somatosensoriska och motoriska cortex vända hjärnan ryggsidan uppåt (i förhållande till botten av petriskålen). Att slutligen frigöra MAV från hjärna, använd ändarna av tången längs sagital sinus. Denna del av skördade MAV kan antingen hållas temporärt i iskall saltlösning tills provning och analys eller fryst för senare bearbetning. Oftaden MAV täcker de mest posteriora / kaudal regioner i hjärnbarken (entorhinal, visuell och mest kaudalt auditiva cortex) förblir fäst till cortex. Dess avlägsnande visas senare i videon när MAV mellan retrosplenial cortex och ligger över colliculi dissekeras. </li></ol> 3. Avlägsnande av koroid plexus <ol><li> Placera hjärnan ryggsidan uppåt och håll på plats med de större pincett Skjut mindre tång ner genom mittlinjen mellan hjärnhalvorna och sedan använda ändarna för att punktera genom cortex och corpus callosum (≈ -3,3 mm från bregma) i toppen av mittlinje hippocampus. </li><li> Använd pincett för att dra cortex med callosum bort från den dorsala hippocampus och septum, exponerar det mesta av den laterala ventrikeln. Koroidea plexus kan lokaliseras och identifieras av den vågiga röda linjen som avgränsar den stora artären som kör dess längd. Använd de två ändarna av tången att bända sidoväggarna hos den tredje Ventricle och förstora den på den mest kaudala änden (≈ -4,3 mm från bregma 8). </li><li> Med hjälp av små pincett, dra den här änden av koroidea plexus gratis. Gå sedan till mycket främre regionen mellan septum och caudatus / putamen (mest rostral utsträckning ≈ 1,6 mm från bregma) och med pincetten förstora denna del av kammaren och dra koroidea plexus gratis. Utför samma procedur på den kontralaterala hemisfären för att få den andra kvarvarande koroidea plexus. Återigen denna vävnad kan antingen hållas temporärt i iskall saltlösning tills provning och analys eller fryst för senare bearbetning. </li></ol> 4. Avlägsna de återstående MAV i den 3: e Ventricle Ovanpå Thalamus och Colliculi samt att på de mer caudal regionerna Cortex, inklusive Retrosplenial, hörbara och syncentrum <ol><li> Ta hela hippocampus från båda hjärnhalvorna exponerar MAV över thalamus och colliculi. Avlägsnandet avdenna del av MAV är mycket mindre svårt än avlägsnandet av MAV över cortex. </li><li> Dra den här delen av MAV gratis genom att fatta tag i större kärl överliggande den främre delen av thalamus och dra försiktigt kaudalt. Denna vaskulaturen är ansluten till ovan collicular nätverket och levererar blod till den dorsala hippocampus och dorsala thalamus nätverk. Dra bort kaudalt och gradvis frigör supracollicular nätverket tills den når den sista delarna av kaudala arteriella cirkel vaskulatur. Vid denna punkt, måste mer åtgärder vidtas för att avlägsna eventuell kvarvarande bakre ventrala MAV på ytan av den granulära retrosplenial, primär auditiv och visuell cortex. Som med den andra delen av MAV omfattar mer främre delarna av hjärnbarken, kan denna vävnad kan antingen hållas tillfälligt i iskall saltlösning tills provning och analys eller frystes för senare bearbetning. Eventuellt återstående bakre ventrala MAV skördas med denna andra MAV avsnitt bör tas bort end läggas till i första dissekerade MAV avsnitt som cortex om de ska analyseras separat. </li></ol> 5. Representativa resultat När dissektion utförs korrekt, bör de resulterande MAV vävnaderna vara två intakta enheter som väger cirka 35 till 45 mg totalt. Den ursprungligen dissekerade MAV kring de flesta av cortex bör väga omkring 25 mg och MAV täcker thalamus, bör colliculi och occipital cortex väger ca 15 mg. Det bör vara något rosa i färg från den kvarvarande blodet i kärlsystemet. Det bilaterala koroidea plexus skördade bör vara i två intakta vävnadsprover med varje väger 1 till 2 mg. Även överflödigt vatten kan avlägsnas från MAV före lagring eller bearbetning med silkespapper som den som används i lins rengöring, för att undvika vävnadsförlust är det inte en bra idé att ta bort överflödigt vatten från dissekerade koroidea plexus. Figur 1 genererades för jämföra uttryck profil<html> es i tre regioner (striatum, parietala cortex och MAV) under kontrollförhållanden med Agilent-014.879 Hela Rat Genome 4x44K 60mer oligonukleotid kedjor (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, Kalifornien, NCBI GEO Accession # GPL7294, GSE23093 och GSE29733 som är närvarande vid NCBI GEO förvaret). De två kurvorna i figuren visar bildmässigt uttrycket i 1) striatum jämfört med parietala cortex och 2) MAV jämfört med parietala cortex. Det är uppenbart att striatum och parietala cortex är mycket närmare besläktade med varandra än Mav. Uppgifterna som jämför koroidea plexus med MAV kommer att presenteras i en kommande publikation. Det är emellertid troligt att uttrycket profilerna i MAV och koroidea plexus är mer nära besläktade med varandra än de är till striatum och parietala cortex. Figur 2 visar differentiell genexpression respons på hypertermi (EIH) kontra Amph i MAV jämfört att styra och varandra. innehåll &quot;&gt; Den genuttrycket av mer än 11.000 gener med officiella NCBI gen symboler i MAV av kontrolldjur jämfördes med dem som registrerats i striatum och parietala cortex. Över 2000 av dessa gener hade en 2,5-faldig eller mer olika uttryck i MAV jämfört med de två neuronala-rika vävnader, och 550-generna hade en 10-faldigt större skillnad i uttryck. Drygt 40% (253) av dessa var gener med en minskad expression av 10-faldig eller mer i MAV och avsåg neuronal funktion. fanns 343 gener med över en 10-faldig eller större uttryck i MAV jämfört med parietala cortex och striatum. Denna lista av gener användes som en utgångspunkt som att bestämma gener med mycket hög anrikning i MAV. Tabell 1 förtecknas de gener med större än 15-faldig expression i MAV jämfört med parietala cortex och striatum och kategoriserar dem med avseende på funktion. Många av dessa gener var relaterade till det vaskulära systemet och / eller immunsystemet. Dessa types av gener bör berikas ca 5 - till 10 - faldigt till följd av den ökade vaskulaturen själv och blod närvarande i den. Men även för gener med kända generella vaskulära funktioner, en ökning över 15-faldigt indikerar anrikning i MAV. Det fanns också många gener med mycket stora vikning förändringar som var, 1) extracellulära matrisproteiner (inte specifikt relaterade till vaskulatur), 2) lösta transportörer och 3) lipid och retinsyra ämnesomsättning. Liksom, få tillväxt och differentiering gen eller transkriptionsfaktorer hittades. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figur 1. Jämförelse av genuttryck i MAV med parietala cortex och striatum. Volcano diagram jämföra nivåerna genuttryck i parietala cortex och striatum (övre kurva) och parietala cortex och MAV (undre kurva). De röda symboler anger de gener som är signifikant olika betwesv regioner vid p &lt;0,05 och har en 1,5-faldig eller större differentiellt uttryck mellan regioner. De svarta symbolerna representerar gener som inte signifikant skiljer mellan regionerna (p&gt; 0,05) och är mindre än 1,5-faldigt som skiljer sig i uttryck. De rosa symboler visar gener med mindre än en 1,5-faldig skillnad i uttryck men statistiskt signifikant skillnad vid p &lt;0,05. De gula symboler identifiera gener som har en 1,5-faldig eller större uttryck men denna förändring är inte statistiskt signifikant vid p &lt;0,05. Förkortningar Amph amfetamin EIH miljömässigt inducerad hypertermi MAV hjärnhinnor och tillhörande cerebrala vaskulaturen Norm normotermisk kontrollerar <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figur 2. Effekter av hypertermi och amfetamin på genuttryck i MAV. Volcano tomter jämföragenuttryck nivåer i MAV efter saltlösning, EIH eller Amph vid 3 timmar tidpunkt. De röda symboler anger de gener som bedöms vara väsentligt annorlunda medan de svarta prickarna / cirklar representerar gener som inte signifikant skiljer sig åt mellan regionerna. Ytterligare statistisk analys användes för att verifiera vilken uttryckning skillnader mellan kontroll och behandlingar var faktiskt statistiskt signifikant. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Brain Uttryck </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symboler </td><td fo:width="1.5in"> Vävnadsspecificitet eller rapporterade funktion (er) </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> Anxa2 a, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Vaskulatur &amp; hjärta </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> Ccl19, CD74 a, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Immunsystemet </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinoinsyra &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, Gpc3, Nupr1, OMD, Slamf9 Pcolce, Tmem27, Tspan8 </td><td> Extracellulär matrix och cell-cell-korsningar </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; lösta Homeostasis </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Utveckling och transkriptionsreglering </td></tr><tr><td> &gt; 50-faldig </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Okänt &amp; Övrigt </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td&gt; <td> Anxa1 a, Angpt2, C6 a, GJB2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Vaskulatur &amp; hjärta </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, CD14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Immunsystemet </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, FMOD, MGP, Nid2 </td><td> Extracellulär matrix och cell-cell-korsningar </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, SCT, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; lösta homeostas </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinoinsyra &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> BMP6, Casp12, DAB2, Folr1, IGF2, Msx1, Tbx18, TWIST1, Wnt5b </td><td> Utveckling och transkriptionsreglering </td></tr><tr><td> 30 till 50-faldig </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Okänt &amp; Övrigt </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> ADM, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf en, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip en, Vamp5, VTN </td><td> Vaskulatur &amp; hjärta </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, CTSC, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, FMO1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 </td><td> Immunsystemet </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Adamtsl4, Col1a1, Crb3, DPT, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, FN1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, Timp3 </td><td> Extracellulär matrix och cell-cell-korsningar </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; lösta homeostas </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 </td><td> Retinoinsyra &amp; Lipid Processing </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Utveckling och transkriptionsreglering </td></tr><tr><td> 15 till 30-faldig </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Nät1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Okänt &amp; Övrigt </td></tr></tbody></table> * Gener i tabellen måste vara både mer än 15-faldigt över uttryck i striatum och Parietal cortex och 5-faldigt över bakgrundsnivåerna. Det lägre av de två förhållandena (MAV / striatum eller MAV / parietala cortex) för varje gen användes för gruppering. a Gener finns i endotelceller utan också sannolikt spelar en viktig roll vid mediering immunsvar. Tabell 1. Gener med en 15-faldig * eller mer ökat uttryck i MAV jämfört med striatum och parietala cortex.

<ol>
	<li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature.">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li><li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature,+striatum,+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure.">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li><li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology.">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li><li>Oldfield, B. J. M., Michael, J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 391 (1995).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li><li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions:+?+challenges+in+health+and+disease.">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li><li>Scremin, O. U., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 3 (1995).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1995).</li><li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion:+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity.">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+control+of+cerebral+circulation.">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, 25-33 (1985).</li><li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone.">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li><li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers.">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li><li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+Fluid+Transport:+a+Lymphatic+Perspective.">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li><li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate.">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li><li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans,+non-human+primates+and+other+mammalian+species.">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).</li><li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain.">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li><li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus.">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li><li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury.">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li><li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

Vi har inget att lämna ut. Arbetet redovisas här inte nödvändigtvis de åsikter som Food and Drug Administration.

Tekniska aspekter på MAV och koroidea plexus dissekering Det är kritisk under dissektion av MAV att hjärnan &quot;nedsänkt&quot; det mesta i normal saltlösning eller natriumfosfat-buffrad saltlösning. Låta MAV och cortex att dehydratisera under dissektion kommer att resultera i MAV vidhäftar tätt till kortikalt skikt I. Detta kommer att öka mängden av kortikal vävnad skördas med MAV och / eller resultera i oförmåga att avlägsna dessa vidhäftande MAV sektioner från cortex. Dessutom är tålamod krävs under dissekering. Återigen, om man stöter visst motstånd i att ta bort MAV från cortex i en hemisfär under dissekering, växla till den andra hemisfären och gå tillbaka senare till sidan där motståndet påträffades. Denna metod tar lite praxis att perfekt och kräver cirka 5 till 15 &quot;praxis&quot; dissektioner innan en konsekvent enhetlig skörd av MAV vävnad uppnås. Sättet att starta dissektionen och Removär av MAV vid arteriella cirkeln vid basen av hjärnan underlättar avlägsnandet av meningerna genom att använda större vaskulatur som stöd &quot;byggnadsställningar.&quot; Mycket av blodet ursprungligen i MAV vaskulaturen efter avlivning ska matas ut under dissektionen, och mindre än 5% av RNA skördas från MAV bör vara av blod ursprung. Det är möjligt att avlägsna nästan allt blod genom perfusion djuret med 50 till 70 ml saltlösning, med användning histologiska tekniker, före dekapitering och hjärnan avlägsnas. Emellertid är det då mycket svårare att visualisera MAV vävnader vid dissekering. De tre mest sannolika källor till &quot;kontaminering&quot; av MAV vävnaderna är tallkottkörteln, kortikal skiktet I vävnad och återstående luktloben vävnad, men det är också möjligt att få hypofysen vävnad i beredningen. Pineal föroreningar i MAV detekteras av MAV innehåller en rund 1 till 2 sfär mm diameter som är färgad mörkt röd. Den primära funktionenav tallkottkörteln normalt anses vara helt annorlunda från Mav. Dess primära funktion är att producera melatonin, som reglerar aspekter av dygnsrytmen 9, och i lipoxygenation 10 av lipid-prekursorer. Även genen Lox, som reglerar lipoxygenasaktivitet, ansågs vara närvarande hos vuxna främst tallkottkörteln 10, våra resultat tyder på att det också är konsekvent närvarande vid signifikanta nivåer i MAV. Resterande kortikala eller luktloben föroreningar resulterar i rosa banliknande MAV vävnad har några 1 till 2 vävnader mm tätare som är mycket blekare i färgen inneslutna i den. Detta kan upptäckas genom &quot;flyter&quot; på MAV på ytan av bufferten, och därefter avlägsna tyngre kortikala eller glödlampa vävnader med de två dissekera pincett. Om förorening av MAV från kortikal skiktet I vävnad, hypotalamus vävnad eller tallkottkörteln är närvarande, då flera gener kommer att ha en betydandebetydligt högre uttryck än vad som normalt är närvarande i en &quot;ren&quot; dissektion. Kontaminering av MAV med tallkottkörteln kommer att resultera i högre uttryck av arylalkylamin-N-acetyltransferas (AANAT) som är nödvändig för melatonin syntes. Tyvärr, om tallkottkörteln kontaminering sker under MAV dissektion, kommer nivåerna av Lox i MAV inte kunna bestämmas noggrant. Kontaminering av MAV med kortikal vävnad kommer att resultera i högre uttryck av neuron-specifika gener såsom hippocalcin (HPCA), parvalbumin (Pvalb) och / eller neuronal pentraxin receptor (Nptxr). Kontaminering av MAV med hypotalamus vävnad kommer att resultera i högre uttryck av tillväxthormon 1 (GH1), proopiomelanokortin (POMC). I händelse av att någon kontaminering existerar i de skördade vävnader, kan de flesta av dessa gener kan identifieras och inte används i genuttryck analys. Detta är särskilt viktigt för gener som är närvarande i den cirkulerande blood som fortfarande kan finnas i MAV eller plexus koroidea. Interpretting uppgifter genuttryck från skördad MAV och plexus koroidea Den cerebrala ytan (ytlig) vaskulatur tillsammans med associerade meninger (MAV) och koroidea plexus är nödvändiga för cerebralt blodflöde och cerebrospinalvätska (CSF) homeostas 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Vävnaden skörden är lämplig för biokemiska och fysiologiska analys och MAV har visat sig vara känsliga för skador produceras av amfetamin och hypertermi 1,2 med genuttryck analys. Dessa resultat står i proportion till vad som är också känt om allvarliga hypertermi och exponering för amfetamin till hjärnan kärlsystemet i allmänhet 18,19,20. Kliniska data stöder uppfattningen att den subdural kärlsystemet är känslig för skador av amfetamin och metamfetamin 21,22. Liksom, inklusive de större och mindre cerebrala vasculaturesning de i pial lagret av meningerna som skördats i MAV är potentiellt stort intresse vid utredning concussive typer av skallskada 23,24 25. Den nuvarande genuttryck profil gav från MAV indikerar att pial och eventuellt spindelvävshinnan meningeal membran kan spela en större roll än väntat i regleringen CSF sammansättning. I framtiden, genom användning av dissektionsmikroskop tekniker, kan det vara möjligt att ytterligare separera vävnaderna innefattande MAV så att pial och spindelvävshinnan membran kan separeras från den större arteriella vaskulaturen närvarande och eventuellt från varandra. Detta kommer att möjliggöra en bättre tolkning av funktionen hos var och en av dessa 3 komponenter i skördade MAV.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens / utrustning </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (tillval) </td></tr><tr><td> Normal saltlösning (9 g saltlösning / 1 Liter H 2 O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissektion buffert </td></tr><tr><td> 0,1 M natriumfosfat pH 7,4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Dissektion buffert </td></tr><tr><td> Bone Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Skallbenet avlägsnande </td></tr><tr><td> Tång-böjd spets (4 &quot;lång &amp; 0,8 mm bred spets) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 eller RS-5137 </td><td> Dissekera pincett </td></tr><tr><td> Tång-rak spets (5,5 &quot;lång) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 eller RS-8104 </td><td> Thumb Dressing pincett </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Denna videopresentation skapades för att visa en metod för att skörda de två viktigaste högst vaskulära strukturer, som inte är bosatta i hjärnan korrekt att stödja framhjärnan funktion. De är den cerebrala ytan (ytlig) vaskulatur tillsammans med associerade meninger (MAV) och koroidea plexus som är nödvändiga för cerebralt blodflöde och cerebrospinalvätska (CSF) homeostas. Vävnaden skördas är lämplig för biokemiska och fysiologiska analys och MAV har visat sig vara känsliga för skador produceras av amfetamin och hypertermi 1,2. Som väl de större och mindre cerebral vasculatures skördats i MAV är potentiellt stort intresse vid utredning concussive typer av skallskada. Den MAV dissekerade i denna presentation består av pial och några av spindelvävshinnan membran (mindre dura) av meningerna och större och mindre cerebral yta kärl. Koroidea plexus dissekerade är den struktur som finns i Lateral ventriklama såsom beskrives av Oldfield och McKinley 3,4,5,6. De metoder som används för att skörda dessa två vävnader underlättar också skörden av regionala kortikal vävnad saknar hjärnhinnorna och större cerebral yta kärlsystemet, och är kompatibel med skörd andra hjärnan vävnader såsom striatum, hypotalamus, hippocampus, etc. dissektion av de två vävnaderna tar 5 till 10 minuter totalt. Genuttrycket nivåer för dissekerade MAV och åderhinnan plexus, som visas och beskrivs i denna presentation finns på GSE23093 (MAV) och GSE29733 (koroidea plexus) vid NCBI GEO förrådet. Dessa data har varit, och är under, för att bidra till att ytterligare förstå funktionen hos MAV och åderhinnan plexus och hur neurotoxiska händelser såsom allvarlig hypertermi och Amph påverka deras funktion.

Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Denna video presentation visar en metod för att skörda de två viktigaste högst vaskulära strukturer som stödjer framhjärnan funktion. De är den cerebrala ytan (ytlig) vaskulatur tillsammans med associerade meninger (MAV) och koroidea plexus som är nödvändiga för cerebralt blodflöde och cerebrospinalvätska (CSF) homeostas.

En visuell beskrivning av dissektion av cerebral Surface kärlsystemet och associerade hjärnhinnor och koroidea Plexus från råtthjärna

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Fokal cerebral ischemi modellen genom endovaskulär suture Ocklusion av Mellanöstern Cerebral artär i Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visual evoked potential inspelning i en råttmodell av experimentell Optic Nerve Demyelinisering

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Observation av ciliarrörelse av plexus chorioideus epitelceller<em&gt; Ex vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel steg Dissection protokoll för hel-mount Framställning av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Sublimation of DAN Matrix for the Detection and Visualization of Gangliosides in Rat Brain Tissue for MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sublimering av DAN Matrix för detektion och visualisering av gangliosider i råtthjärnvävnad för MALDI Imaging Mass Spectrometry

Sample preparation is key for optimal detection and visualization of analytes in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Imaging Mass ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Inspelning synaptisk plasticitet i akut Hippocampus skivor underhålls i en små volymer återvinning - Perfusion- och nedsänkning-typ kammaresystem

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

Live avbildning av primära hjärnbarken celler använder ett 2D kultur

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Intra-arteriell leverans av neurala stamceller till råtta och mus hjärnan: Ansökan till cerebral ischemi

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Mätning efter stroke cerebral ödem, infarkt zon och blod -hjärnbarriär nedbrytning i en enda uppsättning gnagare hjärnprover

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Extraktion och dissekering av den domesticerade grishjärnan

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...